着丝粒蛋白F、miR-1-3p在中晚期胃癌患者血清中的表达及与预后的相关性

目的探讨着丝粒蛋白F(CENPF)、miRNA-1-3p(miR-1-3p)在中晚期胃癌患者血清中的表达及与预后的相关性。方法选取2019年3月至2020年3月我院收治的60例中晚期胃癌患者即为研究组,同期在我院体检中心体检健康的志愿者60例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组血清CENPF、miR-1-3p的表达水平;采用Pearson法分析血清中CENPF、miR-1-3p水平的相关性;采用Kaplan-Meier法分析CENPF、miR-1-3p表达与中晚期胃癌患者预后的关系;COX回归分析影响中晚期胃癌患者预后的危险因素。结果与对照组比较,研究组患者CENPF水平明显升高,miR-1-3p水平明显降低(P<0.05)。相关性分析结果显示,中晚期胃癌患者血清中CENPF和miR-1-3p水平呈负相关(r=-0.650,P<0.001)。不同TNM分期和淋巴结转移状况下CENPF、miR-1-3p水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。CENPF高表达组患者3年生存率63.33%(19/30)显著低于低表达组93.33%(28/30)(χ^(2)=7.954,P<0.001);miR-1-3p高表达组患者3年生存率96.67%(29/30)显著高于低表达组60.00%(18/30)(χ^(2)=11.882,P=0.001)。多因素COX回归分析显示,TNM分期、淋巴结转移、CENPF、miR-1-3p表达是影响中晚期胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论中晚期胃癌患者血清中CENPF水平显著升高,miR-1-3p水平显著降低,二者与预后有关。

血清晚期氧化蛋白产物与单核细胞趋化蛋白-1水平对妊娠糖尿病孕妇子痫前期发生的诊断价值

目的探究血清晚期氧化蛋白产物(AOPP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平与妊娠期糖尿病(GDM)孕妇子痫前期(PE)发生的相关性。方法选取2021年10月至2023年9月广西医科大学附属民族医院产科收治的70例GDM并发PE孕妇作为合并组,另选取同期来广西医科大学附属民族医院孕检的单纯GDM孕妇70例作为非合并组,统计分析两组研究对象的临床资料及实验室指标,采用多因素logistic分析血清AOPP、MCP-1与GDM并发PE的相关性。选用ROC曲线分析血清AOPP、MCP-1联合检测GDM并发PE的诊断价值。结果单因素分析结果显示,两组患者在年龄、孕前体重指数(BMI)、血清AOPP以及MCP-1表达水平上的比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);多因素logistic回归显示,年龄、孕前BMI、血清AOPP以及MCP-1均为GDM并发PE的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清AOPP、MCP-1及二者联合检测曲线下面积为0.867、0.916、0.942。结论AOPP、MCP-1与GDM并发PE发病风险密切相关,对病情诊断具有较高应用价值。

高迁移率族蛋白-1中和抗体对失血性休克鼠复苏晚期肠屏障功能影响研究

目的 探讨高迁移率族蛋白-1(HMGB1)中和抗体对失血性休克大鼠复苏晚期肠屏障功能的影响。方法 将153只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=17)、常温复苏组(NR组,n=68)、低温复苏组(HR组,n=34)与失血性休克+低温复苏+HMGB1中和抗体组(HR+anti-HMGB1组,n=34),构筑失血性休克模型,取小肠黏膜、肠系膜淋巴结及血液等标本。采用蛋白印迹法检测大鼠肠黏膜中HMGB1蛋白的表达情况。采用酶联免疫吸附试剂盒检测大鼠血清炎性因子表达情况,苏木精-伊红(HE)染色观察各组复苏早晚期肠黏膜损伤情况。结果 检测失血性休克鼠复苏后2、4、8及24 h血清HMGB1表达情况,结果发现,随复苏时间推迟,HR组HMGB1表达水平逐渐升高。在给予HMGB1中和抗体后,HR+antiHMGB1组中HMGB1蛋白表达下调,且外周血中HMGB1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果提示,复苏24 h的HR组与复苏4 h的HR组比较,肠黏膜损伤有所加重。而给予HMGB1中和抗体后,复苏24 h大鼠肠黏膜损伤不明显,与复苏4 h的HR组基本一致。结论 低温复苏晚期可能会加重失血性休克鼠肠屏障功能损伤,抑制HMGB1可减轻复苏晚期带来的损伤。

高迁移率蛋白1相关信号通路在肾脏疾病中的作用

高迁移率蛋白1(HMGB1)是高迁移率蛋白家族成员之一,其生理作用广泛,参与细胞核内DNA重组、染色质结构稳定、基因转录调控、细胞修复、分化等生命活动,是细胞及生物体存活的关键。HMGB1相关信号通路作为晚期炎性介质信号,参与了缺血/再灌注损伤、急性肾损伤、慢性肾脏病、狼疮性肾炎等肾脏病。

肝损伤模型小鼠高迁移率族蛋白-1的表达

将刀豆蛋白A(Con A)经尾静脉注射入雄性Balb/C小鼠,建立T细胞介导的Con A急性肝损伤小鼠模型,检测模型小鼠不同时间点血清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)及肝组织HMGB1mRNA的表达水平,并与血清中TNF-α进行对比.实验显示:在Con A注射后0～3h,小鼠血清中的未能检测出HMGB1蛋白特异带;但在4h后,检测出一条微弱的HMGB1蛋白特异带;在6～36h,均检测出一条清晰的HMGB1蛋白特异带,在8￣12h处于一个高水平状态.而正常对照组小鼠血清中未能检测HMGB1蛋白.与HMGB1动力学曲线不同,血清中TNF-α水平在Con A注射后2h就达到峰值,4h后迅速下降,8h恢复到正常范围.Con A小鼠肝细胞中HMGB1mRNA的表达在Con A注射1h后即达到峰值,是对照组的2.4倍,之后迅速回落,3～12h均低于对照组水平(0.5～0.8倍),24h后逐渐恢复正常水平.初步揭示HMGB1在Con A小鼠急性肝损伤中可能发挥重要作用,血清中HMGB1蛋白与TNF-α相比,呈现出迟发与长效的特点,HMGB1给肝细胞造成损伤有足够强度和效应时间.

雄蚕益肾方对LOH大鼠Leydig细胞胆固醇转运蛋白、睾酮合成酶和SF-1表达的影响

目的:探讨雄蚕益肾方对LOH大鼠Leydig细胞胆固醇转运蛋白、睾酮合成酶和SF-1表达的影响。方法:25只18月龄雄性SD大鼠随机均分为模型组、丙酸睾酮组、雄蚕益肾方-低、中、高剂量组,2月龄雄性SD大鼠5只设为正常组。雄蚕益肾方-低、中、高剂量组分别给予10.4、20.8、41.6 g/(kg·d)体重剂量的雄蚕益肾方配方颗粒剂灌胃;丙酸睾酮组大鼠肌注5.21 mg/(kg·d).体重剂量的丙酸睾酮,每周3次;正常组和模型组给予相同体积的蒸馏水灌胃,均连续28 d。实验结束后取睾丸组织进行Western印迹检测StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4和SF-1蛋白表达。结果:模型组大鼠睾丸组织StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4蛋白和SF-1表达均显著低于正常组(P<0.05);与模型组相比,雄蚕益肾方-低、中、高各剂量组大鼠睾丸组织StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4蛋白和SF-1显著增高(P<0.05)。结论:雄蚕益肾方能上调LOH大鼠睾丸组织胆固醇转运蛋白(StAR、TSPO)、睾酮合成酶(CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4)以及上游转录因子SF-1表达水平,可能是其干预LOH的机制之一。

枯草杆菌二联活菌颗粒联合消旋卡多曲颗粒治疗小儿轮状病毒肠炎的临床效果

目的 观察枯草杆菌二联活菌颗粒联合消旋卡多曲颗粒治疗小儿轮状病毒肠炎(RE)的临床效果。方法 选取2021年12月—2022年12月汉川市妇幼保健院收治的RE患儿64例,按随机数字表法分为单一西药组与微生物制剂组,各32例。单一西药组给予消旋卡多曲颗粒,微生物制剂组在单一西药组基础上联合枯草杆菌二联活菌颗粒治疗,2组均连续治疗1周。比较2组临床疗效,治疗前后血清炎性指标[白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终末产物(AGEs)],不良反应。结果 微生物制剂组总有效率高于单一西药组(96.88%vs. 75.00%,χ^(2)=4.655,P=0.031)。治疗1周后,2组血清IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1及AGEs水平低于治疗前,且微生物制剂组低于单一西药组(P均<0.01)。单一西药组与微生物制剂组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(15.63%vs. 12.50%,P=1.000)。结论 枯草杆菌二联活菌颗粒联合消旋卡多曲颗粒治疗RE患儿的临床效果显著,可有效改善患儿微炎症状态,减轻感染程度,且安全性较高。

心脏营养素1对培养的心肌细胞心房钠尿肽mRNA表达的影响及机制

目的观察心脏营养素1在诱导培养心肌细胞心房钠尿肽基因表达中的作用及其机制,以进一步明确心脏营养素1诱导心肌肥大的作用。方法差速贴壁纯化培养新生大鼠心肌细胞,利用逆转录聚合酶链反应技术检测心房钠尿肽mRNA表达量。结果(1)在培养的心肌细胞中分别加入10-91、0-8和10-7mol/L心脏营养素1,72h后心房钠尿肽mRNA相对表达量分别为1.18±0.14、1.58±0.20和2.03±0.30,其中10-8和10-7mol/L心脏营养素1与对照组(1.08±0.15)相比有显著性差异,呈剂量依赖性。(2)用10-8mol/L心脏营养素1刺激心肌细胞,24h7、2 h和120 h后心房钠尿肽mRNA相对表达量分别为1.16±0.18、1.47±0.17和1.97±0.24,与同时间段对照组相比,72 h和120 h组有显著性差异,呈明显的时间依赖性。培养120 h与培养72 h相比,差异也有显著性统计学意义(P<0.05)。(3)在心肌细胞培养基中分别加入细胞外信号调节激酶1/2选择性抑制剂PD098059(50μmol/L)和蛋白激酶C抑制剂Calphostin C(10μmol/L),30 min后再加入10-8mol/L心脏营养素1,前者的心房钠尿肽mRNA相对表达量为1.94±0.15,与对照组(1.04±0.17)相比有极显著性差异(P<0.01),与单纯心脏营养素1组相比也有显著性差异;后者的心房钠尿肽mRNA相对表达量为1.27±0.17,与对照组(1.04±0.17)相比无显著性差异。结论心脏营养素1呈剂量和时间依赖性增加心房钠尿肽mRNA表达的作用,此作用是通过丝裂原激活蛋白激酶信号通路介导而实现的,蛋白激酶C可能不直接参与介导心脏营养素1诱导心肌细胞心房钠尿肽mRNA的表达。

HepG2细胞内HPVDNA物理状态及表达L1蛋白

目的了解人肝癌细胞系Hep G2细胞内人乳头瘤病毒(HPV)基因组的物理状态,胞质内包涵体物质的性质以及晚期衣壳蛋白1(L1)表达。方法用PCR对细胞内HPV18型E2和E6基因进行扩增,判断HPV18基因组的物理状态;用ELISA、光镜和电镜的免疫组化、Western blot等方法,以多价HPV L1小鼠单克隆抗体做探针,检测Hep G2细胞内L1蛋白表达;用反转录PCR检测细胞内L1 mRNA表达。结果 Hep G2细胞内HPV DNA基因组呈整合状态;细胞裂解液中有HPV L1蛋白存在;细胞呈HPV L1阳性反应;胞质内包涵体样物质,由均匀的颗粒样物质组成,可以为胶体金标记的HPV L1抗体所标识。Hep G2细胞裂解液中有HPV L1蛋白,在56 ku区出现与He La细胞一样的L1特异阳性条带。反转录PCR检测显示Hep G2细胞内有L1 mRNA存在。结论 Hep G2是HPV18阳性细胞,细胞内HPV DNA基因组呈整合状态。细胞内包涵体样物质为HPV18 L1蛋白,Hep G2细胞可以表达L1。

人乳头瘤病毒L1壳蛋白与宫颈上皮内瘤变治疗后高危型人乳头瘤病毒持续感染的相关性

目的：探讨宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasia，CIN）患者治疗前人乳头瘤病毒L1（humanpapillomaviruslate1,HPV-L1）壳蛋白的表达能否成为预测治疗后疾病转归的指标。方法：通过免疫组化法检测CIN患者治疗前HPv-L1壳蛋白表达：通过导流杂交基因芯片技术检测CIN患者高危型人乳头瘤病毒（high-riskhumanpapillomavims，HR-HPV）DNA的表达。结果：（1）CIN患者3种治疗方法比较，HR．HPV持续感染率差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）治疗前CINI的涂片中HPV-L1壳蛋白阳性表达率为75．00％，CINⅡ-Ⅲ的涂片中HPV-L1壳蛋白阳性表达率为36．13％，两者比较差异有显著统计学意义（P〈0．05）。（3）治疗前HPv-L1壳蛋白阳性的CIN患者，术后12个月随访中HR-HPV持续感染率为5．97％：而治疗前HPV-L1壳蛋白阴性的CIN患者．术后12个月随访中HR-HPV持续感染率为19．05％。两组比较差异有显著统计学意义（P〈0．05）。（4）CIN患者治疗前HPV-L1壳蛋白表达与治疗后12个月HR-HPV持续感染呈负相关。结论：CIN患者治疗前HPV-L1壳蛋白的检测有可能成为评估CIN患者治疗后预测疾病转归的指标。

利培酮抑制结肠癌细胞株SW480生长的作用机制

目的:探讨利培酮对人结肠癌细胞株SW480生长抑制的作用机制及其相关研究.方法:表皮生长因子和利培酮单独或联合作用于SW480细胞,通过蛋白印迹实验观察蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)及细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)磷酸化程度,利用RT-PCR判断细胞因子信号转导抑制因子基因表达水平,利用显微镜及细胞计数方法判断细胞生长情况.结果:利培酮抑制人表皮生长因子诱导的结肠癌细胞株SW480细胞的生长;其机制是通过激活ERK1/2的活性并诱导SOCS3的基因的表达,从而抑制PKB的磷酸化,最终抑制SW480的生长.结论:利培酮具有抑制表皮生长因子对人结肠癌细胞株的生长作用.

通过阻断花生四烯酸代谢途径抑制胰腺癌细胞增殖

目的:探讨通过阻断花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢途径抑制胰腺癌细胞增殖.方法:将胰腺癌细胞SW1990分为对照组,M K886干预组、塞莱昔布(C e l e c o x i b)干预组,MK886+Celecoxib干预组,用RT-PCR法检测细胞白三烯B4受体1(leukotriene B4receptor 1,BLT1)mRNA,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的表达量变化,用Western blot检测磷酸化-Erk(phosphorylated-extracellular regulated protein,p-Erk)表达量变化.结果:MK886作用下,BLT1 mRNA、VEGF mRNA等表达量均减少(P<0.01),p-Erk表达量明显减少(P<0.05),Celecoxib作用下,VEGF mRNA表达量明显减少(P<0.01),BLT1 mRNA表达与对照组无明显差异,p-Erk表达量与MK886组比较明显增加(P<0.01),MK886+80?mol/L Celecoxib作用下,BLT1 mRNA、VEGF mRNA表达量明显减少(P<0.01),p-Erk表达量与对照组无明显差异.结论:花生四烯酸的两条代谢途径均与胰腺癌的发生及增殖均有密切关系,而抑制5-脂氧合酶(5-lipoxygenase)途径较环氧化酶2(cyclooxygenase 2)途径相比,抑制肿瘤细胞增殖作用更强.

CaSki细胞内HPV L1蛋白的表达

目的了解含人乳头瘤病毒(HPV)基因组的宫颈癌Ca Ski细胞中HPV晚期衣壳蛋白1(L1)的表达。方法以多价HPV L1小鼠单克隆抗体做探针,采用ELISA、免疫组化、Western blotting等方法,检测Ca Ski细胞内L1蛋白的表达;采用RT-PCR法检测细胞内L1 mRNA的表达。结果 Ca Ski细胞呈HPV L1阳性反应,显示细胞内有HPV L1蛋白存在;Ca Ski细胞内有L1 mRNA存在。结论包含HPV16混合基因组的Ca Ski细胞可以表达L1蛋白。

人乳头瘤病毒58 L1蛋白羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中的入核功能

目的研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)58晚期蛋白1(L1)羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中的入核功能。方法分别构建全长HPV58L1基因和缺失羧基端核定位信号的HPV58L1基因与绿色荧光蛋白(Green fluores-cent protein,GFP)基因融合的重组表达质粒,在毕赤酵母中表达相应蛋白,用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在毕赤酵母细胞中的分布情况。结果融合基因表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;表达的融合蛋白没有聚集在毕赤酵母细胞核中,而是随机地分布在毕赤酵母细胞细胞核和细胞质中。结论 HPV58 L1蛋白的羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中不发挥主动入核的功能。