枸杞子糖缀合物LbGp4糖链的结构及其免疫活性的研究

枸杞子糖缀合物 Lb Gp4经 β-消除、柱层析分离后得到一条分子量高达 1 80 80 0的分支多糖化合物Lb Gp4 -OL.Lb Gp4 -OL糖基组成为 n( Rha)∶ n( Ara)∶n( Gal) =0 .0 5∶ 1 .3 3∶ 1 .根据甲基化、部分酸水解及1H NMR、 13 C NMR分析 ,确定了其主要的结构 ,并对 Lb Gp4和 Lb Gp4

枸杞糖缀合物LbGp2的理化性质和活性研究

目的 分离纯化枸杞糖缀合物 (LbGp2 )并研究其理化性质及活性。方法 采用柱色谱法得到LbGp2 ,经HPLC ,CE ,GC ,SEC及糖含量分析、元素分析和氨基酸分析等研究其理化性质 ,并用半体内法、形态学计数法和比色法等研究了Lbp2对腹腔巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞的转化以及对小鼠血清半数溶血等的影响。结果 LbGp2是均一组份 ,其分子量为 6 8× 10 4,糖含量为 90 7% ,糖组成为Ara Gal3∶4(摩尔比 ) ,并含有 18种天然氨基酸。免疫活性试验表明Lbp2具有显著的免疫增强作用。同时还具有很好的抗氧化作用。结论 LbGp2是均一的糖缀合物 。

枸杞糖肽对缺氧及KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响

目的:研究枸杞糖肽(LbGp)对低氧心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响,以及对KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺氧模型,实验分3组:正常对照组;缺氧模型组:细胞缺氧6h;枸杞糖肽预处理组:加入枸杞糖肽,再行缺氧6h。MTT法检测细胞活力。以Fluo/AM荧光指示剂负载,通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou3/AM荧光指示剂标记技术,观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响。加入终浓度60mmol·L-1KCl溶液,动态观察KCl刺激后心肌细胞[Ca2+]i的动态变化及LbGp预处理后对KCl诱导的钙超载的影响。结果:心肌细胞缺氧时间延长,损伤随之加剧,缺氧枸杞糖肽组心肌细胞荧光密度均较模型组显著降低(P<0.01),50μg·mL-1LbGp最为明显,[Ca2+]i明显减少。枸杞糖肽组加入KCl溶液后[Ca2+]i荧光强度曲线升高,但与模型组比较,幅度明显减小,25,50,100μg·mL-1LbGp且呈现量效关系。结论:低氧导致心肌细胞钙超载,而枸杞糖肽能减轻钙超载。亦能对抗KCl诱导的心肌细胞钙超载。机制之一是枸杞糖肽作用于L型钙通道。

枸杞糖肽对放射诱导人角质形成细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制

目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbanun glycopeptide,LbGP)对放射诱导人角质形成细胞HaCaT损伤的保护作用及其机制。方法采用直线加速器(速率6 Gy/min)分别按4、8、12、16、20、24、28 Gy剂量对HaCaT细胞进行照射,CCK-8法检测细胞活性。以0、0.05、0.1、0.5、0.8、1.0、1.5、3 mg/mL的LbGP作用HaCaT细胞4h,进行12 Gy剂量放射,CCK-8法检测细胞活性。将HaCaT细胞分为空白对照组(不加LbGP不放射)、放射组(12 Gy剂量照射)、LbGP+放射组(0.8 mg/mL LbGP作用24 h,12 Gy剂量照射),照射1 h后,流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生量,WST-8法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,Western blot法检测细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)、p-Nrf2、NADPH氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平;分别于放射1、3、5 h后,qRT-PCR法检测Nrf2、HO-1、NQO1基因mRNA的转录水平。结果12 Gy放射辐射量可诱导约50%细胞死亡,0.8 mg/mL LbGP对放射细胞活性保护作用最佳。放射1 h后,与空白对照组比较,放射组HaCaT细胞内ROS含量显著增加(F=2.55,P<0.001),SOD活力显著降低(F=1.23,P<0.01),NQO1、Nrf2蛋白含量差异无统计学意义(F分别为1.78和1.00,P均>0.05),HO-1蛋白含量明显增加(F=1.37,P<0.05),p-Nrf2蛋白含量显著下降(F=2.75,P<0.01);与放射组比较,LbGP+放射组HaCaT细胞内ROS含量明显降低(F=3.61,P<0.001),SOD活性明显升高(F=1.23,P<0.05),Nrf2,p-Nrf2、HO-1及NQO1蛋白含量均显著上升(F分别为4.00、2.25、6.25及1.27,P均<0.05)。放射1、3、5 h,与放射组比较,LbGP+放射组Nrf2、HO-1、NQO1基因mRNA转录水平均明显升高(F=0.20~36.00,P均<0.05)。结论LbGP可减轻放射对HaCaT细胞的氧化应激损伤,保护细胞活性,该作用可能是通过激活Nrf2及提高其下游抗氧化酶SOD、HO-1、NQO1水平而发挥作用的。