近年来，一种新的恒温核酸扩增方法LAMP法（loop-mediated isothermal amplification），即环介导等温扩增法已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶（Bst DNA polymerase），在恒...近年来，一种新的恒温核酸扩增方法LAMP法（loop-mediated isothermal amplification），即环介导等温扩增法已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶（Bst DNA polymerase），在恒温条件（60～65℃），不到1h的时间里进行核酸扩增，其扩增效率可达到10^9～10^10个数量级，具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点。LAMP法已经被用来快速检测水产动物病原（细菌、病毒、寄生虫）。文章就LAMP法的反应原理、引物设计及其在水产动物病原快速检测中的应用等做简要的综述。展开更多
【目的】建立LAMP法快速鉴定水牛早期胚胎性别体系,为预知性别水牛胚胎移植奠定基础。【方法】分别采用化学裂解法和非化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,对比不同方法对G3PDH基因扩增效果的影响;基于水牛SRY基因和12S r RNA基因分别设计...【目的】建立LAMP法快速鉴定水牛早期胚胎性别体系,为预知性别水牛胚胎移植奠定基础。【方法】分别采用化学裂解法和非化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,对比不同方法对G3PDH基因扩增效果的影响;基于水牛SRY基因和12S r RNA基因分别设计雄性特异性引物及雌、雄性共用引物用于LAMP法胚胎性别鉴定,同时以PCR对LAMP法鉴定结果进行验证。【结果】化学裂解法对水牛早期胚胎DNA具有良好的裂解效果,其有效检出率为94.1%。优化的LAMP法对水牛早期胚胎性别鉴定的准确率与检出率均为100.0%,检测灵敏度为2×10-5 ng。LAMP扩增产物中加入1%SYBR green I,于紫外光下观察,阳性呈绿色,阴性呈淡黄色;自然光下观察,阳性呈黄色,阴性呈橙色。以LAMP法对37枚水牛IVF早期胚胎性别进行鉴定,其中雄性为28枚,雌性为9枚。PCR验证结果与LAMP法鉴定结果一致。【结论】用化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,再根据水牛SRY基因及12S r RNA基因设计引物进行LAMP法水牛胚胎性别鉴定切实可行。展开更多
文摘近年来，一种新的恒温核酸扩增方法LAMP法（loop-mediated isothermal amplification），即环介导等温扩增法已经被开发利用。它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶（Bst DNA polymerase），在恒温条件（60～65℃），不到1h的时间里进行核酸扩增，其扩增效率可达到10^9～10^10个数量级，具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点。LAMP法已经被用来快速检测水产动物病原（细菌、病毒、寄生虫）。文章就LAMP法的反应原理、引物设计及其在水产动物病原快速检测中的应用等做简要的综述。
文摘【目的】建立LAMP法快速鉴定水牛早期胚胎性别体系,为预知性别水牛胚胎移植奠定基础。【方法】分别采用化学裂解法和非化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,对比不同方法对G3PDH基因扩增效果的影响;基于水牛SRY基因和12S r RNA基因分别设计雄性特异性引物及雌、雄性共用引物用于LAMP法胚胎性别鉴定,同时以PCR对LAMP法鉴定结果进行验证。【结果】化学裂解法对水牛早期胚胎DNA具有良好的裂解效果,其有效检出率为94.1%。优化的LAMP法对水牛早期胚胎性别鉴定的准确率与检出率均为100.0%,检测灵敏度为2×10-5 ng。LAMP扩增产物中加入1%SYBR green I,于紫外光下观察,阳性呈绿色,阴性呈淡黄色;自然光下观察,阳性呈黄色,阴性呈橙色。以LAMP法对37枚水牛IVF早期胚胎性别进行鉴定,其中雄性为28枚,雌性为9枚。PCR验证结果与LAMP法鉴定结果一致。【结论】用化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,再根据水牛SRY基因及12S r RNA基因设计引物进行LAMP法水牛胚胎性别鉴定切实可行。
