核基质蛋白LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织中的差异表达

目的:采用比较蛋白质组学方法研究正常乳腺和乳腺癌组织中的差异表达核基质蛋白(nuclear matrix protein,NMP),并在蛋白质水平对差异蛋白LaminA/C进一步地确证。方法:分别提取4例正常乳腺和乳腺癌组织的核基质蛋白,进行双向凝胶电泳。分离出的差异表达蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,获得肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting,PMF),应用Mascot搜索引擎在NCBInr数据库中进行检索鉴定。最后用免疫组化和Western blotting方法验证差异蛋白LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织的相对表达量。结果:经双向凝胶电泳和质谱鉴定,正常乳腺组含有(904±58)个蛋白质点,乳腺癌组检测出含有(944±70)个蛋白质点,共发现27个差异表达蛋白,成功鉴定出12种蛋白,其中包括LaminA/C。用免疫组化方法分析LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织各20例中的表达,结果显示LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织中的阳性率分别为15%(3/20)和40%(8/20),P<0.05。用Western blot方法观察LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织各10例中的表达,结果显示乳腺癌组中LaminA/C/β-actin灰度值比值为0.40±0.13,是正常乳腺组LaminA/C/β-actin灰度值比值(0.21±0.13)的1.91倍(P<0.05)。结论:LaminA/C在乳腺癌组织中表达明显增高,LaminA/C蛋白在乳腺癌的发生和发展中可能起一定的作用。

核纤层蛋白LaminA/C负性调控ASCs增殖促进应力诱导脂肪再生的实验研究

目的探索核纤层蛋白LaminA/C对脂肪来源间充质干细胞(Adipose-derived stromal cells,ASCs)机械敏感性的调控作用,及其在应力诱导脂肪再生中的作用机制。方法构建大鼠预扩张脂肪瓣(Expanded Prefabricated Adipose Tissue,EPAT)负压吸引模型,于术后1、4、8周取材制备标本,行组织免疫印迹及免疫化学检测核纤层蛋白(Lamins)表达量变化,用以分析核纤层蛋白表达与应力诱导脂肪再生的相关性;构建体外LaminA/C过表达慢病毒载体并转染ASCs,行体外静态拉伸ASCs处理并采用细胞免疫印迹及免疫荧光检测ASCs增殖程度,用以明确LaminA/C对ASCs增殖的调控作用。结果体内实验发现,负压作用早期,大鼠EPAT内ASCs增殖增多,与此同时,脂肪瓣内LaminA/C表达量明显下降,LaminB1、LaminB2的表达则无明显差异;体外实验发现,过表达LaminA/C可显著抑制体外静态机械应力对ASCs增殖的促进作用。结论新型力学感受器核纤层蛋白通过负性调ASCs增殖参与应力诱导脂肪组织再生过程。

切断部分背根对脊髓Ⅱ板层c-jun,c-fos表达的影响——免疫组织化学研究

目的 探讨 c- fos、c- jun与脊髓可塑性的关系。方法 将成年雄猫 2 5只分为正常组、假手术后 3天组 ,假手术后 10天组、单侧备用根术 (切除一侧 L1 - L5,L7- S2 背根节 ,保留 L6为备用根 )后 3天组和单侧备用根术后 10天组 (每组 5只 )。取各组动物的 L5脊髓用 4%多聚甲醛固定后制作 2 0μm厚冰冻切片。每例动物间隔取 5张切片 ,分别用 c- fos (稀释度 1∶ 30 0 0 ,Sigm a) ,c- jun (稀释度 1∶ 10 0 0 ,Santa Cruz)抗体行 ABC免疫组化染色。 DAB棕色反应显色。结果 正常组及假手术组猫脊髓灰质各层内 ,c- jun的免疫阳性反应物主要出现在神经元胞核 ,但胞浆亦有弱阳性反应。部份去背根后 3天及 10天 ,单侧备用根手术组 板层 c- jun阳性神经元的数量及反应强度均较正常组及假手术者明显增多 (P<0 .0 5 )。但术后 3天与 10天组间无显著差异 (P>0 .0 5 )。与 c- jun比较 ,各组脊髓内均未见 c- fos的阳性细胞。结论 切断部分背根导致脊髓 板层 c- jun表达上调 ,提示 c- jun可能与脊髓 板层可塑性有关。

C/O测井仪器的灵敏探测位置

利用蒙特卡罗数值模拟技术,研究了C/O测井仪不同源距探测器对不同厚度薄层的响应,以及地层孔隙度、仪器直径变化时,长、短源距探测器对同一薄层的响应。计算结果表明,C/O测井仪的灵敏探测位置在源和探测器之间,距探测器中心的垂直距离约12 cm,并且该灵敏探测位置不受仪器、井眼或地层性质的影响。

乌塌菜Vc含量动态变化的初步研究

研究了乌塌菜不同品种、不同生育期、不同叶片、叶柄与叶片的Vc含量。结果表明:乌塌菜不同品种间叶片的Vc含量存在显著差异,但叶柄间的Vc含量差异不大;莲座期叶片的Vc含量均显著高于幼苗期叶片的Vc含量,莲座叶的Vc含量均明显高于心叶的Vc含量,叶片的Vc含量均显著高于叶柄的Vc含量。

Lamin A/C在干细胞表观遗传药理学中的调控作用

Lamin A/C是核纤层的主要组成部分,在干细胞表观遗传调控中的重要作用近年来越来越被认识。Lamin A/C不仅可以起到维持核内稳态和保护染色质的作用,同时也可以作为机械刺激细胞核内的反应器,将力学信号传导至核内,可直接或间接参与基因的转录调控。该文主要综述微环境中力学信号对干细胞Lamin A/C的调节,以及Lamin A/C的功能变化对染色体修饰、基因表达调控的影响。

左西孟旦对扩张型心肌病的作用及机制

目的研究左西孟旦如何通过调控LMNA致病基因作用于扩张型心肌病的机制。方法通过培养HCM细胞,借助转染反义干扰LMNA(si-LMNA)基因和反义干扰核糖核酸(siRNA ctrl)基因分别作为si-LMNA组、siRNA ctrl组、si-LMNA+左西孟旦组,应用无血清培养基、正常血清培养基〔10%胎牛血清(FBS)培养基〕及左西孟坦处理液培养转染后的细胞,通过MTT比色法检测细胞存活率,定量多聚酶链反应(qPCR)、Western印迹法分析心脏钠通道蛋白(SCN) 5A蛋白的变化。结果 si-LMNA降低LMNA蛋白的表达,沉默的LMNA基因抑制人心肌细胞HCM的存活率;加入左西孟旦可逆转上述趋势。左西孟旦可逆转LMNA基因沉默引起的SCN5A蛋白的降低。结论左西孟旦作用于LMNA基因上调SCN5A基因的表达,这可能是其治疗扩张型心肌病的机制之一。

血管紧张素在脑室周器官及丘脑下部的分布及其对饮水行为的神经内分泌控制

本文以电破坏穹窿下器官,以霍乱毒素—辣根过氧化酶追综及[[^(14)C]]-脱氧葡萄糖放射自显影电子计算机图象程序处理等综合技术,观察Sprague~Dawley系大鼠在脑室及静脉内注入血管紧张素Ⅱ后,脑室周器官及丘脑下部的行为神经内分泌作用。结果表明:穹窿下器官、正中隆起、弓状核、视上核、室旁核及神经垂体的[[^(14)C]]-脱氧葡萄糖摄取相对视密度明显增高,提示这些结构在血管紧张素致渴饮水行为中,调节水盐平衡的神经内分泌作用。穹窿下器官是感受血管紧张素最敏感结构之一,它与丘脑下部的神经内分泌核群密切联系。电破坏穹窿下器官则大鼠失去在迷宫内快速奔跑饮水行为。

地西他滨逆转肺腺癌厄洛替尼耐药的作用及机制

目的探讨地西他滨逆转人肺腺癌HCC827/ER细胞厄洛替尼耐药的作用及机制。方法地西他滨、厄洛替尼或联合用药处理HCC827/ER细胞株,MTT法、BrdU、克隆形成实验检测细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞周期相关蛋白表达;DNA甲基化检测laminA/C启动子区甲基化水平。结果地西他滨联合厄洛替尼可明显抑制HCC827/ER细胞增殖,迁移和侵袭能力;抑制laminA/C基因启动子区甲基化水平,促进laminA/C蛋白表达;抑制细胞周期相关蛋白CyclinA2、CyclinB1、CyclinD1、CDK4、CDK6表达,促进p21蛋白上调,阻滞细胞周期。结论地西他滨通过促进laminA/C表达、细胞周期阻滞诱导耐药细胞死亡,逆转肺腺癌HCC827/ER细胞对厄洛替尼的耐药。

LMNA基因与家族性扩张型心肌病

扩张型心肌病是儿童心肌病的常见类型,有明显的遗传倾向,具有家族聚集性.已发现有20多种基因突变与家族性扩张型心肌病有关,其中lamin A/C基因是最常见的致病基因之一.