葛根素对妊娠期糖尿病大鼠胰腺组织let-7f及免疫因子IL-17、IL-23表达的影响

目的:探究葛根素对妊娠期糖尿病大鼠胰腺组织let-7f及免疫因子IL-17、IL-23表达的影响。方法:将120只大鼠分为正常对照组、空白对照组、辛伐他汀组、葛根素低剂量组、葛根素中剂量组、葛根素高剂量组,正常对照组以基础饲料、其他组以高脂饲料饲喂2周。辛伐他汀组给予2 mg/kg的辛伐他汀,葛根素组按低、中、高剂量分别给予70 mg/kg、120mg/kg、170 mg/kg葛根素,正常对照组和空白对照组给予等量生理盐水,治疗2周后,测定6组大鼠血糖和血脂水平、胰腺组织中let-7f的表达水平以及血清和胰腺组织中IL-17和IL-23的表达情况。结果:治疗后,辛伐他汀组和葛根素组大鼠的FBG、TC、TG、FFA显著低于空白对照组,且随着葛根素剂量的增加,FBG、TC、TG、FFA的水平显著降低(P<0.05),呈剂量依赖性;辛伐他汀组和葛根素组胰腺组织中let-7f的表达显著高于空白对照组(P<0.05),且呈剂量依赖性;辛伐他汀组和葛根素组血清和胰腺组织中IL-17和IL-23的表达显著高于空白对照组(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:葛根素能提高妊娠期糖尿病大鼠胰腺组织let-7f表达,同时降低血清和胰腺组织中IL-17、IL-23表达,为妊娠期糖尿病临床治疗提供新的思路和理论依据。

急性脑梗死患者血清let-7f、IL-6的水平变化及意义

目的探讨急性脑梗死患者血清let-7f、白细胞介素-6(IL-6)水平变化及其临床意义。方法选取109例急性脑梗死患者(病例组),按照颈动脉彩色多普勒超声结果将其分为颈动脉正常组[内膜中膜厚度(IMT)<1.2mm]51例和颈动脉斑块组(IMT≥1.2mm)58例,其中颈动脉斑块组又分为稳定性斑块组32例和不稳定性斑块组26例,并于同期随机选取体检中心60例健康体检者为对照组。采用RT-qPCR法检测血清let-7fmRNA相对表达量,酶联免疫吸附法检测血清IL-6水平。采用秩相关分析血清let-7f、IL-6与颈动脉斑块稳定性的关系,受试者工作特征(ROC)曲线评估其对急性脑梗死的诊断价值。结果与对照组相比,病例组高血压、糖尿病比例升高,血清HDL-C水平降低,HDL-C水平升高(P均<0.05)。病例组血清let-7fmRNA表达低于对照组,血清IL-6水平高于对照组,并且斑块越不稳定,血清let-7fmRNA下调越显著,血清IL-6水平越高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。经秩相关分析,急性脑梗死患者血清let-7fmRNA与斑块稳定性呈正相关(rs=0.638,P<0.05),血清IL-6与斑块稳定性呈负相关(rs=-0.609,P<0.05),let-7fmRNA与IL-6呈负相关(rs=-0.712,P<0.05)。let-7fmRNA诊断急性脑梗死的ROC曲线下面积(AUC)为0.830(95%CI:0.748~0.913),灵敏度、特异度分别为0.83、0.77,准确性为0.82;IL-6诊断急性脑梗死ROC的AUC为0.812(95%CI:0.726~0.899),灵敏度、特异度分别为0.80、0.72,准确性为0.75;两指标联合诊断急性脑梗死ROC的AUC为0.903(95%CI:0.840~0.966),灵敏度、特异度分别为0.89、0.82,准确性为0.87。结论急性脑梗死患者血清let-7f水平下调,IL-6水平升高,二者可能参与了急性脑梗死发病过程,且与颈动脉斑块形成及稳定性密切相关,早期联合检测有助于急性脑梗死的诊断。

let-7f对骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景:micro RNA let-7f和炎性因子白细胞介素6对骨髓间充质干细胞的具体作用及两者之间是否存在联系尚不可知。目的:分析let-7f及白细胞介素6表达水平对骨髓间充质干细胞增殖的影响及两者的关系。方法:1构建let-7f过表达及抑制慢病毒载体,分别转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,实验分为4个组:转染上调组(转染LV-rno-let-7f-up)、转染下调组(转染LV-rno-let-7f-down)、阴性转染组(转染空病毒)、未转染组(不进行病毒转染)。q RT-PCR检测各组细胞let-7f表达水平。MTT法、流式细胞术和ELISA等方法检测不同let-7f表达水平下细胞增殖情况及白细胞介素6表达水平,q RT-PCR及Western blot检测各组Cyclin D1 m RNA和蛋白表达水平。2预测let-7f潜在的靶基因,构建野生型/突变型白细胞介素6 3’UTR报告基因载体,分别与let-7f/let-7f inhibitor共转染293T细胞系,测定荧光素酶活性。结果与结论:let-7f转染上调组较未转染组及阴性转染组细胞增殖能力及克隆能力明显增强,G1期细胞数明显减少,S期明显增多,凋亡减少(P<0.05);转染下调组结果与其相反。let-7f转染上调组细胞培养液中的白细胞介素6表达水平低于未转染组及阴性转染组(P<0.05);转染下调组细胞培养液中的白细胞介素6则明显升高(P<0.05);Western blot、定量PCR显示let-7f转染上调组Cyclin D1蛋白及m RNA表达上调(P<0.05);转染下调组表达均下调(P<0.05);未转染组与阴性转染组所有结果无明显差异(P>0.05)。野生型白细胞介素6 3’UTR报告基因载体与let-7f共转染细胞的荧光素酶活性显著减低(P<0.05)。结果表明上调let-7f表达水平可显著促进骨髓间充质干细胞增殖活性及克隆形成能力,减少凋亡,而下调let-7f表达水平则出现抑制作用。白细胞介素6过表达可抑制骨髓间充质干细胞增殖,考虑白细胞介素6是let-7f的靶基因,let-7f可能通过抑制白细胞介素6表达而促进细胞增殖。

let-7f-5p在不明原因复发性流产绒毛组织中的表达及其功能研究

目的 :筛选与不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)相关的微小RNA(miRNA),探讨其在URSA发生中的作用及其可能机制。方法:通过对URSA绒毛组织进行miRNAs测序,初步筛选差异表达的miRNAs;利用实时荧光定量PCR,验证筛选所得miRNAs表达水平;利用DAVID软件对靶基因进行Pathway分析;利用实时荧光定量PCR,检测p53通路中靶基因及其下游基因的表达水平。结果:let-7f-5p在URSA绒毛组织中表达水平显著上升;let-7f-5p的靶基因富集于p53通路,通路中靶基因MDM-X和其下游靶标促生长基因MDM2水平显著下降,促凋亡基因p53表达水平显著上升。结论:let-7f-5p可能调控p53信号通路中MDM-X/MDM2/p53基因,促进细胞凋亡,最终导致URSA发生发展。

microRNA let-7f-5p对胃癌细胞系GC9811迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨转染let-7f-5p mimics/inhibitor对胃癌细胞系GC9811迁移和侵袭能力的影响。方法:用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法在mRNA水平测定转染let-7f-5p mimics/inhibitor及其阴性对照后let-7f-5p表达水平的变化;以Transwell实验检测转染let-7f-5p mimics/inhibitor后迁移和侵袭能力有无变化。结果:RT-PCR结果显示:转染let-7f-5p mimics可明显上调GC9811细胞let-7f-5p的表达;转染let-7f-5p inhibitor可明显下调GC9811细胞let-7f-5p的表达。Transwell实验结果显示与对照组相比转染let-7f-5p mimics的GC9811细胞迁移和侵袭能力明显减弱;与对照组相比转染let-7f-5p inhibitor的GC9811细胞迁移和侵袭能力明显增强。结论:microRNA let-7f-5p能够抑制胃癌细胞GC9811的迁移和侵袭能力。

大面积脑梗死患者血清let-7f表达的初步研究

目的本研究拟初步探讨let-7f与大面积脑梗死的诊断及发展的相关性。方法采用前瞻性队列研究方法,收集神经重症ICU的缺血性脑卒中患者血标本(128例),并收集年龄、性别匹配的正常人群、脑出血患者作为对照。将血清标本进行miRNA提取、反转录及实时荧光定量PCR,以检测血清中let-7f的相对表达量。结果血清let-7f在大面积前循环脑梗死患者中表达较正常人群显著下调(P<0.05);在后循环脑梗死患者中的表达水平较正常人群无显著性差异。血清let-7f在大面积脑梗死合并出血转化患者中表达较正常人群显著上调(P<0.05),但较脑出血患者无显著性差异。血清let-7f在脑出血患者中的表达水平较正常人群显著上调(P<0.05)。血清let-7f在非大面积脑梗死患者中的表达水平较正常人群显著上调(P<0.05),但低于脑出血患者。血清let-7f表达水平与肺部感染无显著性差异(P>0.05)。血清let-7f与脑出血或脑梗死合并出血呈高度正相关性,其次与梗死面积呈负相关。结论血清let-7f表达水平对于大面积前循环脑梗死的诊断及发展具有一定的相关性。

卵泡输出率与血清let-7g、let-7f联合评估超促排卵卵巢反应及临床意义

目的:研究卵泡输出率(FORT)与血清let-7g、let-7f联合评估超促排卵患者卵巢反应价值及临床意义。方法:收集本院2020年1月-2021年12月行体外受精-胚胎移植术(IVF-ET)患者97例临床资料,根据患者获卵数分为卵巢低反应组、中反应组及高反应组,比较3组FORT、血清let-7g、let-7f水平,分析不同妊娠结局及FROT水平患者临床特征、促排卵效果、实验室指标及治疗结局,分析FORT、血清let-7g及let-7f评估患者卵巢反应性价值。结果:血清let-7g、let-7f水平卵巢中反应组高于低反应组及高反应组(P<0.05),低反应组与高反应组无差异(P>0.05);FORT水平在低反应组、中反应组及高反应组依次升高(P<0.05)。妊娠组血清let-7g、let-7f、FORT、获卵数、受精率及优质胚胎率均高于非妊娠组(P<0.05);低FROT组AFC数低于中FROT组及高FROT组(P<0.05),低FROT组、中FROT组及高FROT组获卵数、受精率、优质胚胎率及临床妊娠率依次升高(P<0.05)。患者血清let-7g与let-7f水平呈正相关,两者与TORF无明显相关性。FORT、血清let-7g及let-7f单独应用时,预测卵巢低反应性或高反应性的价值均以let-7f最高(AUC=0.754、0.767),其次是FORT(AUC=0.750、0.734),3项指标联合应用(AUC=0.859、0.848)提高了评估效能。结论:FORT及血清let-7g、let-7f miRNA表达在反映卵巢反应性中均具一定效能,可作为指导控制性超排卵方案制定的潜在指标。

Let-7f调节MMP-11影响胰腺癌侵袭迁移

目的:探讨Let-7f对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用RT-q PCR观察PANC-1、Bx-PC3与正常胰腺细胞HPDE6C7中Let-7f和MMP-11的表达差异;采用Let-7f模拟物和抑制物调节胰腺癌细胞中Let-7f的表达,利用Transwell小室分析Let-7f表达对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响;采用RT-q PCR观察干预Let-7f对MMP-11表达的影响。结果:RT-q PCR显示胰腺癌细胞中Let-7f水平明显低于HPDE6C7细胞(P<0.05),MMP-11水平明显高于HPDE6C7细胞。上调胰腺癌细胞中Let-7f的表达,可明显抑制其侵袭和迁移(P<0.05),下调Let-7f的表达,无显著变化。Let-7f抑制MMP-11表达(P<0.05)。结论:Let-7f可能通过调控MMP-11的表达影响胰腺癌的侵袭和迁移,为胰腺癌生物治疗提供新靶点。

miRNA let-7a和miRNA let-7f早期诊断肝癌的临床价值

目的探讨原发性肝癌患者miRNA let-7a、miRNA let-7f的表达。方法收集龙岗中心医院院及合作医院2014年6月至2016年3月接受肝癌切除手术的40例原发性肝癌患者。采用RT-PCR方法检测miRNA let-7a、miRNA let-7f在血清、肝癌/癌旁组织中的表达水平。选择同期该院体检的40例健康者作为健康对照者。比较肝癌患者和健康对照者血清miRNA let-7a、let-7f的表达差异。结果肝癌癌变组织miRNA let-7a[(0.18±0.04)×103]、miRNA let-7f[(0.19±0.01)×103]分别较癌旁组织[(1.52±0.11)×103、(0.67±0.10)×103]低,差异有统计学意义(P<0.01);肝癌患者血清miRNA let-7a[(0.22±0.06)×103]、miRNA let-7f[(0.15±0.04)×103]较健康对照者[(1.13±0.21)×103、(0.62±0.12)×103]低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miRNA let-7a、miRNA let-7f在肝癌患者病变组织及血清中异常偏低表达,可作为早期诊断肝癌的重要标志物,为临床诊断提供参考。

Let-7f靶向抑制A20表达在血管内皮细胞炎症反应中的作用研究

目的观察let-7f在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞炎症反应过程中的变化规律,探讨let-7f参与动脉粥样硬化起始发病过程的分子机制。方法采用双抗体夹心ELISA方法观察不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达变化情况,RT-qPCR检测不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时let-7f的表达变化规律,Western blot法分析不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时核因子κB(NF-κB)的核移位情况和ox-LDL对人脐静脉内皮细胞A20表达及NF-κB通路活化的影响,双荧光素酶报告实验检测let-7f与A20基因的3’-UTR靶向结合,Western blot法检测let-7f对A20表达的调控。结果 20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞培养液中ICAM-1的含量明显升高,血管内皮细胞let-7f的表达明显上调(均为P<0.05),且随着ox-LDL作用剂量的增加,ICAM-1与let-7f的表达变化均呈现明显的剂量效应关系。此外,20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞NF-κB向核内移位,随着ox-LDL作用剂量的增加核内NF-κB明显增多(P<0.05)。100μg/ml ox-LDL作用于血管内皮细胞,可引起A20下调,IKK被磷酸化,并进一步导致NF-κB磷酸化增多,而let-7f能够与A20基因的3’-UTR靶向结合并明显抑制其表达。结论 Let-7f可能通过调控NF-κB信号传导通路的活化参与血管内皮细胞的炎症反应过程,提示let-7f可能成为动脉粥样硬化早期预防和治疗的新靶点。

肝细胞癌患者血清let-7a、let-7f表达水平及其临床意义

肝细胞癌（HCC）占原发性肝癌的85%-90%,它是世界上第三位和第五位常见最易导致患者死亡的癌症。在我国HCC的发病率很高,占全球一半以上,并且死亡率呈不断上升的趋势,根据流行病学统计,在城市居民中,HCC的发病率仅次于肺癌,在农村仅次于胃癌[1-3]。近年来研究发现,微小RNA（miRNA）作为一类新型的抑癌基因和癌基因成为医学科学领域研究的一个热点。

寿胎丸对控制性超促排卵小鼠围着床期子宫内膜血管生成及let-7f和TSP-1表达的影响

目的研究寿胎丸对控制性超促排卵(COH)模型小鼠着床胚胎数、内膜容受性、微血管密度、microRNA let-7f及其靶标蛋白TSP-1表达的影响。方法60只ICR雌鼠随机分为3组:空白对照组、COH模型组和寿胎丸干预组,每组20只。寿胎丸干预组每日给予寿胎丸灌胃,即空白对照组和COH模型组每日给予生理盐水灌胃。灌胃3个动情周期,在第3个动情周期的动情后期,模型组与寿胎丸干预组建立COH模型(曲普瑞林+HMG+HCG)。HCG注射后,按雌雄比例2:1合笼,合笼后第4天和第6天,每组各处死10只小鼠,HE染色观察子宫内膜形态、厚度,免疫组化染色检测子宫内膜微血管密度,RT-PCR检测容受性标记因子HOXA10、LIF及let-7f的表达量,RT-PCR和Western blot检测TSP-1 mRNA及蛋白表达量。合笼后第8天,每组各处死5只小鼠,计算植入胚胎数。结果寿胎丸干预显著提高COH模型组小鼠植入胚胎数(P<0.05);与空白对照组相比,COH模型组小鼠内膜厚度、腺体面积、微血管密度、容受性标记因子HOXA10及LIF mRNA表达水平显著降低(P<0.05),let-7f表达量显著降低(P<0.05),其靶标基因TSP-1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。寿胎丸干预后内膜厚度、腺体面积、微血管密度、HOXA10、LIF、let-7f的表达显著升高(P<0.05),TSP-1的表达显著降低(P<0.05)。结论寿胎丸可显著提高COH小鼠内膜容受性和植入胚胎数,可能是通过上调let-7f的表达,下调其靶标基因TSP-1的表达,改善COH小鼠内膜血管生成来发挥作用。

miR let-7f对流行性乙型脑炎病毒在神经元细胞中复制的调控作用

目的探讨miR let-7f对流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在神经元细胞中复制的影响。方法培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,miRNA芯片检测SH-SY5Y细胞感染JEV后miRNA表达谱,荧光定量RT-PCR检测确认miR let-7f表达情况;实验随机分为miR let-7f mimics组、miR let-7f inhibitor组和miRNA conrol组,分别将miR let-7f mimics、inhibitors和miRNA conrol转染SH-SY5Y细胞后感染JEV,荧光定量RT-PCR和空斑法检测病毒复制变化情况。结果SH-SY5Y细胞感染JEV后差异表达的miRNA有37个,上调的有28个,下调的有9个,其中miR let-7f表达明显升高(3.51倍);SH-SY5Y细胞感染JEV 12h后miR let-7f表达明显上升(3.67倍),与miRNA control组和miR let-7f inhibitor组相比,miR let-7f mimics组细胞培养上清中病毒滴度降低,细胞内JEV RNA也显著减少,差异具有统计学意义(P<0.025)。结论miR let-7f在神经元细胞中能够有效抑制JEV复制,在开发JEV感染的分子治疗方面具有潜在应用价值。

MicroRNAlet-7f对胃癌细胞株SGC7901/ADR耐药性的影响

目的:通过检测胃癌细胞株SGC7901及其阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中microRNA let-7f的表达差异,探讨let-7f表达与胃癌细胞对ADR耐药的关系。方法:通过实时荧光定量PCR比较SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞中let-7f表达水平的差异;MTT法检测SGC7901,SGC7901/ADR及转染let-7f mimic后SGC7901/ADR的药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况。结果:qRT-PCR结果显示,let-7f在SGC7901/ADR细胞中的表达较在SGC7901中的表达显著降低(P<0.05)。MTT法结果显示SGC7901与SGC7901/ADR两种细胞阿霉素的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.95±0.08)g/L和(5.40±0.28)g/L。SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后,let-7f表达显著上调,并且对阿霉素的IC50明显降低(P<0.05)。凋亡检测结果显示,转染let-7f mimic后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。Western Blot结果表明相较于转染let-7f negative control(NC)组,转染let-7f mimic组cleaved-Caspase-3表达显著降低(P<0.05),而两组中的Bcl-2表达水平无差异。结论:let-7f在胃癌阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中的表达显著降低,逆转let-7f表达可增加其对阿霉素敏感性,并诱导其凋亡。

基于let-7f-2-3p/SCN1A轴探究加味肾气丸对泻剂结肠大鼠肠动力障碍的影响

目的:探讨加味肾气丸对泻剂结肠大鼠肠动力障碍的影响,并探讨其对let-7f-2-3p/SCN1A轴的调控作用。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、普卢卡必利组、加味肾气丸组;采用生大黄免煎剂混悬液递增灌胃建立泻剂结肠大鼠模型,造模成功后分别给予相应药物。统计大鼠治疗后1 w首粒黑便排出时间;取大鼠结肠标本,HE染色观察大鼠肠黏膜损伤情况;免疫荧光标记观察ICC数量;免疫组化染色检测结肠组织中AChE、NOS表达;采用试剂盒测定大鼠结肠组织SOD、MDA、NO、VIP、SP、Na^(+)-K^(+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase水平;RT-qPCR检测大鼠结肠组织let-7f-2-3p、SCN1A的表达;通过生物信息学在线软件预测let-7f-2-3p与SCN1A互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。结果:与模型组比较,加味肾气丸组首粒黑便排出时间显著缩短(P<0.05),结肠黏膜损伤明显改善,结肠ICC数量显著增加,NO、VIP、MDA水平及NOS表达显著降低,SP、SOD、Na^(+)-K^(+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase水平及AChE表达显著升高,let-7f-2-3p表达显著降低,SCN1A表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告实验证实SCN1A是let-7f-2-3p的靶向调控分子。结论:加味肾气丸可能通过let-7f-2-3p/SCN1A轴缓解肠动力障碍,进而对泻剂结肠大鼠产生保护作用。

脑梗死急性期患者血清let-7f表达与病情和神经功能缺损程度的相关性研究

目的探讨脑梗死急性期患者血清let-7f表达水平与病情和神经功能缺损程度的相关性研究。方法选取2017年5月至2019年5月本院神经内科收治的157例脑梗死急性期患者纳入病例组,另选取来本院的50名健康体检者纳入正常组。根据病例组患者的病情恶化、经功能缺损程度以及病梗死灶面积大小等情况分组并与正常组进行血清let-7f表达水平的比较。采用SYBR Green实时荧光技术定量检测血清中的let-7f表达。结果病例组血清let-7f表达水平较正常组明显升高(P<0.05),且随着病情不断的恶化、神经功能缺损程度的加重或者梗死灶面积的不断增加,其表达水平也不断升高(P<0.05)。结论血清let-7f表达水平在脑梗死急性期患者体内变化明显,与病情和神经功能缺损程度有着密切的联系,是一种可以用于辅助诊断和治疗脑梗死急性期的指标,值得临床推广和应用。

脑梗死急性期患者血清let-7f表达与病情和神经功能缺损程度的相关性研究

目的探讨脑梗死急性期患者血清let-7f表达水平与病情和神经功能缺损程度的相关性研究。方法将2016年4月—2018年2月平顶山市第二人民医院神经内科收治的、经临床医师诊断的157例脑梗死急性期患者纳入病例组,另选取来我院行健康体检的50例体检者纳入正常组。根据病例组患者的病情恶化、神经功能缺损程度以及梗死灶面积大小等情况分为不同的组并且与正常组进行血清let-7f表达水平的比较。采用SYBR Green实时荧光技术定量检测血清中的let-7f表达。结果病例组血清let-7f表达水平较正常组明显升高(P<0.05),且随着病情不断的恶化、神经功能缺损程度的加重或者梗死灶面积的不断增加其表达水平也在不断增加(P<0.05)。结论血清let-7f表达水平在脑梗死急性期患者体内变化明显,与病情和神经功能缺损程度有着密切的联系,是一种可以用于辅助诊断和治疗脑梗死急性期的指标,值得临床推广和应用。

Let-7f-5p对糖尿病大鼠心肌微血管病变的影响及机制

目的探讨微小RNA(miRNA)Let-7f-5p在糖尿病大鼠心肌微血管病变中的作用及机制。方法将25只SD雄性大鼠随机分为正常对照组5只和模型组20只,正常对照组给予普通饲料喂养;模型组给予高脂高糖饲料喂养4周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素制作糖尿病模型。取造模成功的15只大鼠,随机分为空病毒组、Let-7f-5p过表达组、Let-7f-5p抑表达组各5只,Let-7f-5p过表达组、Let-7f-5p抑表达组分别尾静脉一次性注射Let-7f-5p过表达病毒原液50μL、Let-7f-5p抑制表达病毒原液50μL;空病毒组尾静脉一次性注射等体积空病毒原液。继续高脂高糖饲料喂养12周,诱导糖尿病心肌微血管病变。所有大鼠麻醉,使用彩色多普勒超声显像仪记录左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末内径(LVIDs)、左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(FS)。取心肌组织,免疫组化标记心肌微血管数目,计算毛细血管数量/心肌细胞核比值(C/M)用于评估心肌微血管密度;RT-PCR法检测Let-7f-5p及Argonaute蛋白1(AGO1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达,Western blotting法检测AGO1、VEGF蛋白表达。结果与对照组比较,空病毒组LVIDd、LVIDs、LVEF、FS均降低(P均<0.05);C/M降低(P均<0.05);心肌组织Let-7f-5p mRNA表达降低,AGO1 mRNA及蛋白表达增加,VEGF mRNA和蛋白表达降低(P均<0.05)。与空病毒组比较,Let-7f-5p过表达组LVIDd、LVIDs、LVEF、FS均升高(P均<0.05);C/M升高(P均<0.05);心肌组织Let-7f-5p mRNA表达升高,AGO1 mRNA及蛋白表达降低,VEGF mRNA和蛋白表达升高(P均<0.05)。与空病毒组比较,Let-7f-5p抑表达组LVIDd、LVIDs、LVEF、FS均降低(P均<0.05);C/M降低(P均<0.05);心肌组织Let-7f-5p mRNA表达减少,AGO1 mRNA及蛋白表达增加,VEGF mRNA和蛋白表达降低(P均<0.05)。结论糖尿病大鼠心肌微血管密度降低,心脏收缩功能受损。上调Let-7f-5p表达可能通过Let-7/AGO1/VEGF信号通路增加心肌微血管密度,改善心脏功能;下调Let-7f-5p表达可导致心肌微血管病变加重,心功能恶化。

Let-7f对人结肠癌细胞上皮间转换及侵袭能力的影响

目的探讨Let-7f在结肠癌组织和结肠癌细胞株中的表达,分析上调Let-7f对人结肠癌细胞上皮间质转换(epithelial-mesenchymal Transition,EMT)和迁移侵袭能力的影响。方法采用qRT-PCR检测Let-7f在结肠癌组织与癌旁组织中的表达,并检测Let-7f在结肠癌细胞系(HT29、loVo、SW480、SW620)和人正常结肠上皮细胞(NCM460)中的表达;采用基因转染技术将Let-7f模拟物转染人结肠癌细胞株HT29,qRT-PCR验证转染效率;Western blot检测转染前、后结肠癌细胞中EMT相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin和vimentin的表达变化;采用划痕愈合实验、Transwell小室法分别检测转染后的HT29细胞的迁移和侵袭能力变化。结果 qRT-PCR结果显示,Let-7f在结肠癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.01);同时,Let-7f在结肠癌细胞系(HT29、loVo、SW480和SW620)中的表达量均低于人正常结肠上皮细胞系(NCM460)(P均<0.01)。转染Let-7f mimic 48h后,qRT-PCR检测转染效率显示:与阴性对照组(NC组)相比,Let-7f mimic转染组Let-7f表达水平升高(P<0.01)。Western blot结果显示,Let-7f mimic转染组细胞中E-cadherin表达水平高于NC组(P<0.05),而N-cadherin和vimentin表达水平低于NC组(P<0.05)。划痕愈合实验显示:Let-7f mimic转染组细胞划痕愈合率低于NC组(P<0.05)。Transwell小室法显示,Let-7f mimic转染组穿过小室的细胞数少于NC组(P<0.05)。结论 Let-7f可抑制人结肠癌细胞上皮-间质转化、迁移侵袭能力。

脑梗死急性期血清let-7f和IL-6水平及其与病情和神经功能缺损程度的相关性

目的探讨脑梗死急性期患者血清let-7f mRNA表达水平和白细胞介素(IL)-6水平及其与病情和神经功能缺损程度的相关性。方法选择2013年3月至2015年9月神经内科确诊的急性脑梗死患者124例为脑梗死组,选择同期门诊健康体检者95例为对照组;对脑梗死组患者按照不同发病时间、不同神经功能缺损程度[美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS评分)]分组,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清let-7f mRNA表达,采用酶标仪测定血清IL-6水平。绘制两组ROC曲线并比较let-7f mRNA及IL-6诊断脑梗死的灵敏度、特异度。结果脑梗死组卒中史、高血压病、高胆固醇血症、高甘油三酯血症发生率高于对照组(P均<0. 01)。NIHSS评分5～19分组高血压病、高胆固醇症、高甘油三酯血症所占比例高于NIHSS评分0～4分组(P均<0. 01)。脑梗死组IL-6水平高于对照组,let-7f mRNA水平低于对照组(P均<0. 01)。NIHSS评分5～19分组IL-6水平高于0～4分组,let-7f mRNA水平低于0～4分组(P均<0. 01)。IL-6 ROC曲线下面积(AUC)为0. 839(95%CI:0. 765～0. 985),let-7f mRNA AUC为0. 777(95%CI:0. 587～0. 903),两者AUC相近(P> 0. 05),两者诊断脑梗死的灵敏度、特异度相近(P> 0. 05)。结论脑梗死急性期患者血清let-7f mRNA表达水平降低,IL-6升高,其水平与病情和神经功能缺损程度有一定相关性;let-7f、IL-6诊断脑梗死具有较高的灵敏度、特异度,可作为判定急性脑梗死的生物学标志物。