十精丸对光老化大鼠皮肤LCs及炎症因子水平影响的研究

目的:探讨十精丸对于光老化大鼠皮肤朗格汉斯细胞(Langerhanscell,LCs)及体内炎症因子水平的影响。方法:SD大鼠,雌性50只,随机分为模型组、阳性对照组、十精丸低剂量组、十精丸中剂量组、十精丸高剂量组,每组10只。建立皮肤光老化模型,同时给予十精丸干预治疗。实验结束后,通过免疫组化法对大鼠皮肤LCs数量及形态进行观察,病理切片观察皮肤炎性浸润程度,ELISA方法检测皮肤组织和血清中白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosisfactor-α,TNF-α)含量。结果:免疫组化结果显示,与模型组相比,十精丸各剂量组表皮LCs细胞数目均有所增加,胞体形态改善,树突结构形成增多,细胞间连接紧密。其中十精丸高剂量组改善效果较为显著。病理切片结果显示,十精丸各剂量组大鼠皮肤炎性细胞浸润程度有所改善,十精丸高剂量组改善程度较为明显。ELISA检测结果显示,十精丸各剂量组皮肤组织匀浆及血清中炎症因子IL-6、TNF-α含量均有所下降。其中十精丸中、高剂量组下降明显,差异有统计学意义(P<0.01),与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:十精丸能增加光老化大鼠皮肤组织中LCs细胞数量,改善LCs细胞异常形态,减轻大鼠皮肤组织的炎性细胞浸润程度,降低大鼠皮肤组织及血清中炎症因子IL-6、TNF-α的含量,表明十精丸能提高皮肤免疫功能,抑制炎症因子,从而修复皮肤功能,改善皮肤衰老状态。

抗原特异性CD4^+CD25^+T细胞对同种异体胰岛移植影响及作用机制研究

目的探讨抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞免疫对同种异体胰岛急性移植排斥反应的影响和机制。方法用MACS分选供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞免疫糖尿病BALB/cByJ受体小鼠,以ICR小鼠胰岛为供体行同种异体胰岛移植。观察移植后小鼠的存活时间、移植前后外周血CD4+和CD8+T细胞亚群的变化和移植物中Th1/Th2细胞因子mRNA表达水平的变化。结果抗原特异性Treg细胞联合胰岛移植组(C组)胰岛移植物平均生存期为(34.57±17.15)d,显著长于单纯胰岛移植组(B组)的(10.6±1.82)d(P<0.01);移植后第3天,C组外周血CD4+/CD8+的值显著低于B组(P<0.01);C组移植物中IL-10,TGF-βmRNA表达比B组显著增强。B组移植物中IL-1β,IL-2及IFN-γmRNA表达明显强于C组。结论抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞可通过调节Th2/Th1之间的反应平衡而延长同种异体胰岛移植物的存活时间。

妊娠糖尿病患者胰岛β细胞功能与相关脂肪细胞因子的关系

目的观察妊娠糖尿病(GDM)患者胰岛β细胞功能与脂联素、内脂素、瘦素、抵抗素等脂肪细胞因子的关系。方法入选GDM患者(GDM组,n=56)、正常妊娠妇女(妊娠组,n=60)和正常育龄妇女(对照组,n=50)为受试者,测定3组研究对象的血糖(FBG)、血脂、胰岛素(FINS)等生化指标和血脂联素、内脂素、瘦素和抵抗素的水平。用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素分泌指数(HOMA-β)和胰岛素敏感指数(ISI)评价胰岛β细胞功能。结果与对照组和妊娠组比较,GDM组患者的脂联素和内脂素水平下降,瘦素和抵抗素水平升高(P<0.05),同时FBG、FINS和HOMA-IR升高,HOMA-β和ISI下降(P<0.05)。Logistic回归分析显示,影响GDM患者胰岛β细胞功能的因素有年龄、孕期、体质量指数(BMI)、FBG、FINS、脂联素、内脂素、瘦素和抵抗素(P<0.05或0.01)。结论 GDM患者胰岛β细胞功能的受损可能与脂肪细胞因子分泌失衡有关。

人表皮朗格汉斯细胞的分离纯化及其对咪喹莫特免疫刺激作用的反应

目的:探讨获取较高纯度和活性人表皮朗格汉斯细胞(Langerhans cell,LC)的实验方法,并观察分选所获人表皮LC接受免疫调节剂咪喹莫特刺激后细胞因子mRNA表达的变化。方法:联合采用密度梯度离心和免疫磁珠的方法分离纯化人表皮LC,将分选后的细胞用结合有FITC的鼠抗人CD1a单抗标记,经流式细胞仪检测LC纯化率,采用0.4%台盼蓝染色检测细胞的活性。将人表皮LC分为实验组和对照组,实验组加5μg/ml咪喹莫特,对照组不加药,处理4小时后提取总RNA,采用RT-PCR法检测各组细胞中细胞因子TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的表达量。结果:流式细胞仪检测分选后LC纯化率为84.48%,台盼蓝染色显示细胞活性>95%。LC经咪喹莫特处理后的实验组TNF-α、IL-1β及IL-6三种细胞因子mRNA表达量均较对照组显著增高(P<0.05)。结论:联合应用密度梯度离心和免疫磁珠法,可获得较高纯度、有活性的LC细胞,且具有操作简单、易于无菌条件下分离纯化的优点。LC能接受咪喹莫特刺激而上调细胞因子mRNA的表达。

人脐血造血干细胞体外诱导朗格汉斯细胞的研究

目的采用人脐血CD34+细胞,经不同细胞因子组合诱导方案体外诱导培养朗格汉斯细胞(CD1a+细胞)并观察其产量及相关表型特点。方法联合应用人淋巴细胞分离试剂和CD34+磁珠分离和筛选人脐血CD34+细胞,以5种不同的细胞因子组合诱导方案,对分选出的CD34+细胞进行体外诱导培养,观察其生长形态变化、集落的形成,并对诱导培养第12天的CD34+细胞进行CD1a、HLA-DR等LC表型分子,以及CD40、CD80等共刺激分子表型检测。筛选出最佳的朗格汉斯细胞(Langerhans cells,LC)体外诱导方案。结果流式细胞术分析5种细胞因子方案体外诱导培养LC的结果显示,方案IV、V诱导培养12 d的CD1a+细胞百分率和CD1a+细胞数量均明显多于方案Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;方案Ⅳ诱导培养12 d的HLA-DR+细胞百分率显著高于方案Ⅴ。结论利用细胞因子组合方案IV体外诱导磁珠分选的CD34+细胞,可以获得高产量的LC细胞,为研究其功能和发生机制提供足够的细胞。

PDX-1蛋白对细胞因子与棕榈酸诱导大鼠胰岛凋亡的保护作用

目的探讨PDX-1蛋白对细胞因子(TNF-α、IL-1β)和棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护TNF-α、IL-1β和棕榈酸引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果PDX-1蛋白可以降低处理后的胰岛Caspase-3活性;PDX-1蛋白干预后的细胞因子组和棕榈酸的葡萄糖刺激胰岛素释放为(1.586±0.129)μIU/ml、(1.560±0.074)μIU/ml与对照组的(1.375±0.131)μIU/ml、(1.426±0.056)μIU/ml相比有显著差异(P均<0.05)。结论表明PDX-1蛋白可以减少细胞因子和棕榈酸诱导的胰岛凋亡,保护β细胞功能。

朗格汉斯细胞相关细胞因子的研究进展

朗格汉斯细胞(langerhans cell,LCs)属于树突状细胞系统中的独特类型,是表皮惟一的专职抗原提呈细胞,在皮肤免疫反应中发挥重要作用。该文论述了LCs相关细胞因子的作用,Langerin(CD207)不仅参与伯贝克颗粒(Birbeck)形成,也具有抵御人类免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染的作用。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是LCs发育和功能维持的关键因子,直接影响表皮LCs的生成。E-钙黏蛋白是LCs的表皮黏合剂,参与LCs迁移和表皮免疫调节。白细胞介素(IL)-34和集落刺激因子-1(colony-stimulating factor 1,CSF-1)参与炎症损伤后LCs再生,与集落刺激因子受体-1(colony stimulating factors receptor1,CSFR1)结合后影响LCs生物学状态。转录因子干扰素调节因子4(interferon regulatory factor 4,IRF4)和IRF8参与前体细胞向LCs的分化过程。LCs活化T淋巴细胞依赖于相关细胞因子的辅助。

咪喹莫特对朗格汉斯细胞及角质形成细胞细胞因子mRNA表达及分泌水平的影响

目的观察咪喹莫特(Imiquimod)溶液对人表皮朗格汉斯细胞(LC)及永生化角质形成细胞(KC)株-HaCaT细胞细胞因子mRNA及分泌水平的影响,探讨其免疫调节机制。方法联用密度梯度离心及免疫磁珠法分离纯化人表皮LC,将LC及HaCaT细胞均各分为实验组和对照组,实验组加5μgml咪喹莫特,对照组不加药,处理4h后,提取总RNA,采用RTPCR法分别检测各组细胞中细胞因子TNFα、IL1β及IL6mRNA的表达量,取培养上清,用ELISA方法检测3种细胞因子的含量。结果LC实验组TNFα、IL1β及IL63种细胞因子mRNA表达量及分泌量均较对照组显著增高(P<0.05),而HaCaT细胞组加药后3种细胞因子mRNA表达量及分泌量较对照组未见明显增加(P>0.05)。结论5μgml咪喹莫特溶液能增加LC细胞因子TNFα、IL1β及IL6的mRNA表达量,但其对HaCaT细胞上述3种细胞因子mRNA表达量均未见有明显上调作用。

糖基化产物对正常大鼠尿蛋白排泄和肾脏结构的影响

目的为探讨糖基化产物对正常肾脏的特异性损害作用。方法正常大鼠静脉注射体外制备的糖基化血清蛋白（ＧＳＰ），为期２个月，观察ＧＳＰ对大鼠尿蛋白排泄、肾皮质糖基化产物和肾脏形态的影响。结果接受ＧＳＰ的大鼠血清和肾组织中糖基化终产物（ＡＧＥｓ）水平、肾小球硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）染色强度、尿蛋白排泄量和尿量均明显高于对照组。光学和电子显微镜观察显示，给予ＧＳＰ的大鼠肾小球体积明显增大，肾小球系膜区扩大伴有细胞外基质增加，ＰＡＳ阳性物质沉着增多和肾小球基底膜节段性增厚。结论糖基化产物能引起类似糖尿病肾病的肾脏损害。

人乳头瘤病毒感染对朗格汉斯细胞影响机制的研究进展

人乳头瘤病毒感染时，皮肤朗格汉斯细胞的数量、形态、分布及功能发生一系列改变，尤其功能受损被认为与导致人乳头瘤病毒逃逸宿主免疫、造成持续感染有关。研究提示，人乳头瘤病毒感染时某些细胞因子或蛋白酶等，如前列腺素E2及其主要限速酶、巨噬细胞炎性蛋白3α、转化生长因子-β、上皮细胞钙黏素、胰岛蛋白、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体等的异常表达可能影响朗格汉斯细胞功能活化。但确切机制有待进一步研究证实。

咪喹莫特对人表皮朗格汉斯细胞及HaCaT细胞分泌细胞因子的影响

目的研究咪喹莫特对人表皮朗格汉斯细胞(LC)及HaCaT细胞细胞因子分泌水平的影响。方法联用密度梯度离心和免疫磁珠的方法分离纯化LC,以5μg/mL咪喹莫特刺激LC及HaCaT细胞,4h后取培养上清,用ELISA方法检测肿瘤坏死因子α、白介素1β及白介素6的含量。结果 LC咪喹莫特处理的实验组培养上清中肿瘤坏死因子α、白介素1β及白介素6含量均较未处理对照组明显增高(P均＜0．05)。HaCaT细胞3种细胞因子分泌量在实验组与对照组中差异无统计学意义(P均＞0．05)。结论咪喹莫特能增加LC细胞因子肿瘤坏死因子α、白介素1β及白介素6的分泌,但对HaCaT细胞上述3种细胞因子的分泌未见明显影响。

葛根素对小鼠皮肤来源朗格汉斯细胞成熟分化及炎症因子分泌的影响

目的:观察葛根素(puerarin)对小鼠皮肤来源朗格汉斯细胞数量、成熟及炎症因子分泌的影响,以期探讨葛根素在炎症相关性疾病治疗中的潜在机制。方法:葛根素作用于体外培养的C57BL/6小鼠皮肤朗格汉斯细胞后,使用流式细胞术检测葛根素对朗格汉斯细胞数量、抗原捕获、MHC-Ⅱ表达等成熟能力的影响;同时利用小鼠细胞因子抗体芯片技术检测培养上清中细胞因子的变化。结果:葛根素作用后,小鼠朗格汉斯细胞数量无明显变化,但抗原捕获能力显著增加;MHC-Ⅱ^(high)亚群细胞比例降低,MHC-Ⅱ^(low)亚群细胞比例则增多;MHC-Ⅱ^+CD80^+和MHC-Ⅱ^+CD86^+细胞比例显著降低;培养上清中IL-1β、MCP-1的分泌也受到明显抑制。结论:葛根素抑制朗格汉斯细胞成熟能力和炎症因子分泌水平,有助于阐明朗格汉斯细胞在炎症相关性疾病中的作用机制具有重要临床意义。

趋化因子受体CX3CR1促进单核来源朗格汉斯细胞亚群局部重建维持慢性皮肤炎症反应

目的:探讨趋化因子受体CX3CR1在慢性皮肤炎症反应中的作用及调控机制。方法:通过二硝基氟苯诱导野生型(wild type,WT)和 Cx3 cr1 GFP/GFP基因缺陷小鼠制备急性和慢性变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis, ACD)模型,HE染色检测小鼠耳朵炎症变化及耳朵肿胀程度,流式细胞术(flow cytometry, FCM)分析小鼠表皮朗格汉斯细胞(Langerhans cell, LC)亚群包括经典LC和单核来源LC(monocyte-derived LC, Mo-LC)比例的变化,同时使用紫外线(ultraviolet, UV)照射诱导小鼠皮肤炎症反应模型进行相应细胞亚群的FCM分析;FCM分析Mo-LC表型及功能变化包括主要组织相容性复合体Ⅱ(major histocompatibility complex Ⅱ,MHCⅡ)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、TNF-α的表达水平。免疫组化法、定量RT-PCR和Western blot分析人慢性皮肤炎症组织中CX3CL1表达水平,免疫荧光染色检测CD1a、CD14及CD207表达。 结果:在慢性ACD模型中, Cx3 cr1 GFP/GFP小鼠耳朵炎性程度和肿胀程度比WT小鼠明显减轻,而在急性ACD模型中两组差异无统计学意义。Mo-LC细胞比例在慢性ACD模型及UV照射后期(3周)明显降低。此外,与经典LC比较,Mo-LC表达高水平MHCⅡ分子以及炎性因子TNF-α和iNOS。在人慢性皮肤炎症皮损组织中CX3CL1表达水平明显上调,CD14 +单核细胞、CD1a +Langerin -细胞明显增多。 结论:CX3CR1在慢性皮肤炎症中可能通过调控Mo-LC局部重建而维持炎症反应。