部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓

应用超微结构定量法探讨针剌对猫脊髓后角第Ⅱ板层的可塑性影响

本实验采用双侧备用根模型(切断双侧L_1-L_5,L_7—S_2脊神经背根,保留L_6背根),针刺动物一侧后肢L_6背根支配范围内的足三里、悬钟、伏兔和三阴交四穴,应用电镜超微结构定量方法,观察电针刺激穴位28天后,对脊髓后角第Ⅱ板层终末可塑性的影响。结果显示,第Ⅱ板层单位面积中复合终末的数量,针刺侧比未针刺侧增多32％。提示针刺能促进完好背根纤维更快地侧支出芽和重建突触联系,以代偿损伤的背根纤维终末。本文也对针刺后第Ⅱ板层中复合终末的形态、面积,简单终末的数量以及电针刺激的某些条件进行了初步的探讨。

KN-93抑制脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

[目的]探讨钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(LTP)的诱导和维持中的作用。[方法]用钨丝微电极在脊髓腰膨大部背角浅层神经元细胞外记录C-纤维诱发电位,强直刺激坐骨神经诱导背角C-纤维诱发电位的LTP。在LTP诱导前后,在暴露的脊髓表面局部给予CaMKⅡ的选择性抑制剂KN-93,观察C-纤维诱发电位的变化。[结果]50μmol/L的KN-93不影响脊髓背角C-纤维诱发电位的幅度,但可完全阻断脊髓背角LTP的诱导(n=6)。KN-93呈时间依赖性翻转脊髓背角LTP。在LTP诱导后30min,50μmol/L的KN-93对LTP的早期表达无影响(n=4),而100μmol/L的KN-93在用药后,LTP逐渐降低,于3h降至对照水平(n=6);在LTP诱导后1h脊髓局部给予100μmol/L的KN-93,7例动物中有5例LTP被抑制;但同样浓度的KN-93,在LTP诱导后3h,不能翻转业已建立的LTP(n=5),且增加KN-93的浓度至200μmol/L也不能抑制脊髓背角LTP。[结论]CaMKⅡ参与脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持,但KN-93对晚期LTP无抑制作用。

5-羟色胺增强甘氨酸激活的大鼠脊髓背角浅层神经元的全细胞电流

应用制霉菌素穿孔膜片钳全细胞记录技术研究了5－HT对急性分离的大鼠脊髓背角浅层（Ⅰ、Ⅱ层）神经元甘氨酸激活的全细胞电流的调控作用。实验结果表明：（1）在脊髓背角浅层神经元，甘氨酸作用于士的宁敏感型的甘氨酸受体，在钳制电位为-40mV时，可引起内向电流（IGly）；（2）5－HT呈浓度依赖性的增强Gly反应；（3）5－HT的增强作用既不改变IGly的平衡电位，也不影响Gly与受体的亲和力；（4）5－HT2受体激动剂α-甲基-5－HT能模拟5－HT的增强效应；而5－HT2受体的拮抗剂ketanserine可阻断5－HT对IGly的增强作用；（5）蛋白激酶C（PKC）的抑制剂chelerythrine可抑制5－HT对IGly的增强作用。本研究的结果说明：5－HT可呈浓度依赖性地增强大鼠脊髓背角浅层神经元的IGly，5－HT经5－HT2受体介导其对IGly的调控，脊髓背角浅层神经元内经PKC的信号转导途径在5－HT对IGly的增强效应中起重要的作用。本研究的结果提示5－HT和Gly的相互作用在脊髓水平的伤害性信息传递和调控过程中可能具有重要的意义。

脊髓Ⅱ板层NOS,BDNF和GDNF阳性神经膨体的组织化学双标研究

目的 :为探讨神经膨体是否同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF ,以间接了解背根节 (dorsalrootganglion ,DRG)小细胞是否同时含有这些物质 .方法 :用成年猫L3 脊髓节段制作 2 0 μm厚的冰冻切片并分两组 .一组先行NOS酶组化染色 ,NBT兰色反应显色 ;继之用BDNF抗血清以免疫组化ABC法行双标染色 ,DAB棕色反应显色 .另组先用BDNF抗血清以免疫组化ABC法染色 ,显色同前 ;随后用GDNF抗血清同前染片 ,TMB兰色反应显色 .常规脱水透明封片 .结果 :在NOS与BDNF双标组 ,脊髓Ⅱ板层内有大量NOS阳性 (呈兰色反应 )和BDNF阳性 (呈棕色反应 )神经膨体 ,但大多为单标染色 ,双标染色者极少 ;BDNF和GDNF双标组阳性神经膨体的标记与NOS和BDNF组相类似 ,均主要是大量单标的神经膨体 ,双标者少 .结论 :脊髓Ⅱ板层虽有NOS ,BDNF和GDNF阳性神经膨体 ,但各自来源有所不同 ,即大多数DRG小细胞并非同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF .提示以上

两种切片法对脊髓Ⅱ板层BDNF免疫组化反应的影响

目的 :为比较不同组织切片方法对免疫组织化学结果的影响 .方法 :用成年SD大鼠L5脊髓分别制成冰冻 (2 0 μm)和石蜡 (5 μm)切片 ,用兔抗BDNF多克隆抗体作ABC免疫组化染色 .结果 :冰冻切片组背角Ⅱ板层除有大量BDNF阳性神经膨体外 ,尚可见一些阳性神经元 .石蜡切片组则仅有大量阳性神经膨体 ,而几乎未见阳性神经元 .结论 :不同制片法对免疫组织化学结果有影响 ,即冰冻切片可能较石蜡切片具有更高的免疫反应敏感性 .本文中石蜡切片较低的BDNF免疫活性可能与其制作过程中有机溶剂 (酒精、二甲苯 )的使用和

天麻素对小鼠炎性痛脊髓背角自发放电抑制作用

目的：探究天麻素（gastrodin or GAS）对炎性痛小鼠诱致的脊髓背角I层神经元自发放电的影响。方法：成年小鼠10只,一侧后足底皮下注射完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant,CFA）制备炎性痛模型后,于6、12、24、48、96、168 h分别观察机械性缩足反射阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）和热刺激缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）的变化。选取出生14~18 d小鼠,按照上述相同方法建立炎性痛模型,24 h后制备脊髓薄片（300μm）,孵育1 h后用全细胞膜片钳技术通过灌流系统给予GAS（300μmol/L）,并探究其对炎性痛脊髓背角I层神经元自发放电的影响。结果：（1）在成年小鼠炎性痛模型中,CFA诱致的痛觉过敏可持续1~2周,在24 h达到高峰;（2）在出生14~18 d小鼠CFA注射24 h后,脊髓背角I层神经元出现显著的自发放电增强现象;（3）GAS可以显著抑制脊髓背角I层神经元自发放电的频率,对幅度无显著作用。结论：GAS对炎症导致的脊髓背角I层神经元自发放电增强具有显著的抑制作用,进而降低神经元的兴奋性,从而达到缓解炎性痛的效果。

猫腰骶背根全切后脊髓Ⅱ板层非典型复合终末神经活性物质的探讨

采用光镜电镜技术探测猫腰骶背根全切后脊髓Ⅱ板层内新出现的一类终末—非典型复合终末(ACT)神经活性物质的性质。实验结果表明:光镜下Ⅱ板层内SP与CCK阳性反应强度早期(7～24天)减弱、范围减小;晚期(2—4.5月)有所回升。m-ENK与5-HT阳性反应强度和范围早期无变化,晚期增加。电镜下分别找到SP、CCK、m-ENK,5-HT阳性的ACT,表明至少存在这四种神经活性物质类型的ACT。本文讨论了四种ACT的机能意义和可能的来源。

脊髓背角浅层抑制性中间神经元在瘙痒发生机制中的作用研究进展

背景脊髓背角浅层中间神经元与初级传人纤维、背角浅层的投射神经元、来自上位脑结构的下行投射纤维以及其他类型的中间神经元之间形成复杂的局部环路，在感觉信息（如痛觉、触觉和痒觉等）的传导和调节过程中发挥了重要的作用。目的探究脊髓背角浅层抑制性中间神经元在瘙痒发生机制中的作用及其为瘙痒治疗提供的新靶点。内容脊髓背角浅层抑制性中间神经元表达的Bhlhb5抑制性中间神经元（Bhlhb5-expressinginhibitoryinterneurons，B5-I）和神经肽Y（neuropeptideY，NPY）中间神经元分别在“化学痒”和“机械痒”的研究中发挥的作用。趋向瘙痒机制研究的不断深入为其治疗提供了有力的理论支持。