基于条件优化探索对流免疫电泳技术的实验教学设计

为了提高对流免疫电泳实验的成功率和缩短电泳时间,本实验以BSA和自制备的兔抗BSA抗血清作为实验材料,通过优化和改变电泳介质、电泳缓冲液等条件,观察比较抗原-抗体沉淀线形成的位置、形状情况来探索符合实验教学要求的过程方案。结果表明,在100 V电压下,采用TAE作为缓冲液、1.0%~1.2%的琼脂凝胶作为电泳介质时,电泳15~20分钟内可形成白色、清晰可见的抗原-抗体沉淀线,实验效果最佳。

酶联免疫电转移印迹技术在囊尾蚴病诊断中的应用

目的 应用高度敏感、特异的酶联免疫电转移印迹技术 (EITB)诊断囊尾蚴病。 方法 用双向电泳法对囊液抗原进行分离、纯化 ,并通过免疫印迹 ,用囊尾蚴病患者、棘球蚴病患者和其他异源血清筛选高免疫反应性和高特异性抗原组分 ,以此建立EITB诊断方法 ,与传统的ELISA法相比 ,并比较血清和滤纸干血浸出液两种样本的敏感性。 结果 得到了等电点为 9.4,相对分子质量为 14 0 0 0和 1660 0两组特异性抗原组分 ,以此为诊断抗原建立了EITB诊断方法 ,其敏感度和特异度分别高达 92 .5 %和 10 0 % ,显著高于ELISA法。在EITB中血清和滤纸干血浸出液的敏感性相似。 结论 EITB诊断囊尾蚴病较ELISA法敏感性高。

对流免疫电泳在水貂阿留申病诊断中的应用进展

水貂阿留申病(AD)是一种在世界范围内广泛流行的、严重危害水貂养殖业的病毒性传染病。对流免疫电泳(CIEP)是世界公认的诊断AD病的有效方法。本文综述了CIEP在AD诊断中的应用进展,介绍了该方法的优缺点和实用性,以期为疾病的有效防控提供参考。

免疫固定电泳技术在多发性骨髓瘤单克隆免疫球蛋白检测中的应用

目的探讨应用免疫固定电泳技术检测多发性骨髓瘤单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的意义。方法采用琼脂糖凝胶免疫固定电泳技术检测261份临床送检血清和尿液,其中76例为多发性骨髓瘤患者。结果76例多发性骨髓瘤患者血清M蛋白阳性76例,阳性率为100%;尿本周蛋白阳性53例,阳性率为70%。17例血清M蛋白为轻链型患者尿本周蛋白阳性率为94%。185例非多发性骨髓瘤患者均未检出M带。结论免疫固定电泳检测M蛋白的技术对诊断多发性骨髓瘤具有高度的敏感性和特异性,是M蛋白定性和分型的首选方法。

绿僵菌免疫特性的研究

采用免疫电泳的方法对不同来源的７株绿僵菌进行了免疫学对比研究。抗原是由菌丝体清液和孢子悬液组成，通过对家兔接种抗原而获得抗血清。每一种抗原与其同源抗血清和异源抗血清进行交叉试验，并对免疫电泳反应产生的沉淀弧数目和图谱加以对比分析。结果表明：不同菌株间存在着明显的抗原类似性，同时各菌株间也表现出一定的抗原专一性。根据实验数据对供试菌株进行分类的结果与形态学分类的结果相符合，这表明在筛选用于生物防治的丝孢菌类时，免疫电泳是揭示其内在特性的一种非常有用的方法。

火箭电泳法测定伤寒Vi多糖菌苗多糖含量

伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原系ａ─１，４─Ｎ─乙酰─半乳糖醛酸高度聚合体，其Ｃ２和Ｃ３位分别被Ｎ─乙酰基和０─乙酰基取代，它不能用分光光度法测定其含量，实验表明火箭电泳的火箭峰高与其样品中多糖含量的对数成直线相关关系，作者采用火箭电泳方法对全国六个生物制品研究所的１８批伤寒Ｖｉ多糖菌苗中Ｖｉ多糖含量进行了测定，结果表明多数制品符合规程要求，但部分制品多糖含量偏高，值得引起注意，各所三批制品差别不大，表明各所的生产工艺相对稳定，利用火箭电泳测定伤寒Ｖｉ多糖，操作简单，用时较短，所需样品极少，是目前较为合适的测定伤寒Ｖｉ多糖菌苗多糖含量的方法。

猪血浆转铁蛋白含量火箭免疫电泳法研究

本研究建立的测定猪血浆Tf含量的火箭免疫电泳法,具良好的一致性及重复性,灵敏度达974ng/mL,测得112例15～180日龄健康猪血浆Tf含量为2767.36～3220.66μg/mL,与双抗体夹心型ELISA结果基本吻合。因而证明,火箭免疫电泳法可有效地用于猪血浆Tf的定量分析。

水貂阿留申病诊断技术的研究进展

水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的自身免疫性疾病,目前尚无有效疫苗,每年结合打皮期筛查淘汰病貂是该病防控的主要手段。目前,水貂阿留申病的主要诊断方法是依据临床症状和血清的对流免疫电泳检测。对流免疫电泳需要在实验室内进行,使用范围局限。综述了国外该病诊断的最新研究进展,以期为该病诊断技术的开发提供思路。

几种血清学技术在浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus)检测中的应用

通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳纯化浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus,TFMV)的外壳蛋白,4次免疫小鼠,获高纯度的抗血清。分别用Western blot、间接ELI SA、免疫扩散、火箭免疫电泳和对流免疫电泳5种免疫检测技术对TFMV样品进行了检测。结果表明,间接ELISA方法不能灵敏地检测新鲜病汁液中的病毒粒子,免疫扩散不能用于未变性病毒粒子的检测。Western blot灵敏度高,但操作复杂。火箭免疫电泳和对流免疫电泳均具有操作简单、灵敏度高、检测周期短的优点,但前者需抗血清的量大。5种免疫检测技术中,对流免疫电泳最适合浙贝母病样中TFMV的快速检测。

免疫固定电泳法检测尿本-周蛋白的临床应用

目的探讨免疫固定电泳检测尿本-周蛋白(BJP)的临床价值。方法采用免疫固定电泳及热沉淀反应法检测尿液BJP,并比较二者的灵敏度和特异性。结果 140例晨尿样本用免疫固定电泳检测,检出尿BJP阳性42例,其中IgGκ型BJP 26例,IgMλ型BJP 16例;用热沉淀反应法检测,检出尿BJP阳性24例。76例十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)提示尿蛋白异常的样本经免疫固定电泳的BJP检出率为55.3%,热沉淀反应法的检出率为31.6%。结论免疫固定电泳检测尿BJP具有较高的灵敏度和特异性。

血浆纤维连接蛋白在创伤修复中的变化和意义

目的：探讨血浆纤维连接蛋白ＦＮ（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｏｎ）在软组织创伤修复过程中的变化和意义。方法：采用大鼠腓肠肌钝击伤的模型，通过火箭免疫电泳测定血浆ＦＮ含量。结果：创伤后血浆ＦＮ急剧下降后迅速反弹，随后恢复非常缓慢。

胶孢炭疽菌的血清学研究

以4种胶孢炭疽菌的分生孢子为免疫原免疫家兔制备抗血清,采用琼脂双扩散和对流免疫电泳的方法对不同来源的20株炭疽菌进行了免疫学对比研究。结果表明:4种抗血清可分别与15个同种胶孢炭疽菌抗原中的大多数发生阳性反应,而只能与少部分不同种炭疽菌的抗原发生阳性反应。这说明同种的胶孢炭疽菌不同菌株间的亲缘关系较近,而不同种的炭疽菌间的亲缘关系较远。

蛋白质组学主要技术及其应用进展

蛋白质组学以蛋白质组为研究对象,从整体上对生命载体进行研究,已成为后基因组时代的研究热点。目前,蛋白质组学技术主要包括:蛋白质的分离、蛋白质鉴定及信息查询。该技术在皮肤研究中的应用及其临床意义得到重视并取得新进展。

应用不同材质容器对硝酸银染色效果的影响

目的:比较使用不同材料的染色容器对蛋白质十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)银染显色速度及效果的影响。方法:以小鼠脑蛋白的SDS-PAGE为材料,凝胶分别在玻璃平皿、医用搪瓷盘和密胺塑料盘中进行银染,参照常规银染方法;同时采用一种优化的银染方法作为对照,在医用搪瓷盘中进行。银染后蛋白条带用Quantity One凝胶定量软件进行灰度值分析。结果:常规方法银染的凝胶,在玻璃平皿中显色最快,蛋白条带灰度值最高;在医用搪瓷盘中显色速度及灰度值均次之;在密胺塑料盘中显色速度及灰度值最低。对照优化方法银染的凝胶,显色速度和蛋白条带灰度值远高于常规银染的凝胶。结论:对于小鼠脑蛋白的SDS-PAGE银染,常规方法中,用玻璃平皿效果最好,医用搪瓷盘次之,密胺塑料盘最差。优化方法可以大大提高用医用搪瓷盘银染的效果。

根据C_3转化率和尸体肛温推断死亡时间

本文观察了不同温度条件下,人血中C_3转化率的变化情况。在14个尸解案例中,根据C_3转化率和尸体肛温推断死亡时间,其95％可信区间为±11小时。测定C_3转化率的同时,还可以观察C_3的表型,为无名尸体的个人识别提供依据。

免疫印迹法和对流免疫电泳法检测ENA抗体的评价和意义

目的 : 评价两种检测可提取性核抗原 (ENA)多肽抗体方法在临床诊断中的价值。方法 : 同时应用免疫印迹法 (IBT)和对流免疫电泳法 (CIE)检测 2 18例结缔组织病 (CTD)患者和 15 0例非结缔组织病对照血清ENA多肽抗体 ,比较两者的检测结果。结果 : CTD中用IBT法测得抗ENA抗体阳性 14 8例占 6 7.9% ,用CIE法阳性 133例占 6 1.0 % ,两者之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。IBT阳性而CIE阴性为 18例 ,IBT阴性而CIE阳性者 4例。IBT可以同时检测 7种ENA抗体 ,而CIE只能检测 4种ENA抗体 ,但由于两种方法抗原制作过程中某些技术性因素会出现假阴性和假阳性。结论 : IBT是一种敏感性和特异性高而广谱的ENA血清学诊断方法 ,但同时应用CIE法可以相互补充和验证 ,从而提高抗ENA抗体检测的阳性率。

交叉免疫电泳法对人抗凝血酶-Ⅲ肝素结合组分的检测

目的建立检测人抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)中肝素结合组分的方法。方法利用火箭电泳法确定AT-Ⅲ抗原抗体比例,以交叉免疫电泳法检测AT-Ⅲ中的肝素结合组分,加热处理方法制备无肝素结合力的AT-Ⅲ样品。结果免疫电泳检测显示沉淀峰清晰,明确分辨出AT-Ⅲ样品中肝素结合组分及非结合组分并计算比例:混合血浆中结合肝素的AT-Ⅲ组分比例约为85.8%,AT-Ⅲ标准品、商业化制品及本实验室自制样品中结合肝素的AT-Ⅲ组分比例均接近100%。AT-Ⅲ样品经热处理(60℃,10h)后,不含枸橼酸钠的样品全部失去肝素结合力,在枸橼酸钠作保护剂的样品中,肝素结合组分占68.5%。结论建立的交叉免疫电泳法能够有效用于人AT-Ⅲ研发、生产时样品中肝素结合组分的检测。

烧伤病人血清中巨酶的鉴定和观察

在 1例烧伤病人血清中发现异常同工酶带 ,为了阐明其出现的背景和性质 ,采用涤纶膜同工酶电泳法和免疫对流电泳法对其进行鉴定 ,并连续观察其变化。结果显示 :同工酶电泳时在 L DH- 4处和 L DH- 5的阴极端出现异常带 ,其性质为 L DH与免疫球蛋白 G结合的复合物 。

对流免疫电泳法鉴定蚊胃血血源的研究

用对流免疫电泳技术(电泳法),以全血清为抗原,制备3种已知抗体血清检测未知抗原鉴定蚊虫胃血。并用环状沉淀试验法(沉淀法)比较观察不同抗血清及抗原浓度、反应时间与温度的实验。结果证明沉淀法的敏感性比电泳法高约2～3倍。两法同时检测中华按蚊及菲律宾按蚊胃血标本,结果两法牛血阳性率均为100％,但沉淀法尚出现30.43％及17.24％牛、猪血阳性反应,而电泳法则无;当沉淀法抗血清稀释为1:32时,两法反应结果一致。电泳法操作简便,可用于蚊胃血标本的鉴定。

根尖周病变中分泌型IgA的研究

选取２５位病人的２５颗尖周病患牙，用火箭免疫电泳技术测定其根管液内分泌型ＩｇＡ浓度。结果显示，尖周病患牙的根管液中含数量不等的分泌型 ｌｇＡ。其浓度仅与患牙是否开放有关，开放的根管中分泌型 ＩｇＡ浓度更高。我们认为，ＩｇＡ存在于体液中并具有局部抗感染的重要作用，而分泌型 ＩｇＡ的作用可能不是消灭抗原而是阻止抗原进入全身免疫系统。