塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-κB活性及蛋白表达的抑制

目的:探讨环氧合酶-2选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性和蛋白表达的影响.方法:不同浓度的塞来昔布作用于HepG2细胞后,应用凝胶电泳迁移率改变分析技术检测HepG2细胞中NF-κBDNA结合活性;用Western blotting法检测HepG2细胞NF-κBp65蛋白表达.结果:25、50μmol/L塞来昔布作用于HepG2细胞后,药物处理组HepG2细胞NF-κBDNA结合活性明显降低,与空白对照组相比有显著性差异(t=12.58,P=0.000;t=17.97,P=0.000);塞来昔布可明显抑制HepG2细胞NF-κBp65蛋白表达水平,与空白对照组相比,差异均有统计学意义(t=4.24,P=0.013;t=6.38,P=0.003).结论:塞来昔布能有效抑制HepG2细胞NF-κB活性及NF-κBp65蛋白表达.

番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株HepG2的作用

目的研究番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用。方法设AS-4不同浓度组(6.25、12.5、25、50μg/mL)、顺铂阳性对照组(25μg/mL)和空白对照组,常规培养24、48h,进行MTT比色试验和倒置相差显微镜观察。结果AS-4可明显抑制HepG2细胞的生长,最高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系,48hIC50为6.67μg/mL。结论番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性。

医用臭氧对肝癌细胞HepG2生物学行为的实验研究

目的探讨使用医用臭氧(O3)在体外对肝癌HepG2细胞的作用。方法获取人肝癌HepG2细胞在体外增殖、传代、对数生长期的细胞,将细胞分为对照组和实验组,实验组采用含浓度为0.5μg/ml的医用臭氧水的培养液处理细胞,对比两组试验的细胞形态学变化,细胞生长曲线、细胞凋亡情况、细胞迁移能力变化。结果体外实验结果显示,含臭氧的培养基中细胞数量明显减少,肿瘤细胞膜破裂,核固缩甚至裂解,臭氧对细胞的生长有抑制作用,同时CCK-8的检测结果显示O3能抑制肝癌细胞的增殖(P<0.01),Transwell迁移实验显示O3能抑制肿瘤细胞的迁移(P<0.01)。结论臭氧能直接杀死肝癌HepG2细胞,能在体外抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移。

开口箭乙醇提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡活性研究

目的探讨开口箭根部乙醇提取物(ERT-95)对肝癌细胞HepG2生长的影响及其抗肿瘤作用的可能机制。方法采用MTT法绘制HepG2细胞生长曲线,检测ERT-95对HepG2细胞的生长抑制作用;采用光学显微镜观察HepG2细胞的凋亡形态变化;采用Hochest染色原理检测HepG2细胞凋亡情况;采用Western blot检测Cyt C蛋白的表达;采用caspase活性检测试剂盒检测caspase-3、caspase-9的活性变化;采用DNA ladder凝胶电泳技术检测DNA的裂解情况。结果 MTT结果显示,ERT-95对HepG2细胞的抑制作用呈剂量依赖性(IC50为52.57μg·mL-1);光学显微镜下,处理组细胞出现皱缩、变圆等形态变化;Hochest-33258染色后的处理组细胞呈现典型的凋亡结构;Western blot结果显示,随着药物浓度增加,Cyt C蛋白表达上调;caspase活性检测显示,caspase-3、caspase-9活性逐步升高;与对照组相比,处理组琼脂糖凝胶电泳图谱出现DNA条带。结论ERT-95有显著的体外促肿瘤细胞凋亡作用,初步研究其促肿瘤细胞凋亡机制是通过线粒体释放Cyt C,进一步活化caspase-9和caspase-3而激活内源性核酸内切酶,导致DNA裂解而实现的。

杨梅素抗肝肿瘤细胞HepG2作用及其机制的研究

目的探讨杨梅素对肝癌细胞HepG2的生长抑制和诱导凋亡作用及其作用机制。方法应用甲基噻唑蓝(MTT)比色法,测定杨梅素对HepG2细胞株活性的影响,检测其抑制HepG2细胞株的时间效应和剂量效应;应用形态学观察、HE染色和Annexin V-PI流式检测,测定杨梅素对HepG2细胞的凋亡作用,并进行细胞周期的分析,最后对杨梅素对细胞凋亡相关的蛋白p34cdc-2、Cyclin B1、Bcl-2和PARP的影响进行了研究。结果杨梅素对HepG2细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用,且呈时间依赖和剂量依赖性,表现为:细胞G2/M期阻滞,出现明显的凋亡峰;Bliss法测定杨梅素对HepG2细胞的IC50值为(32.18±2.31)μmol/L,30、50μmol/L杨梅素对G2/M期细胞比率分别为(41.32±0.90)%和(80.07±0.90)%,差异有统计学意义(P<0.05);p34cdc-2蛋白的表达量未见变化,而CyclinB1蛋白的表达量明显上升,Bcl-2蛋白的表达量锐减,并诱导半胱氨酸蛋白酶Caspase-3的底物PARP蛋白(113 kD)水解为89 kD的特异性水解产物。结论杨梅素通过激活Caspase家族蛋白实现对肝癌细胞HepG2细胞株的增殖抑制及诱导凋亡作用。

DC-CIK细胞对人肝癌HEPG2细胞周期、凋亡的影响

目的探讨细胞因子从肝癌患者外周血贴壁单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)诱导的树突状细胞(dendritic cells,DCs)与杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)对人肝癌HEPG2细胞系周期、凋亡的影响。方法用肝癌患者肝癌组织裂解物(肿瘤抗原)致敏经GM-CSF、TNF-α及IL-4等诱导该患者PBMC产生的DCs。用IFN-γ、IL-2和人CD3单克隆抗体(human CD3 monoclonal antibody,hCD3mAb)等诱导该PBMC的悬浮细胞产生CIK细胞。用Transwell培养小室将DC-CIK细胞与HEPG2细胞在同一培养体系内经该小室膜分隔培养24、48 h。流式细胞仪检测该HEPG2细胞的周期;Annexin V-PI双染法检测其凋亡。RT-PCR、Western blot分别检测凋亡相关基因Bax及其编码蛋白的表达。结果 DC-CIK细胞可明显影响人HEPG2细胞生长周期,两者共培养,可将HEPG2细胞系阻滞于G1期。DC-CIK细胞能显著诱导HEPG2细胞的凋亡,与对照相比,其凋亡诱导率差异显著(P<0.01)。基因与蛋白水平检测表明,DC-CIK细胞可致HEPG2细胞系的凋亡相关基因Bax表达明显上调。结论肝癌患者DC-CIK细胞可明显抑制肝癌HEPG2细胞系的生长,显著诱导该细胞凋亡,且该凋亡诱导具"时间-依赖"与"细胞数量-依赖"特性。

甲壳胺诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:通过体外实验探讨甲壳胺是否对人肝癌细胞HepG2具有生长抑制及诱导凋亡作用。方法:在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的甲壳胺,培养48 h,于倒置相差显微镜下观察甲壳胺处理组及对照组细胞形态学变化;用流式细胞术(FCM)检测HepG2细胞的凋亡率,Western印迹检测甲壳胺处理组及对照组Bcl-2和p53蛋白的表达变化。结果:HepG2细胞对照组的凋亡率为1.66%,经过0.5和2.0 mg/mL甲壳胺处理后的凋亡率分别增加4.4和8.7倍;Western印迹结果显示甲壳胺处理后,p53蛋白表达水平显著增强,Bcl-2蛋白表达水平下降。结论:甲壳胺对体外培养的HepG2细胞生长有抑制作用和诱导凋亡作用。

索拉菲尼对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究

目的:探讨分子靶向药物索拉菲尼(Sorafenib)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用。方法:采用MTT法检测Sorafenib对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果:Sorafenib能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应;6μmol/L的Sorafenib处理HepG2细胞72小时,HepG2细胞周期中的S期比例明显升高,G0-G1期、G2-M期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:Sorafenib对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制其增殖和促进其凋亡。

miR-383靶向PRDX3对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨微小RNA-383(miR-383)靶向调控人过氧化物还原酶-3(PRDX3)的表达对肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法体外培养肝癌HepG2细胞,应用实时定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测HepG2细胞中miR-383表达水平;将HepG2细胞分为空白(NG)组、miR-383阴性对照(NC)组、miR-383过表达(miR-383 mimics)组,转染48 h后,MTT法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;应用TargetScan数据库预测miR-383的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证,应用蛋白免疫印记(Western blotting)法检测对PRDX3、Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。结果与NG组、NC组比较,miR-383 mimics组HepG2细胞中miR-383表达水平显著升高(P<0.05);HepG2细胞增殖抑制率明显升高,侵袭、迁移细胞数明显减少(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示PRDX3是miR-383潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。Western blotting结果显示,miR-383过表达后,PRDX3、Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均显著下调。结论miR-383可能通过下调PRDX3表达抑制人肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭。

芬维A胺对人肝癌细胞株HepG2增殖与细胞凋亡的影响

目的探讨分子靶向药物芬维A胺（Fenretinide）在体外对人肝癌细胞株Hep G2的细胞增殖与细胞周期的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在培养液中加入不同浓度的芬维A胺（2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L）,对照组培养液中不加芬维A胺,分别孵育48 h后,采用MTT法检测芬维A胺对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果芬维A胺能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;芬维A胺处理HepG2细胞72 h,可使G0～G1期细胞比例升高,G2～M、S期比例明显下降,凋亡率明显上升（P〈0.05）。结论芬维A胺对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制增殖和促进凋亡。

单叶蔓荆果实中多甲氧基黄酮类成分的分离、鉴定及细胞毒活性分析

单叶蔓荆（Vitex rotundifolia Linn.f.）为马鞭草科（Verbenaceae）牡荆属（Vitex Linn.）多年生落叶灌木,其干燥成熟果实供药用,具有疏散风热的功效[1]。单叶蔓荆生于沙滩、海边及湖畔,主要产于中国安徽、福建、广东、河北、江苏、江西、辽宁、山东、台湾和浙江等地,日本、东南亚地区和太平洋群岛也有分布[2]。

真菌基因分型方法研究进展

近年来真菌感染的发病率明显上升,对真菌快速准确地分型在研究真菌的致病性、药物敏感性和预防监测流行病学调查中具有重要意义。分子生物学分型技术因简便、分辨率高和重复性强被广泛应用。该文就目前用于真菌基因分型的分子生物学方法作一综述。

稳定表达NLRC5基因肝癌细胞株的建立

目的建立起能够稳定表达NLRC5基因的肝癌Hep G2细胞株。方法设计遗传霉素(G418)的浓度梯度,通过对Hep G2细胞筛选最终确定筛选药物浓度。将构建好的人源p EGFP-C2-NLRC5重组质粒利用脂质体介导法转染至Hep G2肝癌细胞株中,用G418筛选出耐药阳性克隆。通过免疫荧光技术观察绿色荧光蛋白稳定表达情况,Western blot法验证NLRC5蛋白表达情况。结果 G418在14 d内使Hep G2细胞全部死亡的最小浓度是300 ng/ml。用G418筛选瞬转p EGFP-C2-NLRC5 14 d在荧光显微镜下可见耐药克隆的形成。Western blot法检测显示,稳定过表达组NLRC5的蛋白水平比空质粒转染组高(t=15.356,P<0.05)。结论成功构建稳定表达NLRC5基因的肝癌细胞株,为进一步研究NLRC5基因在肝癌的体内实验奠定了基础。