华山松大小蠹共生真菌新种Leptographium qinlingensis(英文)

报道了与危害中国秦岭华山松的华山松大小蠹相关的真菌新种,描述了其有性阶段和无性阶 段的形态特征。研究标本保存于西北农林科技大学。

华山松蓝变真菌(Leptographium qinlingensis)的生物学*特性研究

【目的】秦岭细粘束孢（Leptographium qinlingensis）是华山松大小蠹成虫携带的致病性真菌,在华山松大小蠹入侵健康华山松后,于寄主韧皮部和木质部边材组织与细胞内发育,分解树脂道泌脂细胞和薄壁细胞,进而影响华山松树脂代谢和水分代谢。对秦岭细粘束孢的生物学特性进行研究,可为华山松大小蠹的综合防治提供理论依据。【方法】通过室内抑菌试验,测定不同温度（5,10,15,20,25,27.5,30和35℃）、培养基（PDA、麦芽汁、察氏和PDA＋华山松韧皮部浸提液）、pH值（4.0,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0和8.0）、水势（-0.2,-0.5,-1.0,-1.5,-2.0和-2.5 Mpa）和松针汁（华山松、油松、白皮松、云杉）对秦岭细粘束孢菌丝和孢子发育的影响,并比较了氧化铜、甲霜灵、甲基托布津、代森锌、链霉素和多菌灵6种杀菌剂的抑菌活性。【结果】秦岭细粘束孢菌丝生长的适宜温度为20～30℃,菌丝最适生长温度为27.5℃,产孢最适温度为20℃;该菌在麦芽汁培养基中生长和产孢最好;菌丝生长和孢子发育的适宜pH为4.0～6.5,以pH值5为最佳;在高水势环境下生长较好,菌丝体生物量随培养基水势的降低而不断减少;在添加华山松针叶汁的PDA培养基中,菌丝生长和产孢最好;代森锌、甲基托布津、甲霜灵和氧化铜均有较强的抑菌作用,其中以代森锌效果最明显。【结论】初步探明了秦岭细粘束孢菌丝生长和产孢的最适温度、培养基、pH值和培养基水势;进一步证明了秦岭细粘束孢对寄主华山松营养的高度选择性;筛选出了对秦岭细粘束孢抑菌效果较好的杀菌剂。

Leptographiumbhutanense提取物抑菌活性的初步分析

内生真菌是动植物体内的微生物类群,其多样性、复杂性和特殊性的特点使其能够产生化学结构新颖、具有多种生物活性的次生代谢产物。本研究采用纸片法检测Leptographium bhutanense发酵提取物对13种致病细菌的抑菌活性,并对抗菌化合物的最低抑菌浓度（MIC）、热稳定性、光稳定性进行检测;同时,采用OSMAC策略寻找产抗菌化合物的最佳培养基、最佳培养时间和最佳接种量。分析显示提取物对3种人体致病细菌（蜡样芽孢杆菌,副溶血性弧菌,溶血性葡萄球菌）具有抑菌活性;其MIC值分别为：12.5mg/mL、6.25 mg/mL和6.25 mg/mL;提取物具有较好的热稳定性和光稳定性。产抗菌化合物的最佳培养基为：MFS,最佳培养时间和最佳接种量分别为15 d和1.0 g/100 mL。本研究为昆虫内生真菌抗菌化合物的开发利用提供帮助。

红脂大小蠹伴生菌研究进展

红脂大小蠹是我国重要的外来入侵害虫,给我国林业生产和国土生态安全带来巨大危害。包括红脂大小蠹在内的小蠹科昆虫与真菌之间存在着广泛的共生关系,伴生菌在协助昆虫建立种群、协同克服寄主抗性等方面起到重要作用。对北美原发地红脂大小蠹伴生菌的研究进行综述,以期探讨引起灾害发生的多重因素,并为灾害的控制提供思路。红脂大小蠹记载与10种长喙壳类真菌伴生,其中黑脂小蠹细帚霉、长梗细帚霉、温菲尔德细帚霉和瓦格纳长喙壳等与红脂大小蠹有着较为紧密的共生关系。对这些主要伴生菌的形态特征、系统发育关系、生活习性和致病性进行详细比较。应当警惕这些重要森林病原物对我国森林生态系统的入侵和危害。并对今后包括红脂大小蠹伴生菌在内的我国小蠹虫伴生菌的研究进行讨论。

华山松大小蠹共生真菌对华山松木质部危害的解剖学研究

通过对野外和人工接种条件下 ,华山松大小蠹 (Dendroctonus armandi)共生真菌(Leptographium terebrantis)对寄主华山松木质部危害的解剖学研究 ,结果表明 ,华山松大小蠹共生真菌随华山松大小蠹入侵健康寄主华山松木质部组织 ,真菌菌丝首先在其木质部树脂道内发育 ,分解木质部树脂道泌脂细胞 ,堵塞树脂道 ;通过菌丝在木质部交叉场薄壁细胞内及管胞细胞间和管胞细胞内的扩展 ,使寄主华山松树脂代谢、抗性物质代谢和水分代谢紊乱 ,木质部边材组织蓝变。

温度对纵坑切梢小蠹伴生菌——云南半帚孢生长的影响

本文研究了纵坑切梢小蠹伴生菌云南半帚孢Leptographiumyunnanense在不同温度下 ,在PDA培养基、云南松木段和活树上的生长变化情况 ,结果表明 :在 5 2 0℃温度范围内 ,真菌的生长随温度的升高而加快 ,云南松韧皮反应区长度逐渐增大 ;在 2 0 35℃温度范围内 ,真菌的生长随温度的升高而逐渐减弱 ,韧皮反应区逐渐减小。说明温度变化使真菌的生长力与云南松的抗性之间的对比力量改变 。

纵坑切梢小蠹伴生菌——云南半帚孢毒素作用机理的初步研究

用纵坑切梢小蠹伴生菌———云南半帚孢Leptographium yunnanense的毒素处理后 ,云南松和华山松体内与抗病性密切相关的过氧化物酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶的活性都明显地下降 ,表明该毒素可以通过抑制寄主体内与抗性有关的酶的活性来削弱寄主的抗性 ,从而有利于菌在寄主体内侵染生长。云南松的酶活性下降的程度较大 ,而华山松的酶活性较高 ,毒素处理后活性受抑制的程度相对较小 ,这表明华山松对云南半帚孢的抗御能力较云南松的强 ,这也是云南境内云南松受害严重而华山松受害轻微的重要原因之一。

云南半帚孢毒素及其基本性质研究

云南半帚孢 (Leptographiumyunnanense)是云南松纵坑切梢小蠹携带的一种主要的病原性伴生真菌 .以PD培养液对该菌进行培养 ,培养滤液即毒素原液中蛋白部分具致病活性 ,在冷藏及室温条件下 ,该毒素能较长时间 (2 0～ 40d)保持致病活性 (即能在寄主树木上形成一定长度的韧皮反应区 ) ,随着温度的升高 ,其活性逐渐丧失 ;在 6 0℃时 ,该毒素仍可保持一定的活性 ,而在超过 80℃时 ,则完全丧失其活性 .毒素原液pH值为 5 1,渗透势为 - 12 0kPa ,经试验确定毒素原液的毒性非溶液的酸度或渗透势所致 ,从而表明该菌培养液中存在具致病活性的毒素物质 .

秦岭细粘束孢对寄主华山松生理生化代谢的影响

研究人工接种试验条件下华山松大小蠹共生真菌秦岭细粘束孢对华山松苗木生理生化代谢的影响,以揭示秦岭细粘束孢对华山松的危害。结果表明,被感染秦岭细粘束孢的华山松苗木随着真菌在韧皮部和木质部组织内的危害和扩展,针叶叶绿素含量不断降低;接种21 d后韧皮部反应区内水分、可溶性糖及蛋白质含量显著减少;SOD超氯化物歧化酶、CAT(过氧化氢酶)酶活性明显降低,而MDA(丙二醛)含量则有所增加。这说明秦岭细粘束孢的大量侵害可以造成华山松营养物质含量和酶活性的降低,在削弱寄主树木抗性的同时加速寄主华山松韧皮部组织内营养物质的转化,并为华山松大小蠹在韧皮部内的生存创造营养条件。

伴生菌(L.wingfieldii)对苏格兰松病害作用研究

研究纵坑切梢小蠹Ｔｏｍｉｃｕｓｐｉｎｉｐｅｒｄａ的主要伴生菌Ｌｅｐｔｏｇｒａｐｈｉｕｍｗｉｎｇ－ｆｉｅｌｄｉ在六种温度下的生长力及对苏格兰松Ｐｉｎｕｓｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ的侵染力和致病力。在１０℃～２５℃范围内，Ｌ．ｗｉｎｇｆｉｅｌｄｉ随温度升高生长加快，而在３℃或３０℃下生长受到抑制。接种苏格兰松的前１０天表现出一定侵染力，但也诱发了树木的抗性反应，该反应抑制伴生菌的进一步扩张。在伴生菌较高密度接种下，寄主木质部有大量伴生菌、松脂分布，部分木质部也因失去水分而丧失正常功能，表明Ｌ．ｗｉｎｇｆｉｅｌｄｉ对苏格兰松有较强致病力。

华山松大小蠹共生真菌秦岭细粘束孢产纤维素酶的研究

通过单因素和正交试验对秦岭细粘束孢分泌纤维素酶的组分、条件等进行研究。结果表明:秦岭细粘束孢可以分泌内切葡萄糖苷酶(CX)、外切葡萄糖苷酶(C1)和β-葡萄糖苷酶(BG),具有完整的纤维素酶系;其中CX是秦岭细粘束孢分泌的主要纤维素酶组分,优化后CX酶的最大酶活为35.215U,分别是C1和BG最大酶活的13.662倍和8.780倍。正交试验表明:秦岭细粘束孢分泌CX,C1和BG的最适条件各不相同,产CX的最佳条件为29℃、6天、起始pH4.0、摇床转速150r.min-1。温度、转速、起始pH和时间4个因素对秦岭细粘束孢产3种酶的影响各不相同,影响最大的是温度,其次是转速和时间,而起始pH对该菌产酶的影响最小。

松树感染云南半帚孢后韧皮中酶活性变化

云南松和华山松在感染纵坑切梢小蠹伴生菌———云南半帚孢后,体内与抗病性相关的过氧化物酶(PO)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性均明显升高 云南松自身的抗性酶活性较华山松的小,在感染后,酶活性的增加较弱,持续时间也较短,在感染的最初7d酶活性增加迅速,而后活性增加趋于平缓;华山松自身的酶活性较大,感染后增加的幅度较大,比云南松迅速,且在试验期内一直持续增加 因此,总体上,云南松的抗性较华山松的弱 这也是云南境内云南松蠹害严重。

纵坑切梢小蠹伴生菌云南半帚孢毒素活性的生物检测

比较研究了不同生物检测材料及方法在纵坑切梢小蠹伴生菌———云南半帚孢毒素的生物活性检测上的适应性,结果表明该毒素不仅对云南松产生病害作用,对思茅松和华山松同样产生病害作用。用切根幼苗为材料对该毒素进行生测,所需时间虽较短,但幼苗所产生的症状较复杂,不易观察和确定;以松树及其木段为材料将该毒素进行接种试验,则在韧皮部位形成明显的反应区,与接菌产生的反应症状一样,容易确定,但木段上出现反应症状的时间较短,因此,以木段为材料,采用接种法进行该毒素活性检测较好。

云南切梢小蠹及其伴生真菌的研究进展

云南切梢小蠹是我国西南地区特有切梢小蠹种类,2008年才被正式定名。多年来,云南切梢小蠹对我国西南地区松林造成巨大的危害。切梢小蠹伴生真菌是导致蠹害的关键因素之一,也是揭示该区域切梢小蠹大发生的研究瓶颈。为了揭示云南切梢小蠹发生成因,探索云南切梢小蠹及伴生真菌作用机制,本文对云南切梢小蠹及其伴生真菌的相关研究概况进行了梳理和总结,为揭示切梢小蠹成灾机制及探索切梢小蠹有效防控新途径提供科学数据。

秦岭细粘束孢产漆酶的培养条件

漆酶（Laccase,EC1.10.3.2）属于蓝色氧化酶家族的一种多酚氧化酶,是重要的木质纤维（lingocellulose）降解酶之一（Bertrand et al.,2002）。漆酶能催化降解多种芳香族化合物特别是酚类物质（Solomon et al.,1996）。由于漆酶具有430～790mV氧化还原电位（Shleev et al.,2003）,能够将分子氧直接还原为水,在没有H2O2和其他次级代谢产物存在下,只要存在溶解氧,

冷杉半帚霉的生物学特性

为了解中国新纪录种冷杉半帚霉(Leptographium abietinum)与松材线虫的关系及其致病机理,研究了冷杉半帚霉的生物学特性。菌丝生长的最适条件:温度为25℃,半光照半黑暗培养,pH=5.9,碳源为蔗糖,氮源为硝酸钾。最适产孢条件:温度为25℃,全黑暗培养,pH=7.0,碳源为蔗糖,氮源为尿素。最适孢子萌发条件:温度为25℃,相对湿度为100%。

华山松alpha-pinene synthase基因和(-)-limonene synthase基因的克隆及表达

【目的】研究华山松alpha-pinene synthase基因和(-)-limonene synthase基因及其表达特性,为揭示其在华山松抵御华山松大小蠹和蓝变真菌秦岭细粘束孢的入侵机制提供理论依据。【方法】运用PCR和RACE技术克隆华山松alpha-pinene synthase基因和(-)-limonene synthase基因cDNA序列;利用生物信息学方法分析基因的核苷酸序列和编码蛋白的氨基酸序列,并构建系统发育树;通过实时荧光定量PCR技术分析华山松alpha-pinene synthase基因和(-)-limonene synthase基因在MeJA处理和秦岭细粘束孢侵染后的表达差异。【结果】华山松alpha-pinene synthase基因编码区全长为1887 bp,编码的蛋白由628个氨基酸组成,分子质量为71.59 kDa,理论等电点为5.86。华山松(-)-limonene synthase基因编码区全长为1905 bp,编码的蛋白由634个氨基酸组成,分子质量为73.01 kDa,理论等电点为5.97。经实时荧光定量PCR分析,MeJA处理后alpha-pinene synthase基因和(-)-limonene synthase基因在不同时间均被诱导表达,其中alpha-pinene synthase基因表达量在第2天达到最高峰,(-)-limonene synthase基因表达量在第4天达到最高峰;秦岭细粘束孢侵染后alpha-pinene synthase基因和(-)-limonene synthase基因均被诱导表达,但表达量在处理后不同时间有明显差异。结果表明华山松alpha-pinene synthase基因和(-)-limonene synthase基因是响应MeJA处理(模拟华山松大小蠹入侵危害)和秦岭细粘束孢侵染重要的基因。【结论】华山松alpha-pinene synthase基因和(-)-limonene synthase基因能够响应MeJA处理和秦岭细粘束孢侵染,这对进一步揭示寄主华山松抵御华山松大小蠹和蓝变真菌入侵机制提供了理论依据。