人Latexin基因及蛋白质的生物信息学分析

Latexin(Lxn)是人的羧肽酶抑制剂,并有肿瘤抑制因子的作用。利用生物信息学分析Lxn基因的启动子和Cp G岛以及Lxn蛋白质的理化性质、结构特点、功能特征后发现,Lxn基因存在两个启动子和Cp G岛,且一个Cp G岛与启动子重合;Lxn是全长222个氨基酸,等电点5.52,无信号肽、无跨膜结构的亲水不稳定蛋白质;蛋白质二级结构有4个α螺旋和9个β折叠,三级预测结构可信度为99.55%,拉曼图表明结构稳定;与Lxn相互作用的蛋白质主要是羧肽酶,另外Lxn还参与炎症反应和温度引起的痛觉反应等生物过程;启动子和氨基酸在灵长类间的同源性极高。对Lxn的表达、结构及功能的预测分析可以为研究Lxn在生命过程中的作用提供重要的信息。

前列腺增生上皮对间质细胞Latexin基因表达的影响

目的研究前列腺增生上皮对间质细胞Latexin基因表达的影响。方法分离良性前列腺增生(BPH)的间质细胞与上皮细胞,经形态学及免疫组织化学方法证实后,构建共培养模型,并提取单独/共培养条件下间质细胞的mRNA,用RT-PCR检测Latexin基因表达情况。结果成功分离前列腺间质与上皮细胞并构建共培养模型,Latexin基因mRNA的表达在单独培养的间质细胞中表达,高于有上皮细胞共培养的间质细胞;Latexin/G3PDH的灰度比值单独培养的间质细胞为(1.122±0.30),有上皮细胞共培养的间质细胞为(0.917±0.24),差异有统计学意义(P<0.05)。结论前列腺增生上皮细胞可抑制间质细胞Latexin基因表达。

Latexin在食管鳞癌组织中的表达及其临床价值

目的探讨Latexin(LXN)在食管鳞癌组织中的表达情况及临床价值。方法采用组织芯片和免疫组织化学技术检测183例食管鳞癌组织中的LXN蛋白表达,并分析其表达情况与临床病理参数(肿瘤大小、T分期、N分期、分化程度和TNM分期)及预后间的关系。结果 LXN在癌旁食管鳞状上皮中呈微弱表达,阳性表达率为100.0%,而在食管鳞癌组织中呈淡黄色或不表达,其阳性表达率为48.6%(89/183),低于癌旁组织(P<0.05);LXN阳性表达与肿瘤大小、T分期、N分期、组织分化及TNM分期有关。单因素生存分析表明LXN阳性表达者的中位总生存期长于LXN阴性表达者(P=0.001)。结论 LXN在食管鳞癌中表达下调,且与临床病理参数有关,在一定程度上反映了食管癌的不良预后。

羧肽酶A抑制剂Latexin基因的原核表达与纯化

根据GenBank上公布的Latexin基因核酸序列设计并合成引物,用RT-PCR方法扩增出Latexin基因,并将其克隆到T载体,转化构建到原核表达载体PET-30a上,得到重组质粒PET-30a-Latexin。将重组质粒转化大肠杆菌transetta(DE3)感受态细胞,并进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析。结果表明:所得重组蛋白大小约32 ku,以可溶形式存在,且该蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。

Latexin在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Latexin(LXN)蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法采用组织芯片和免疫组织化学技术检测143例胃癌及对应癌旁组织中LXN蛋白的表达情况,分析其与临床病理特征及总生存期(OS)的关系。结果胃癌组织中LXN的阳性表达率为60.1%(86/143),低于癌旁组织100.0%(143/143),差异有统计学意义(P<0.05)。LXN蛋白表达与N分期(P=0.005)和组织分化(P=0.023)有关,与年龄、性别、肿瘤大小、T分期、TNM分期无关。全组患者的中位OS为56.0个月;LXN阳性表达者的中位OS为79.5个月,长于阴性表达者的27.0个月(P<0.05)。多因素分析显示仅肿瘤大小是影响胃癌预后的独立因素(P=0.018)。结论 LXN在胃癌组织中表达下调,且与部分临床病理特征有关,在一定程度上反映了胃癌的不良预后。

人类Latexin基因与恶性肿瘤相关性的研究进展

抑癌基因的表达降低以及癌基因的表达增加,激活致癌信号通路,与恶性肿瘤的发生、转移关系密切。人类Latexin(LXN)是目前在哺乳动物体内发现的唯一的羧肽酶A(CPA)抑制剂,其影响炎症发展,促进恶性肿瘤细胞凋亡,抑制恶性肿瘤细胞增殖。本文通过对近年来LXN在白血病、胃癌、食管癌、胰腺癌、肝癌、黑色素瘤等恶性肿瘤中相关性的研究进展进行综述,为今后恶性肿瘤的分子靶向治疗提供有价值的参考。

Latexin对耐吉西他滨胰腺癌细胞化疗改善作用及其可能机制的体外研究

目的 观察Latexin干预对耐吉西他滨胰腺癌SW1990细胞耐药性的影响,探讨其可能机制.方法 采用吉西他滨药物浓度梯度递增诱导法建立吉西他滨耐药SW1990细胞株（SW1990/GZ）.采用CCK-8法检测吉西他滨对SW1990、SW1990/GZ细胞的IC50,并检测10、20、40 ng/μl Latexin干预细胞48 h后的IC50,计算耐药指数（RI）.采用定量RT-PCR 法、蛋白质印迹法检测SW1990、SW1990/GZ细胞Latexin基因mRNA和蛋白的表达,检测40 ng/μl Latexin干预48 h后SW1990、SW1990/GZ细胞Shh、Gli1的mRNA和蛋白表达.结果 成功建立了SW1990/GZ细胞株,它在含150 μmol/L吉西他滨的培养液中稳定生长、传代. 吉西他滨对SW1990、SW1990/GZ细胞的IC50值分别为（3.8±0.4）μmol/L和（226.5±13.6）μmol/L,SW1990/GZ细胞显著高于SW1990细胞,差异有统计学意义（P=0.000）;RI均值为59.6.10、20 、40 ng/μl Latexin干预48 h后,吉西他滨对SW1990细胞IC50值分别为（3.0±0.4）、（2.5±0.3）、（1.8±0.3）μmol/L,对SW1990/GZ细胞的IC50值分别为（113.08±5.01）、（70.26±2.31）、（42.12±1.31）μmol/L,除10 ng/μl Latexin干预的SW1990细胞外,其余剂量Latexin干预的SW1990、SW1990/GZ细胞IC50值均较未干预细胞显著下降,差异具有统计学意义（P值均〈0.05）;RI均值分别为37.7、28.1、23.1.SW1990、SW1990/GZ细胞Latexin的mRNA相对表达量分别为0.85±0.08、0.31±0.07, 蛋白相对表达量分别为0.49±0.09、0.13±0.05,SW1990/GZ细胞的表达量显著低于SW1990细胞,差异均有统计学意义（P值均〈0.01）.40 ng/μl Latexin干预48 h后,SW1990/GZ细胞Shh mRNA表达量从未干预细胞的0.89±0.09下降至0.53±0.06,Gli1 mRNA表达量从0.58±0.06下降至0.35±0.05;Shh蛋白表达量从0.72±0.09下降至0.35±0.06,Gli1蛋白表达量从0.78±0.08下降至0.28±0.03,差异均有统计学意义（P值均〈0.01）.结论 Latexin能增强耐吉西他滨胰腺癌SW1990细胞对吉西他滨的敏感性,其机制可能与抑制SHH通路的激活有关.

Latexin在人类疾病中的研究进展

Latexin(LXN)是目前已知哺乳类动物中唯一的羧肽酶A(carboxypeptidase A,CPA)抑制剂,参与蛋白质降解和代谢的调节。LXN最初被认为是一种发育中大鼠大脑外侧新皮质区域特异性的分子标记,近年来发现,其在肿瘤的发生、侵袭和转移中也发挥重要作用,并与炎症、脂肪代谢、造血干细胞的更新与分化及心血管系统疾病密切相关。本文对近年来LXN的研究进展进行综述,总结LXN在人类疾病中的作用机制及相关信号通路,以期为治疗相关疾病提供新的策略和药物靶点。

Latexin基因转染对CD133^＋MIAPaca-2胰腺癌干细胞增殖的影响

目的探讨Latexin（Lxn）基因对CD133＋MIAPaca-2胰腺癌干细胞增殖的影响。方法采用磁珠分选法从MIAPaca-2胰腺癌细胞株中分选出CD133＋细胞，在无血清培养基中观察其形态变化及种植到裸鼠皮下后的成瘤能力。采用脂质体法将不同浓度的插入Lxn基因（1、3、5μg）的质粒转染CD133＋MIAPaca-2胰腺癌细胞。应用RT—PCR及蛋白质印迹法检测转染的癌细胞LxnmRNA及蛋白表达量。CCK-8法检测转染癌细胞的增殖能力。结果成功分离出CD133＋；MIAPaca-2胰腺癌细胞，它以悬浮成球的方式生长，以1×10^5个癌细胞种植裸鼠皮下的成瘤率达100％。转染插入Lxn的质粒后，CD133＋ MIAPaca-2胰腺癌细胞Lxn基因的表达呈转染剂量依赖性地增加，转染5μg质粒的细胞LxnmRNA及蛋白表达量分别为20．80±0．98、16．80±2．73，显著高于未转染细胞的1．02±0．01、1．01±0．01，差异均有统计学意义（P值均〈0．05）；转染后癌细胞增殖活性呈转染剂量及培养时间依赖性地被抑制，转染0．4μg质粒的癌细胞的生长抑制率达36．2％，显著高于未转染细胞的抑制率，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CD133＋MIAPaca-2胰腺癌细胞具有肿瘤干细胞部分特性，Lxn基因转染对CD133＋MIAPaca-2胰腺癌干细胞增殖具有抑制作用。

HLXN基因产物人羧肽酶A抑制剂的表达与纯化

目的:表达并纯化HLXN编码蛋白latexin。方法:用IPTG诱导含重组质粒HLXN-pQE30的E.coli M15表达latexin蛋白;HiTrapTMChelating层析柱纯化基因工程his6-latexin蛋白;SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量;考马斯亮蓝法测定超滤液中蛋白浓度。结果:由HLXN表达产物制备和提纯得到了纯化his6-latexin蛋白;该蛋白的分子量为32kD;蛋白含量为2.67g/L。结论:HLXN编码蛋白latexin的成功表达与纯化为进一步研究探讨HLXN基因的生物学功能、与人类临床疾病的关系以及在临床的应用奠定了基础。

新的人羧肽酶A抑制物cDNA的克隆、定位和表达谱分析

从人的胎脑cDNA文库中 ,克隆到一条全新的人类羧肽酶A抑制物基因 .此cDNA序列全长 10 49bp ,包括翻译起始位点附近的Kozak序列、6 6 9bp的开放读框以及 3′端的加尾信号 ,共编码 2 2 2个氨基酸 .它编码的蛋白与小鼠Latexin蛋白和大鼠Latexin蛋白分别有高达 85 %和 84%的同源性 ,因此命名为人类LATEXIN基因 .应用辐射杂交方法 ,将该基因定位在人 3号染色体 3q2 4区段 ,位于分子标记D3S16 0 5和D3S15 5 3之间 .采用基因芯片杂交的方法研究其在某些组织或细胞中的表达情况 ,发现在前列腺癌中表达量较高 .

胶乳素、Piwil2和piR-932在白血病干细胞中的表达

目的探究piwil2、乳胶素和piR-932在白血病干细胞中的表达情况,为对成人急性髓性白血病的管理打下基础。方法应用流式细胞术挑选CD34+/CD38-白血病细胞。通过PCR分析技术检测piwil2和胶乳素在CD34+/CD38-白血病细胞中的表达。用piRNA微阵列芯片试验检测piR932在CD34+/CD38-白血病细胞中的表达。结果 piwil2蛋白的表达高于对照组,一种叫作piR932的piRNAs在白血病干细胞中表达显著升高,通过与piwil2发生免疫反应而形成免疫复合物;胶乳素的表达由于其启动子区的Cp G岛的甲基化而大大降低。结论 piR932和piwil2的结合是通过促进胶乳素的甲基化在CD34+/CD38-白血病细胞的过程中起到正性调节的作用,而且它们都能成为白血病的潜在靶点。