Lfcin B-Cecropin A杂合抗菌肽的生物信息学分析

为提高牛乳铁蛋白肽(Lfcin B)和天蚕素(Cecropin A)的抗菌活性和稳定性,降低其对动物机体的毒副作用,将2种肽的活性区域杂合,利用在线生物信息学软件对Lfcin B、Cecropin A和杂合肽进行理化性质、二级结构和两亲性分析。结果表明:杂合抗菌肽由23个氨基酸组成,为阳离子型多肽,二级结构中主要包含α-螺旋、β-折叠结构、无规则卷曲和延长肽链,具有不完全两亲性,呈亲水性。综上所述,对Lfcin B、Cecropin A和杂合肽进行生物信息学预测分析,可为开发高效、稳定的新型替抗产品提供信息学基础。

新型食品添加剂LfcinB对肿瘤细胞生长的抑制作用

研究了Lfcin B作为免疫强化剂以及营养强化剂对肿瘤细胞的抑制作用。主要应用CCK-8法检测Lfcin B对人T淋巴细胞白血病细胞(Jurkat细胞)活力的影响,应用双标记流式细胞术分析Lfcin B抑制Jurkat细胞生长的作用方式。研究结果证实,Lfcin B对Jurkat细胞增殖的影响与Lfcin B的作用时间和浓度呈正相关,而且Lfcin B主要时通过诱导Jurkat细胞发生早期凋亡来抑制其增殖,并且其诱导Jurkat细胞早期凋亡的最佳浓度和时间分别为200μg/m L和48 h。

乳铁蛋白素B和天蚕素P1对投喂大肠杆菌断奶仔猪生长及肠道微生物区系的影响

本研究旨在探讨投喂大肠杆菌后乳铁蛋白素B(Lfcin B)和天蚕素P1(Cec P1)对断奶仔猪生长及肠道微生物区系影响。选用48头28日龄断奶的德国大白杂交二代断奶仔猪[(7.18±1.32)kg],根据体重、窝别、性别将其随机分成4组:对照组、产肠毒素组(ETEC)、乳铁蛋白素组(Lfcin B)、天蚕素组(Cec P1),每组2个重复,每个重复6头猪,试验期为12 d。结果表明,1)试验期间对照组、ETEC组、Lfcin B组、Cec P1组仔猪体重及平均日增重均差异不显著(P>0.05)。2)ETEC组仔猪腹泻率显著高于其他组(P<0.05),而其他组之间差异不显著(P>0.05)。在进行第1次攻毒后,即仔猪29日龄,ETEC组、Lfcin B组和Cec P1组仔猪的粪便干物质均显著下降(P<0.05),第2次攻毒后的第2天,即仔猪31日龄,Lfcin B组和Cec P1组的仔猪分别饲喂了Lfcin B和Cec P1,对照组仔猪的粪便干物质仍显著高于ETEC组和LfcinB组(P<0.05),但已与Cec P1组差异不显著(P>0.05)。3)各组仔猪的肠道微生物区系差异不显著(P>0.05)。由此可知,各组仔猪生长及肠道微生物区系差异不显著,但Cec P1来源于猪肠道微生物寄生线虫,比Lfcin B更能适应肠道环境,更有利于仔猪健康。

乳铁素B的抗菌活性及其影响因素

乳铁素B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后得到的最重要的抗菌肽,具有较强抗菌活性. 研究表明,乳铁素B对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为0.5 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0.4 mg/mL;葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)、尿素、硫酸铵在0～10 mg/mL,乳糖、可溶性淀粉在0～4 mg/mL的质量浓度范围内,对乳铁素B的抗菌活性影响不大;当NaCl或KCl的浓度为25～100 mmol/L,MgCl2或CaCl2的浓度为1.0～5.0 mmol/L时,乳铁素B的抗菌活性就会大大降低;随着缓冲盐浓度和有机酸浓度(25～100 mmol/L)的增大,乳铁素B的抗菌活性呈下降趋势,且在微碱性环境下乳铁素B表现出较强的抗菌活力.

牛乳铁蛋白素-马盖宁杂合抗菌肽的设计、合成及抑菌活性

根据抗菌肽牛乳铁蛋白素(Lfcin B)与马盖宁(Magainin)的核心功能序列,将Lfcin B(1-15)和Magainin(1-12)二者连接起来,设计一种新型杂合抗菌肽LFB15-MA12,采用固相化学合成法合成获得纯度大于95%的LFB15-MA12。微量肉汤稀释法测得LFB15-MA12对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922、绿脓杆菌ATCC27853、鼠伤寒沙门氏菌C77-31四种细菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibition concentration,MIC)分别为16、64、64和32μg·mL-1,在抑菌浓度范围内未表现出溶血活性。获得了一种具有较高抗菌活性且安全无毒的新型抗菌肽,为研究开发理想的新型抗菌肽分子提供了新思路。

乳铁蛋白肽的作用机制及其转基因研究进展

近年来抗菌肽由于自身的优点已成为抗生素的替代品,并已成为研究与开发的热点,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)就是其中的一种,它是乳铁蛋白(LF)经胃蛋白酶在酸性条件下降解所产生的小肽,它构成了完整乳铁蛋白主要功能区的大部分,当它被降解下来后不仅仅保持了原来完整乳铁蛋白的活性甚至比原来完整乳铁蛋白的活性更强,因其具有广谱的抗细菌、抗病毒、抗真菌等多种独特的生物学活性而备受关注。对其结构、作用及作用机制、转基因研究这几方面的最新国内外研究动态进行综述。

杂合肽基因的合成及在大肠杆菌中的表达

将LfcinB15-Ma12杂合肽基因克隆到载体pET32a上,构建抗菌肽LfcinB15-Ma12杂合肽基因,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。根据已报道的抗菌肽LfcinB和Magainin基因的氨基酸序列,推导出其cDNA序列,将两者连接为杂合基因并克隆到载体pET32a上,IPTG诱导表达。构建了LfcinB15-Ma12杂合肽基因重组质粒,经PCR扩增和DNA测序分析,成功构建了LfcinB15-Ma12杂合肽基因重组质粒,经IPTG诱导,成功表达了杂合肽LfcinB15-Ma12。这为利用基因工程表达其他抗菌肽奠定了基础。

合成甜味剂对牛乳铁素抗菌活性的影响

乳铁素B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后得到的最重要的抗菌肽,具有很强的抗菌活性。选取大肠杆菌为实验菌株,进行了合成甜味剂对乳铁素抑菌活性影响的研究。研究表明,在牛肉膏蛋白胨培养基中,pH7.0,菌浓为107CFU/ml的条件下,纯化乳铁素B对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为20μg/ml;阿斯巴甜、甜蜜素、糖精钠在0～5mg/ml的质量浓度范围内,对乳铁素B的抗菌活性都有削弱的作用;而安塞蜜在0～5mg/ml的质量浓度范围内,对乳铁素B的抗菌活性没有太大的影响。