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大菱鲆(Scophthalmus maximusL.)鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)感染症及其病原特性 被引量:3
1
作者 房海 陈翠珍 +3 位作者 张晓君 葛慕湘 何振平 巩元芳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期144-146,共3页
对一养殖场所发生的大菱鲆(S cophtha lm usm ax im us L.)病害进行了发病情况、临床表现、病理变化及病原等方面的检验,结果表明为细菌性败血感染症。通过对15尾病(死)大菱鲆病变组织中细菌检查、细菌分离与鉴定,以及人工感染试验的致... 对一养殖场所发生的大菱鲆(S cophtha lm usm ax im us L.)病害进行了发病情况、临床表现、病理变化及病原等方面的检验,结果表明为细菌性败血感染症。通过对15尾病(死)大菱鲆病变组织中细菌检查、细菌分离与鉴定,以及人工感染试验的致病作用等,表明所检出的细菌为利斯顿氏菌属(L istonella M acD one ll and Co lw e ll 1986)的鳗利斯顿氏菌[L.angu illarum(B ergem an 1909)M acD one ll and Co lw e ll 1986],系该病例的病原菌。 展开更多
关键词 大菱鲆 细菌性败血症 鳗利斯顿氏菌
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Isolation and Characterization of Pathogenic Listonella anguillarum of Diseased Haft-Smooth Tongue Sole(Cynoglossus semilaevis Günther) 被引量:13
2
作者 TANG Xiaoqian ZHOU Li ZHAN Wenbin 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2008年第3期343-351,共9页
Studies were conducted to determine the cause of the acute mortality of half-smooth tongue sole Cynoglossus semilaevis Günther juveniles in a fish farm in Jimo,Shandong Province,China,in June 2006. Gross signs of... Studies were conducted to determine the cause of the acute mortality of half-smooth tongue sole Cynoglossus semilaevis Günther juveniles in a fish farm in Jimo,Shandong Province,China,in June 2006. Gross signs of the diseased tongue sole included several petechiae and ecchymoses on the body and fin necrosis and hemorrhagic lesion at the base of the fin. Bacteria were isolated from kidney,liver and hemorrhagic lesions of the diseased tongue sole. Among14 strains,SJ060621 was proved to be highly virulent to juvenile tongue sole with LD50 value of <1.0×105 colony forming units(CFU) mL-1,while the remaining 13 were avirulent. Among the 16 antibiotics tested,SJ060621 was sensitive to gentamicin and nitrofurantoin. It was identified as Listonella anguillarum with conventional plate and tube tests in combination with API 20E analysis. 16S rRNA gene and partial HSP60 gene sequenceing analysis revealed that the strain was highly homologous with L. anguillarum. Examination of the infected musculature by electron microscopy indicated numerous bacteria and lots of macrophages containing phagocytosed bacteria. Histopathological investigations revealed severe necrotic degenerative changes in the infected organs. Indirect immunofluorescence assay(IFA) was employed to detect the location of occurrence of bacteria,and bacteria were found in aggregations in the inflammatory areas in musculature. 展开更多
关键词 半滑舌鳎 隔离方法 基因
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Effect of cadmium on the defense response of Pacific oyster Crassostrea gigas to Listonella anguillarum challenge 被引量:1
3
作者 丛明 吕家森 +1 位作者 吴惠丰 赵建民 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2013年第5期1002-1009,共8页
Heavy metal pollution can affect the immune capability of organisms.We evaluated the effect of cadmium(Cd) on the defense responses of the Pacific oyster Crassostrea gigas to Listonella anguillarum challenge.The activ... Heavy metal pollution can affect the immune capability of organisms.We evaluated the effect of cadmium(Cd) on the defense responses of the Pacific oyster Crassostrea gigas to Listonella anguillarum challenge.The activities of several important defensive enzymes,including superoxide dismutase(SOD),glutathione peroxidase(GPx),acid phosphatase(ACP),Na+,K+-ATPase in gills and hepatopancreas,and phenoloxidase-like(POL) enzyme in hemolymph were assayed.In addition,the expression levels of several genes,including heat shock protein 90(HSP90),metallothionein(MT),and bactericidal/permeability increasing(BPI) protein were quantified by fluorescent quantitative PCR.The enzyme activities of SOD,ACP,POL,and GPx in hepatopancreas,and the expression of HSP90 were down-regulated,whereas GPx activity in the gill,Na+,K+-ATPase activities in both tissues,and MT expression was increased in Cdexposed oysters post L.anguillarum challenge.However,BPI expression was not significantly altered by co-stress of L.anguillarum infection and cadmium exposure.Our results suggest that cadmium exposure alters the oysters' immune responses and energy metabolism following vibrio infection. 展开更多
关键词 太平洋牡蛎 镉(CD) 防御反应 鳗弧菌 谷胱甘肽过氧化物酶活性 超氧化物歧化酶 热休克蛋白90 荧光定量PCR
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半滑舌鳎病原鳗利斯顿氏菌表型及分子特征研究 被引量:33
4
作者 张晓君 秦国民 +3 位作者 阎斌伦 徐静 毕可然 秦蕾 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期112-122,共11页
2008年12月,江苏赣榆某渔场养殖半滑舌鳎出现大量死亡,症状主要表现为:头部、鳃盖及鳍基出血,尾鳍腐烂,腹腔膨胀并积有大量腹水,部分病鱼肠管脱出肛外。从病鱼肝脏、腹水中分离出大量优势生长的细菌,人工感染试验证明其对半滑舌鳎有较... 2008年12月,江苏赣榆某渔场养殖半滑舌鳎出现大量死亡,症状主要表现为:头部、鳃盖及鳍基出血,尾鳍腐烂,腹腔膨胀并积有大量腹水,部分病鱼肠管脱出肛外。从病鱼肝脏、腹水中分离出大量优势生长的细菌,人工感染试验证明其对半滑舌鳎有较强的致病性。对3株分离菌进行了形态特征、理化特性、胞外酶及溶血素活性等表型生物学性状检验;测定了代表菌株的16SrRNA和gyrB基因序列,分析了16 S rRNA和gyrB两种基因序列的同源性,并构建了系统发生树,比较了两种基因对分离菌的鉴定能力;结果表明gyrB基因用于细菌种间鉴定更具优越性;基于16S rRNA和gyrB基因的系统发育学分析表明分离菌与鳗利斯顿氏菌具有高同源性,根据分离菌的表型及分子特征,判定分离菌为利斯顿氏菌属(Listonella MacDonell and Colwell 1986)的鳗利斯顿氏菌[Listonella anguillarum (Bergeman 1909) MacDonell and Colwell 1986]。胞外酶活性及溶血活性检测表明3株分离菌均具有淀粉酶、蛋白酶、卵磷脂酶等胞外酶活性,在含7%家兔脱纤血液营养琼脂培养基上呈β型溶血,PCR检测3株供试菌均可扩增出大小约493 bp的溶血素基因和大小约248 bp的金属蛋白酶基因。分离菌的耐药谱测定结果显示,对供试49种抗菌药物中的青霉素G等13种药物耐药,对羧苄青霉素等6种药物存在敏感与耐药的株间差异。 展开更多
关键词 半滑舌鳎(Cynoglossusse milaevis Günther) 鳗利斯顿氏菌(listonella anguillarum) 16S RRNA基因 gyrB基因
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香鱼凝血因子X基因表达与鳗利斯顿氏菌感染的相关性 被引量:25
5
作者 黄左安 陈炯 +2 位作者 陆新江 史雨红 李明云 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期492-498,共7页
凝血途径的关键因子--凝血因子X(coagulation factor X,FX),是一种与免疫调控密切相关的维生素K依赖型丝氨酸蛋白酶。该研究克隆了香鱼(Plecoglossus altivelis)FX基因全长cDNA序列,它由1817个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,编码... 凝血途径的关键因子--凝血因子X(coagulation factor X,FX),是一种与免疫调控密切相关的维生素K依赖型丝氨酸蛋白酶。该研究克隆了香鱼(Plecoglossus altivelis)FX基因全长cDNA序列,它由1817个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,编码一个由453个氨基酸组成的相对分子质量为5.07×104的蛋白。香鱼FX与已知的哺乳动物FX的结构相似,N端24个残基为信号肽序列。序列比较表明,香鱼FX与斑马鱼FX的氨基酸同一性最高,为53%。在健康香鱼中,FX基因mRNA主要在肝组织中表达,脑和鳃中也有少量表达。实时荧光定量PCR分析揭示,鳗利斯顿氏菌感染后香鱼肝组织中FX基因mRNA表达显著上调,16h时达到5.43倍。通过原核表达系统表达了香鱼FX丝氨酸蛋白酶结构域,并制备了抗血清。Western blotting分析显示,鳗利斯顿氏菌感染后香鱼血清中FX含量显著增加,并随着时间延长上调倍数不断增大,在36h时达到3.68倍。据此,FX基因mRNA及蛋白的表达与鳗利斯顿氏菌感染香鱼的过程紧密相关,揭示它可能在鱼类抗细菌感染的免疫反应中起重要作用。 展开更多
关键词 凝血因子X 香鱼 鳗利斯顿氏菌 实时荧光定量PCR WESTERN BLOTTING
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大菱鲆(Scophthalmus maximus)病原鳗利斯顿氏菌的鉴定 被引量:12
6
作者 张晓君 陈翠珍 +3 位作者 房海 战文斌 靳晓敏 王秀云 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期417-423,共7页
采用表观分类学及分子生物学方法,对从大菱鲆细菌性败血感染症的病(死)鱼中分离到的相应病原菌,进行了形态特征、理化特性等较系统的鉴定及代表菌株DNA中G+Cmol%的测定;同时,择代表菌株进行了16SrRNA基因的分子鉴定,测定了16SrRNA基因... 采用表观分类学及分子生物学方法,对从大菱鲆细菌性败血感染症的病(死)鱼中分离到的相应病原菌,进行了形态特征、理化特性等较系统的鉴定及代表菌株DNA中G+Cmol%的测定;同时,择代表菌株进行了16SrRNA基因的分子鉴定,测定了16SrRNA基因序列、分析了相关细菌相应序列的同源性、构建了系统发生树。结果表明,所检30株菌均为利斯顿氏菌属(ListonellaMacDonellandColwell1986)的鳗利斯顿氏菌[L·anguillarum(Bergeman1909)MacDonellandColwell1986],择S010610-1株、S010610-3株及S010623-1株作为代表菌株进行的16SrRNA基因序列测定,不包括引物结合区,所扩增的16SrRNA基因序列长度,S010610-1株为1466bp(GenBank登录号:AY963630)、S010610-3株为1416bp(GenBank登录号:AY963631)、S010623-1株为1424bp(GenBank登录号:AY963632),与GenBank数据库中弧菌属细菌的同源性在97%—99%。 展开更多
关键词 大菱鲆 鳗利斯顿氏菌 鉴定 系统发育学分析
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引起养殖许氏平鲉死亡的鳗利斯顿氏菌的分离鉴定及致病性 被引量:7
7
作者 王庚申 王印庚 +5 位作者 张正 廖梅杰 陈君 张辰仓 刘志伟 李德军 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1290-1296,共7页
从患病许氏平鲉的病灶处分离得到一株优势菌,记为SS-1。通过两点背部肌肉注射进行人工感染实验,证明该菌对健康许氏平鲉的半数致死浓度为9.6×106CFU/mL,可感染许氏平鲉的多种内脏和组织。细菌形态学和生理生化特征测定结果显示,菌... 从患病许氏平鲉的病灶处分离得到一株优势菌,记为SS-1。通过两点背部肌肉注射进行人工感染实验,证明该菌对健康许氏平鲉的半数致死浓度为9.6×106CFU/mL,可感染许氏平鲉的多种内脏和组织。细菌形态学和生理生化特征测定结果显示,菌株SS-1为革兰氏阴性,短杆状,极生单鞭毛;氧化酶阳性、接触酶阳性、硝酸盐还原阳性、吲哚产生阳性、V-P试验阳性、精氨酸双水解酶阳性、H2S产生阴性等,与鳗利斯顿氏菌特征相符。16S rRNA基因序列分析结果表明,该菌与鳗利斯顿氏菌的同源性达到了99%,因此,将菌株SS-1鉴定为鳗利斯顿氏菌。 展开更多
关键词 许氏平鲉 鳗利斯顿氏菌 细菌鉴定 致病性
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基于16S rRNA和recA香鱼鳗利斯顿氏菌的分离鉴定 被引量:8
8
作者 王成义 闫茂仓 +5 位作者 陈少波 管敏鑫 单乐州 艾为明 谢起浪 蔡延(马奔) 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期84-90,共7页
为研究引起香鱼(Plecoglossus altivelis)出血溃烂症病因及致病菌系统发育地位,本研究从患病香鱼的肝脏、肾脏及体表分离到11株病原菌(编号:X0901-X0911),运用常规细菌生理生化方法鉴定致病菌所属种类;运用16SrRNA基因、recA基因序列分... 为研究引起香鱼(Plecoglossus altivelis)出血溃烂症病因及致病菌系统发育地位,本研究从患病香鱼的肝脏、肾脏及体表分离到11株病原菌(编号:X0901-X0911),运用常规细菌生理生化方法鉴定致病菌所属种类;运用16SrRNA基因、recA基因序列分析方法研究致病菌的系统发育地位。细菌生理生化鉴定结果表明:致病菌为鳗利斯顿氏菌,11株细菌生理生化结果相同,均为革兰氏阴性杆菌、氧化酶阳性、接触酶阳性、吲哚阳性、精氨酸脱羧酶阳性、精氨酸双水解酶阳性、硝酸盐还原阳性、甘露醇阳性、MR测定阳性;H2S阴性、V-P测定阴性等。根据16SrRNA基因、recA基因序列分别构建弧菌科常见细菌系统进化树,结果表明:致病菌与鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)均聚为一枝,聚类结果与细菌生理生化鉴定结果相符。致病菌与鳗利斯顿氏菌16SrRNA基因、recA基因的同源性分别为99.9%、99.8%。以recA基因构建的系统进化树的拓扑学结构与16SrRNA基因建树结果相类似。此外,与16SrRNA基因相比,recA基因在不同物种之间具有更高的鉴别能力,本研究表明recA基因适合作为弧菌科常见细菌物种间进化关系研究的标记。 展开更多
关键词 香鱼 鳗利斯顿氏菌 分离 鉴定
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豹纹鳃棘鲈病原鳗利斯顿氏菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量:7
9
作者 姚学良 徐晓丽 +3 位作者 张振奎 丁子元 宋昀鹏 崔宽宽 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期39-45,共7页
从患病的豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)的肾脏中分离到1株优势菌33002,人工感染试验证实其对豹纹鳃棘鲈有较强的致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析及16SrRNA和gyrB基因序列系统发育树分析对菌株33002进行鉴定。结果显示,菌... 从患病的豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)的肾脏中分离到1株优势菌33002,人工感染试验证实其对豹纹鳃棘鲈有较强的致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析及16SrRNA和gyrB基因序列系统发育树分析对菌株33002进行鉴定。结果显示,菌株33002为革兰氏阴性弧菌,生化特性与利斯顿氏菌属的鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)相近,基于gyrB基因序列的系统发育分析,菌株33002与鳗利斯顿氏菌聚为一支。对48种抗生素的药敏结果显示,菌株33002对红霉素、阿奇霉素等25种药物敏感,对恩诺沙星、杆菌肽等22种药物不敏感。 展开更多
关键词 豹纹鳃棘鲈 鳗利斯顿氏菌 生理生化特性 16S RRNA GYRB
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鲤病原鳗利斯顿氏菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量:6
10
作者 张晓君 阎斌伦 +3 位作者 邴旭文 毕可然 秦蕾 秦国民 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2009年第5期47-53,61,共8页
从患病鲤(Cyprinus carpio L.)体内分离到一株优势生长菌,人工感染试验证明该菌对鲤有较强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等生物学性状检验;测定了分离菌的16S rRNA和gyrB基因的部分序列,并与相关细菌16S rRNA和gyrB基因... 从患病鲤(Cyprinus carpio L.)体内分离到一株优势生长菌,人工感染试验证明该菌对鲤有较强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等生物学性状检验;测定了分离菌的16S rRNA和gyrB基因的部分序列,并与相关细菌16S rRNA和gyrB基因序列进行比对后,构建了基于两种基因的系统发生树。结果显示:分离菌所扩增的16S rRNA和gyrB基因序列与GenBank数据库中鳗利斯顿氏菌的16S rRNA和gyrB基因序列相似性均在97%以上,其16S rRNA基因序列长度为1449 bp(GenBank登录号:FJ824662),gyrB基因序列长度为1202 bp(Gen-Bank登录号:GQ452957);胞外酶活性及溶血活性检测表明分离菌具有淀粉酶、蛋白酶、明胶酶、卵磷脂酶活性,但不具有脂酶活性;在含7%家兔脱纤血液营养琼脂培养基上,呈β型溶血,分离菌均具有金属蛋白酶基因及溶血素基因。根据分离菌的表型特征及分子特征,判定分离菌为利斯顿氏菌属(Listonella MacDonell and Colwell1986)的鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)。分离菌的耐药谱测定结果显示,对供试49种抗菌药物中的青霉素G等12种药物耐药,对克林霉素等5种药物敏感,对恩诺沙星等32种药物高度敏感。 展开更多
关键词 鲤(Cyprinus carpio L.) 鳗利斯顿氏菌(listonella anguillarum) 生物学特性 16S RRNA基因 gyrB基因
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香鱼补体成分C9基因的克隆、序列分析及表达 被引量:5
11
作者 孔铖将 黄左安 +2 位作者 陈炯 史雨红 陆新江 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期151-157,共7页
补体成分C9是构成膜攻击复合体引起靶细胞溶解破坏的重要组成成分。该文测定了香鱼C9 (aC9)基因的cDNA全序列, 序列全长2 125个核苷酸, 编码一个由592个氨基酸组成、相对分子质量为6.56×104的前体蛋白, N端22个氨基酸为信号肽序... 补体成分C9是构成膜攻击复合体引起靶细胞溶解破坏的重要组成成分。该文测定了香鱼C9 (aC9)基因的cDNA全序列, 序列全长2 125个核苷酸, 编码一个由592个氨基酸组成、相对分子质量为6.56×104的前体蛋白, N端22个氨基酸为信号肽序列。序列分析表明, aC9与虹鳟C9的氨基酸同源性最高, 达56.8%, 与其它鱼类C9的同源性介于40.9%~53.8%之间。aC9在健康香鱼肝、脾、肠、鳃和肌肉有表达, 其中在肝内的表达量最高。实时荧光定量PCR的结果显示, 鳗利斯顿氏菌侵染4 h后, 肝中aC9 mRNA表达量显著上调, 并随着时间的推移在16 h时达到峰值。Western blotting分析的结果显示, 鳗利斯顿氏菌侵染后香鱼血清中的aC9蛋白随着时间的推移呈显著上调。以上结果表明, 香鱼肝组织C9基因表达变化与鳗利斯顿氏菌的侵染密切相关, 展开更多
关键词 补体成分C9 香鱼 鳗利斯顿氏菌 实时荧光定量PCR WESTERN BLOTTING
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大菱鲆病原鳗利斯顿氏菌的药物敏感性测定与分析 被引量:7
12
作者 张晓君 秦国民 +2 位作者 陈翠珍 房海 阎斌伦 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期35-38,共4页
对从大菱鲆(Turbot,Scophthalmus maximus L.)细菌性败血感染症的病(死)鱼中分离到并经鉴定的病原鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)进行了对常用抗菌类药物及弧菌抑制剂O/129的敏感性测定。结果表明,供试的20株鳗利斯顿氏菌均对所... 对从大菱鲆(Turbot,Scophthalmus maximus L.)细菌性败血感染症的病(死)鱼中分离到并经鉴定的病原鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)进行了对常用抗菌类药物及弧菌抑制剂O/129的敏感性测定。结果表明,供试的20株鳗利斯顿氏菌均对所测定的37种抗菌类药物中的头孢噻肟等18种药物高度敏感、对青霉素G等6种药物耐药、对头孢唑啉等10种药物耐药性菌株间有差异;2株(S010610-3和S010610-4)对弧菌抑制剂O/129具抗性,余18株均表现敏感。 展开更多
关键词 大菱鲆 鳗利斯顿氏菌 药物敏感性
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抗鳗利斯顿氏菌鸡卵黄抗体制备及其活性研究 被引量:5
13
作者 周永强 李登峰 +3 位作者 刘联国 郭安南 陈炯 王重彬 《宁波大学学报(理工版)》 CAS 2012年第4期1-5,共5页
鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)是常见的水产动物致病菌.为获得高效抗L.anguillarum卵黄抗体(egg yolk antibodies,IgY),用纯培养的L.anguillarum制备抗原,免疫蛋鸡,联用乙酸-乙酸钠稀释、(NH4)2SO4与Na2SO4盐析、透析法由蛋黄... 鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)是常见的水产动物致病菌.为获得高效抗L.anguillarum卵黄抗体(egg yolk antibodies,IgY),用纯培养的L.anguillarum制备抗原,免疫蛋鸡,联用乙酸-乙酸钠稀释、(NH4)2SO4与Na2SO4盐析、透析法由蛋黄分离纯化IgY.对制备的IgY进行了体内、外抑菌与吞噬调理活性研究:分别将抗L.anguillarum的IgY、由普通鸡蛋IgY与L.anguillarum(103CFU.mL-1)等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),计算成活率;分别将抗L.anguillarum的IgY、普通鸡蛋IgY与L.anguillarum(106CFU.mL-1)及血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果表明,提取的IgY浓度为8.93mg.mL-1,每个鸡蛋可获得IgY约120 mg,抗体纯度较高,效价为1:20480;体外抑菌率为65%;能促进细胞吞噬L.anguillarum,相对吞噬率为75%;对克氏原螯虾的保护率为33.3%. 展开更多
关键词 鳗利斯顿氏菌 卵黄抗体 制备 抑菌活性 吞噬调理
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半滑舌鳎病原鳗利斯顿氏菌双重PCR检测方法的研究 被引量:2
14
作者 张晓君 阎斌伦 +2 位作者 梁利国 秦国民 毕可然 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期430-434,共5页
对引起江苏连云港工厂化养殖半滑舌鳎大量死亡的病原鳗利斯顿氏菌,进行了基于溶血素和金属蛋白酶两种基因的双重PCR检测。根据鳗利斯顿氏菌溶血素基因和金属蛋白酶基因序列设计2对特异性引物,在同一PCR反应体系中,鳗利斯顿氏菌可同时扩... 对引起江苏连云港工厂化养殖半滑舌鳎大量死亡的病原鳗利斯顿氏菌,进行了基于溶血素和金属蛋白酶两种基因的双重PCR检测。根据鳗利斯顿氏菌溶血素基因和金属蛋白酶基因序列设计2对特异性引物,在同一PCR反应体系中,鳗利斯顿氏菌可同时扩增出上述2种基因片段,扩增片段大小分别为493 bp和248 bp,两对引物对5种其他水产动物病原菌无交叉反应,敏感性检测结果为该双重PCR最低能检测8×102 CFU/mL的鳗利斯顿氏菌,最低能检测0.171 875 ng/μL的鳗利斯顿氏菌基因组DNA。对发病半滑舌鳎溃疡组织、肝脏及养殖用水进行双重PCR检测,呈阳性反应的样品可分离出优势生长的鳗利斯顿氏菌。该实验表明两种不同基因综合检测病原鳗利斯顿氏菌,进一步提高了其PCR检测的准确性和特异性,建立了一种病原鳗利斯顿氏菌快速、准确的双重PCR检测方法。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 鳗利斯顿氏菌 溶血素基因 金属蛋白酶基因 双重PCR
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短蛸(Octopus ocellatus)过氧化物还原酶(OoPrx-4)基因的克隆及其对鳗弧菌胁迫的转录调控分析 被引量:2
15
作者 徐洁 韦秀梅 +4 位作者 王卫军 杨建敏 刘相全 杨顶珑 陈建强 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期342-347,共6页
从本研究前期构建的短蛸(Octopus ocellatus)cDNA文库中克隆得到过氧化物还原酶(OoPrx-4)基因的cDNA全长,该基因cDNA全长934bp,包括5′非编码区(UTR)19bp,3′UTR177bp,开放阅读框(ORF)738bp,共编码245个氨基酸,理论等电点为6.65,预测分... 从本研究前期构建的短蛸(Octopus ocellatus)cDNA文库中克隆得到过氧化物还原酶(OoPrx-4)基因的cDNA全长,该基因cDNA全长934bp,包括5′非编码区(UTR)19bp,3′UTR177bp,开放阅读框(ORF)738bp,共编码245个氨基酸,理论等电点为6.65,预测分子量27.1kDa。采用实时荧光定量PCR法分析了OoPrx-4基因在短蛸各组织及鳗弧菌胁迫下的表达规律,结果表明,OoPrx-4在短蛸血细胞、肌肉、系统心脏、鳃、胃、肾囊、性腺、外套膜和肝胰腺等检测组织中都有表达,其中在肝胰腺的表达量最高。经鳗弧菌刺激后,Prx-4在血细胞中的表达量分别在6h和48h出现了两次明显上调。Prx-4作为抗氧化酶可能在减少机体因抵御鳗弧菌胁迫所产生的过氧化物方面发挥重要的作用。 展开更多
关键词 短蛸 过氧化物还原酶-4 实时荧光定量PCR 鳗弧菌
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香鱼巨噬细胞炎性蛋白-2基因的克隆、序列分析及表达 被引量:4
16
作者 王世会 史雨红 陈炯 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期143-149,共7页
巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)是一种重要的趋化因子,可趋化中性粒细胞到炎症部位,从而消除炎症反应。从香鱼巨噬细胞转录组测序中获得MIP-2基因,阅读框序列长为318个核苷酸,编码一个由105个氨基酸组成、相对分子质量为11.6kD的前体蛋白。N... 巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)是一种重要的趋化因子,可趋化中性粒细胞到炎症部位,从而消除炎症反应。从香鱼巨噬细胞转录组测序中获得MIP-2基因,阅读框序列长为318个核苷酸,编码一个由105个氨基酸组成、相对分子质量为11.6kD的前体蛋白。N端19个氨基酸为信号肽序列。氨基酸序列分析表明,香鱼MIP-2与白斑狗鱼MIP-2的氨基酸同源性最高,为54%。健康香鱼MIP-2基因mRNA主要在脾、肾、脑、鳃中表达,在肝、心、肌肉、肠中表达量次之。实时荧光定量PCR结果显示,鳗利斯顿氏菌侵染香鱼后,各组织中MIP-2基因mRNA表达量均呈上调趋势。尤其以肾组织和肌肉组织中变化最显著。以上结果表明,香鱼MIP-2基因表达与鳗利斯顿氏菌的侵染密切相关,揭示了MIP-2可能在香鱼抗菌免疫反应中具有重要的作用。 展开更多
关键词 巨噬细胞炎性蛋白-2香鱼 鳗利斯顿氏菌感染 基因表达
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养殖斜带髭鲷源鳗利斯顿氏菌分离鉴定、系统发育分析及药敏试验 被引量:2
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作者 郭睿 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2014年第3期252-259,共8页
斜带髭鲷(Hapalogenys nitens)作为我国东南沿海主要海水网箱养殖鱼类之一,常年受到以细菌性病害为主的侵袭,但相关病原检疫和诊断的研究较少。本文以福建罗源湾养殖濒死斜带髭鲷为研究对象,无菌解剖后对其肝、肾和脾脏进行细菌分离,对... 斜带髭鲷(Hapalogenys nitens)作为我国东南沿海主要海水网箱养殖鱼类之一,常年受到以细菌性病害为主的侵袭,但相关病原检疫和诊断的研究较少。本文以福建罗源湾养殖濒死斜带髭鲷为研究对象,无菌解剖后对其肝、肾和脾脏进行细菌分离,对纯培养菌使用常规方法和API进行形态和生理生化鉴定,使用16S rDNA、gyrB和rpoD基因进行分子生物学鉴定和系统发育树构建及分析,并对该菌进行药敏试验。菌株鉴定结果为鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum),但在系统发育树中与多株鳗弧菌(Vibrio anguillarum)聚为一支,药敏试验表明该菌对新生霉素、左氟沙星、罗红霉素、氟苯尼考等7种药物敏感,对磺胺甲基异恶唑、利福平、四环素、强力霉素、氨苄西林等8种药物耐药。 展开更多
关键词 斜带髭鲷 鳗利斯顿氏菌 鉴定 药敏试验
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香鱼白细胞介素17C基因克隆及鳗利斯顿氏菌侵染后的时空表达
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作者 李明云 苗亮 +3 位作者 郭晓飞 聂力 侯红红 陈炯 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期476-484,共9页
为了解香鱼白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)的序列特征、系统发育及其与鳗利斯顿氏菌侵染的相关性,实验采用RACE-PCR方法扩增出香鱼IL-17C基因c DNA序列,并通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测了鳗利斯顿氏菌侵染后香鱼各组织中I... 为了解香鱼白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)的序列特征、系统发育及其与鳗利斯顿氏菌侵染的相关性,实验采用RACE-PCR方法扩增出香鱼IL-17C基因c DNA序列,并通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测了鳗利斯顿氏菌侵染后香鱼各组织中IL-17C基因的表达变化。结果显示,香鱼IL-17C基因c DNA序列全长1 087 bp,含534 bp的开放阅读框,在3′端非编码区存在7个m RNA不稳定信号(ATTTA)。预测该基因编码177个氨基酸,N端19个氨基酸为信号肽序列,成熟蛋白中含有8个半胱氨酸残基。系统进化树分析显示不同物种的相同IL-17亚型聚为一支,香鱼IL-17C与其他脊椎动物IL-17C聚为一支;同源比对结果显示香鱼IL-17C与虹鳟的IL-17C1和IL-17C2亲缘关系最近,相似性分别为40.72%和33.51%。q RT-PCR检测显示IL-17C基因在健康香鱼的心、肝、脾、头肾、鳃、脑、肌肉和肠等组织中均有表达,鳃和头肾中表达量较高。经鳗利斯顿氏菌侵染后,香鱼肝脏中IL-17C基因表达变化最大,菌侵染8 h时的表达量为对照组的9.17倍;其次为脾,菌侵染4 h时的表达量为对照组的6.69倍。研究表明,香鱼IL-17C基因的表达与病原菌侵染密切相关,可能在免疫功能中具有重要作用。 展开更多
关键词 香鱼 白细胞介素17C基因 基因克隆 鳗利斯顿氏菌 时空表达
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环介导等温扩增技术与横向流动试纸条法快速检测鳗利斯顿氏菌的研究 被引量:8
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作者 董培培 李长红 +4 位作者 丁文超 陈炯 史雨红 黎昊雁 李明云 《水产科学》 CAS 北大核心 2011年第2期63-68,共6页
采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD),建立一种鳗利斯顿氏菌快速检测方法。针对鳗利斯顿氏菌金属蛋白酶基因设计一套特异性引物及异硫氰酸荧光素(Flu... 采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD),建立一种鳗利斯顿氏菌快速检测方法。针对鳗利斯顿氏菌金属蛋白酶基因设计一套特异性引物及异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,结合生物素标记的环介导等温扩增技术扩增反应和横向流动试纸条技术对鳗利斯顿氏菌进行检测;比较LAMP-AGE、LAMP-LFD和PCR-AGE的灵敏度;选取4株鳗利斯顿氏菌和6株非鳗利斯顿氏菌验证LAMP-LFD特异性。试验结果表明,应用LAMP-LFD,能在30 min内完成鳗利斯顿氏菌的检测;LAMP-LFD检测的灵敏度为7.7 cfu/ml,LAMP-AGE和PCR-AGE检测的灵敏度均为77 cfu/ml;4株鳗利斯顿氏菌均呈阳性反应,其他6株非鳗利斯顿氏菌均为阴性。应用LAMP-LFD检测鳗利斯顿氏菌特异性强、灵敏度高、并且操作安全、简便、快捷。 展开更多
关键词 鳗利斯顿氏菌 empA基因 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条技术 检测
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香鱼hepcidin基因的克隆、序列分析及组织表达特征 被引量:5
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作者 陈梅珍 陈炯 +1 位作者 陆新江 史雨红 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期595-600,共6页
Hepcidin是一类富含半胱氨酸的抗菌肽,在鱼类非特异性免疫中起重要作用,具有调节铁代谢的功能。该研究克隆了香鱼hepcidin基因cDNA序列,全长763个核苷酸,包含一个完整的开放阅读框,推测编码一个由85个氨基酸组成的相对分子质量为9.7k的... Hepcidin是一类富含半胱氨酸的抗菌肽,在鱼类非特异性免疫中起重要作用,具有调节铁代谢的功能。该研究克隆了香鱼hepcidin基因cDNA序列,全长763个核苷酸,包含一个完整的开放阅读框,推测编码一个由85个氨基酸组成的相对分子质量为9.7k的多肽,N端24个氨基酸是信号肽序列。香鱼hepcidin的成熟肽序列由25个氨基酸组成,含有8个半胱氨酸,可形成4个分子内二硫键结构。系统进化树分析表明,hepcidin的物种进化关系与目前接受的物种分类关系基本一致,香鱼hepcidin位于鱼类hepcidin簇中,与大西洋鲑hepcidin的亲缘关系最近,达60%。香鱼hepcidin在肝脏中表达量最大,在脾、肾、心脏和肌肉中也有表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果表明,鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)感染以后香鱼肝组织中hepcidin基因mRNA表达量显著增加,在12h增加了8.26倍。hepcidin基因可能在香鱼抗外界病原物感染过程中起重要作用。 展开更多
关键词 HEPCIDIN 香鱼 鳗利斯顿氏菌 QRT-PCR
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