细菌内毒素检查微量凝胶法的研究

目的通过研究微量凝胶法确定其能否满足《中华人民共和国药典》(2020年版)(简称“《中国药典》”)要求,作为现有细菌内毒素检查法的补充。方法依据《中国药典》四部“9101药品质量分析方法验证指导原则”规定,按照其项下“杂质测定”中“限度”项目具体要求,对微量凝胶法(5μL样品+50μL鲎试剂)进行专属性、检测限、耐用度3项内容进行验证,并采用凝胶法和微量凝胶法对85批样品进行品种适用性比较研究,对384批样品进行一致性比对研究。结果经方法学验证,微量凝胶法符合《中国药典》对定性方法的要求,微量凝胶法与凝胶法相比,品种适用性与一致性比对具有等效结果。结论微量凝胶法可以作为凝胶法的补充方法在我国推广。

检验用鲎试剂及重组试剂的现状与思考

目的通过研究检验用鲎试剂及重组试剂的使用及管理现状,为细菌内毒素检测和鲎试剂使用的科学有序发展提供参考。方法结合日常医疗产品检测和管理工作实践,梳理检测用鲎试剂的相关历史沿革和国内外监管现状,分析在鲎资源短缺情况下,细菌内毒素检测主要替代方法及其所用重组试剂的基本情况。结果与结论对目前在无菌医疗产品细菌内毒素检测领域可能面临的原材料短缺、监管方式有待进一步完善等主要问题进行总结,建议明确鲎试剂的管理归属、对医疗产品检验用鲎试剂的质量标准开展标准提高及生产质量管理的研究工作、加强鲎试剂检测替代方法相关试剂的监管等。

重组C因子法检测医疗器械中细菌内毒素的方法学研究

目的 探究重组C因子法检测不同医疗器械中细菌内毒素的适用性,为重组C因子法在医疗器械检验中的使用提供依据。方法 以2020年版《中国药典》四部9251细菌内毒素检查法应用指导原则为依据,对重组C因子检测法的准确度进行验证,并按GB/T 16886.1-2011中对医疗器械的分类,选取不同医疗器械样品,使用重组C因子试剂盒进行检测,与凝胶法及动态浊度法进行比对。结果 高、中、低浓度内毒素标准品采用重组C因子法的实测值与理论值具有良好的相关性,说明方法具有较好的准确度,且不同医疗器械产品使用重组C因子法和动态浊度法检测结果的比值在50%~200%范围内,回收率在50%~200%之间,与凝胶法检测结果也一致。结论 重组C因子法对于医疗器械中细菌内毒素的检测具有良好的适用性。

重组鲎C因子(rFC)替代鲎血制备鲎试剂的研究进展

鲎试剂广泛用于检测医药产品中的细菌内毒素,但由于鲎资源稀缺,制约了鲎试剂的生产。重组鲎C因子(rFC)作为鲎试剂的替代品,通过基因工程表达获得,可特异性检测内毒素,不依赖动物资源。综述了rFC的检测机制、发展历程及药典认可情况。研究表明,rFC方法具有特异性强、不依赖动物资源等优点,已渐被药典认可,是解决鲎试剂供应短缺的可靠方案,具有重要的应用前景。

动态显色法定量检测泊沙康唑原料药中细菌内毒素的含量

目的:以动态显色法定量检测不溶于水的泊沙康唑原料药中细菌内毒素的含量。方法:根据注射液临床用量从严拟订沙康唑原料药限值为0.25 EU·mg^(-1),以稀释液(二甲基亚砜∶RIPA强裂解液=1∶1)为溶剂处理泊沙康唑原料,采用两个不同厂家的动态显色法鲎试剂,依据《中国药典》2020年版四部通则1143(方法2光度测定法之动态显色法)要求,确定样品不干扰的浓度,最后对3批样品的细菌内毒素进行定量检测。结果:两个厂家的鲎试剂标准曲线|r|均大于0.980;样品质量浓度≤0.02 mg·mL^(-1)时,细菌内毒素回收率在范围内;3批样品的细菌内毒素定量检测结果均符合要求。结论:以0.25 EU·mg^(-1)为限值,动态显色法用于不溶于水的泊沙康唑原料药细菌内毒素定量检测,方法可行,过程可控。

LAL/GNB法筛选辐照鸡肉的应用研究

[目的]探讨内毒素检测(LAL)与革兰氏阴性菌计数(GNB)相结合的方法应用于辐照鸡肉的筛选的可能性。[方法]市售鸡肉丁以50g每份分装后,以γ射线进行辐照处理,剂量分别为0kGy、2kGy、6kGy,每个剂量各12份,通过革兰氏阴性菌的培养计数估计样品中存在的活的革兰氏阴性菌的量,通过内毒素浓度定量估计活的和死亡的革兰氏阴性菌总量,比较两者差异来判定是否经过辐照处理。[结果]辐照剂量为6kGy时,12个样品被检测出经过辐照处理。辐照剂量为2kGy时,8个样品被检测出经过辐照处理,4个样品检测出未经过辐照处理。辐照剂量为0kGy时,12个样品检测结果均为未经过辐照处理。[结论]LAL/GNB法可以应用于辐照鸡肉的筛选。

LAL test and RPT for endotoxin detection of CPT-11/DSPE-mPEG_(2000) nanoformulation: What if traditional methods are not applicable?

Endotoxin detection is an important step in drug characterization. Herein we found that a chemotherapeutic drug nanoformulation composed of irinotecan hydrochloride(CPT-11) and an amphiphilic molecule DSPE-mPEG_(2000) can interfere with the limulus amebocyte lysate assay(LAL). Furthermore, the rabbit pyrogen test(RPT) results indicated that at a relatively high dosage, the drug irinotecan hydrochloride can induce a hypothermia effect which may render the RPT results ambiguous in determination of the safety of the drug formulation.Our findings demonstrate limitations of endotoxin detection in micellar drugs,and call for the necessity of developing reliable endotoxin detection methods that can overcome the interference of nanomaterials in order to better ensure the drug safety of patients in future pharmaceutical drug development.

基因重组鲎试剂检测促肝细胞生长素注射液中细菌内毒素含量适用性研究

目的 探讨基因重组鲎试剂用于测定促肝细胞生长素注射液中细菌内毒素含量的适用性。方法 分别使用基因重组鲎试剂和天然美洲鲎试剂建立细菌内毒素标准曲线,采用供试品干扰试验测定供试品溶液中外加内毒素的回收比,采用动态显色法测定供试品中细菌内毒素含量,并比较2种鲎试剂检测结果的差异。结果 2种鲎试剂细菌内毒素浓度在0.008~5 EU/mL范围内与反应时间线性关系较好(|r|≥0.998)。供试品在稀释2倍或20倍时对反应无干扰,细菌内毒素回收比均在50%~200%之间,26批供试品的细菌内毒素含量均小于限值(37.5 EU/mL)。2种鲎试剂细菌内毒素含量检测结果无显著差异(P> 0.05)。结论 该研究中建立了该制剂细胞内毒素的定量检测方法,准确性和灵敏度好,可用于该产品生产、流通环节细菌内毒素的质量控制。

首批单核细胞活化反应检查法专用细菌内毒素国家标准品的建立与应用

目的 为《中华人民共和国药典》(2020年版)9301单核细胞活化反应检查法建立专用的细菌内毒素国家标准品,保障注射剂的质量安全。方法 通过生产制备、协作标定、均匀性考察等研究,建立了首批细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应检查法专用)。结果 全国5家药品检验所使用3种方法进行协作标定,标定结果间经方差分析无显著性差异,加权平均值为每支152.0 EU,95%置信区间为每支136.2~169.5.0 EU,可信限率为10.96%。均匀性研究符合规定。待标品使用单核细胞活化反应检查法检测结果平均值为每支144.6 EU。最终确定待标品为细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应测定用),效价为每支150 EU。结论 建立了首批细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应检查法用,批号:150608-202101)。

壳聚糖修饰载鲎血蛋白-白蛋白微球的制备及其活性研究

文章通过分析壳聚糖修饰的牛血清白蛋白为载体制备包载鲎血蛋白的微球,考察制备微球的最佳工艺和活性。载药微球粒径大小较为均一,粒径范围为(285±54)nm。Zeta电位值为(-42.69±3.69)mV,包封率为(83.075±4.86)%,载药量为(34.25±2.41)%,在人工血液(pH=7.4)、肠液(pH=6.8)、胃液(pH=1.2)中24 h的累积释放量分别为55.63%、55.25%、48.75%。载药微球生物相容性高,稳定性好,药物释放具有明显的缓释效果。

柴胡总皂苷抗内毒素活性研究

目的 :探讨柴胡总皂苷 (BCS)抗内毒素活性。方法 :从柴胡中提出柴胡总皂苷 ,用体外鲎试验法、细菌内毒素致兔热模型、细菌内毒素致卡介苗增敏小鼠毒性证实其抗内毒素活性。结果 :体外鲎试验法显示将 5 0mg·ml 1的柴胡总皂苷溶液稀释至 32倍仍有直接破坏内毒素作用 ;解热实验显示 ,BCS +LPS组、模型组 (LPS)、BCS组的最大升温和平均升温分别为 0 0 5℃和 0 75℃ ,0 0 1℃和 - 0 2 5℃ ,0 4 9℃和 - 0 37℃ ,BCS +LPS组与模型组相比差异显著 (P <0 0 1) ;细菌内毒素致小鼠毒性实验显示 ,BCS +LPS组死亡率 (13 3% )大于BCS组 (5 0 % ) ,但与模型组 (90 0 % )相比 ,差异显著 (P <0 0 1)。结论 :柴胡总皂苷具有抗内毒素活性。

鲎试剂的研究及应用进展

鲎试剂已广泛用于细菌内毒素的检验,本文介绍了鲎试剂的生产、分类,用于细菌内毒素检查的反应原理和检测方法、应用领域以及国内外鲎试剂生产和质量的现状和研究进展,并提出了我国鲎试剂应用中急需解决的问题。

58例输液反应原因分析

目的分析58例临床输液反应的原因,寻找预防措施,减少输液反应的发生。方法对我院近两年发生的58例输液反应从致热原、细菌、药物因素、输液器具、季节、患者年龄等方面进行分析。结果对输液反应的药液进行热原检测,共有5例阳性;血培养7例阳性;药液细菌培养2例阳性,同一批号未开封药液细菌培养无细菌生长;输液器及头皮针细菌培养和热原检测全部阴性;引起输液反应的药物以中药制剂、大分子物质、血液制品及含K+的药物为主;秋季为高发季节;发生率高的为中老年人。结论引起输液反应的原因复杂,严格质量控制和无菌操作,以减少输液反应的发生。

重组C因子法检测细菌内毒素的方法适用性研究

目的考察重组C因子法的品种适用性,以加快该方法的推广。方法选取有代表性的6个典型品种,每个品种3个批次,进行重组C因子法干扰试验,并经过国内4个实验室进行复核验证。以回收率为评价指标,以2015年版《中国药典》为评价标准,总结4个实验室应用该方法产生的问题和解决策略。结果 6个品种18个批次在验证实验室和3个复核实验室的回收率结果均在《中国药典》要求的50%～200%范围内,符合干扰试验要求;该方法应用中的常见问题和解决策略共有7项21条。结论重组C因子法在国内4个实验室对6个典型品种具有较好的品种适用性。

不同浓度氢氧化钙溶液对细菌内毒素降解作用的比较研究

目的研究3种不同浓度的氢氧化钙溶液对细菌内毒素的降解作用。方法选用E.coli标准内毒素稀释成10Eu/ml后分别与3种不同浓度的氢氧化钙溶液混合,37℃水浴,经60min、120min作用后采用动态浊度法鲎实验检测剩余内毒素浓度。结果在相同作用时间内,氢氧化钙溶液浓度越高降解作用越强,结果有极显著性差异;同一种浓度氢氧化钙溶液作用时间越长其降解作用越强,结果有显著性差异。结论氢氧化钙作为根管治疗药物具有降解G-菌内毒素的作用,此降解作用具有浓度和时间的依赖性。

热毒宁注射液中内毒素的快速检测

目的研究一种快速检测热毒宁注射液中内毒素的新方法。方法根据细菌内毒素在溶液中团聚的光散射特征,建立内毒素浓度与团聚粒子平均粒径的线性方程对热毒宁注射液中的内毒素进行检查,并以鲎试剂法作验证。结果经方法学考察,线性关系良好,稳定性、精密度、重复性的相对误差(RSD)均控制在1.0%左右,加样回收率达到100%以上及RSD为3.5%;分别测量3个批次热毒宁注射液的内毒素浓度均值为0.36 EU/m L,经鲎试剂法验证测得为0.39 EU/m L。结论与家兔法和鲎试剂法测定内毒素相比,本法检测热毒宁注射中内毒素快速简便,可满足临床要求。

盐酸莫西沙星注射液细菌内毒素检查方法学研究

目的研究建立盐酸莫西沙星注射液的细菌内毒素检查方法。方法按《中国药典》2010年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法及相关规定,使用2个不同厂家的鲎试剂对某制药有限公司生产的盐酸莫西沙星注射液进行了细菌内毒素检查法的方法学研究。结果调节样品pH值至6.0-8.0,使用稀释剂Ⅰ稀释样品浓度至0.625mg·mL^-1时,可排除干扰作用。结论盐酸莫西沙星注射液可适用细菌内毒素检查法。拟定标准：取本品,依法检验（《中国药典》2010年版二部附录XI E）,每1mg盐酸莫西沙星中含细菌内毒素的量应小于0.8EU。

深龋腐质及龋损下方牙本质中内毒素含量的测定

目的 比较不同活动性深龋的腐质与龋损下方牙本质中内毒素含量,探讨内毒素水平与龋损活动 性的关系。方法 选择44颗临床拔除的无症状深龋智齿,取其腐质及龋损下方牙本质测定内毒素含量,10颗正常 智齿的牙本质粉作对照。用鲎试剂动态浊度法测定内毒素的量。用t检验与卡方检验统计实验结果。结果 在所 有龋损腐质中均检测到高浓度的内毒素,急性龋组内毒素浓度显著高于慢性龋组(95.787±64.942EU/mg,VS 44.605±36.538EU/mg);78.3%的龋损下方牙本质粉中测出内毒素,而正常牙本质粉均不含内毒素;在所有急性 龋下方的牙本质及64%慢性龋下方的牙本质中测出含内毒素,检出率有显著性差异,其内毒素含量分别为1.806± 1.795与0.85±1.549EU/mg,差异无显著性。结论 龋损组织中内毒素量与龋损活动性相关;龋损组织中的内毒 素可以渗到下方健康牙本质中,可能成为牙髓损伤的原因。

定量测定慢性前列腺炎病人前列腺按摩液和血浆的内毒素水平的临床意义──附45例分析

目的：探讨测定慢性前列腺炎（ＣＰ）病人前列腺按摩液（ＥＰＳ）和血浆内毒素水平的临床价值。方法：对４５例ＣＰ病人行ＥＰＳ显微镜检查和细菌培养，测定其ＥＰＳ和血浆的内毒素含量，并与对照组比较。结果：４５例ＣＰ病人的ＥＰＳ和血浆内毒素水平显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）；且革兰阴性菌性ＣＰ病人的ＥＰＳ和血浆的内毒素水平与革兰阳性菌性ＣＰ病人比较均显著升高。结论：测定ＣＰ病人的ＥＰＳ和血浆内毒素的水平对ＣＰ的诊断和治疗均有指导意义，并且方法简便、快捷、费用低廉。

一次性使用注射器与玻璃注射器热原检测结果比较

为了解一次性注射器和反复使用的玻璃注射器含热原情况,用鲎试剂检测法进行了批量检测。结果,检测1、2、5、10、20、50ml等 6种规格 90批次一次性注射器,热原均为阴性,合格率 100%。对清洁灭菌后相同规格的玻璃注射器检测 90批次,检出热原阳性率平均为 9. 8%, 1ml规格的注射器检出热原阳性率为 25%。结论,本次检测的一次性注射器热原全部为阴性;反复使用的玻璃注射器热原阳性者占 9. 8%,说明存在清洗不彻底现象。