银杏外种皮多糖抑制小鼠肝癌及诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的：研究银杏外种皮多糖（Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ ｅｎｏｃａｒｐ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＧＢＥＰ）对小鼠肝癌的抑制作用及作用机制。方法：建立小鼠肝癌（Ｈｅｐｓ）实体瘤及腹水癌模型，观察抑瘤率和小鼠的生命延长率，并用流式细胞术（ＦＣＭ）检测小鼠肝病实体瘤的细胞周期及癌细胞凋亡率。结果：ＧＢＥＰ在５０，１００和 ２００ｍｇ·ｋｇ～（－１）剂量下，对小鼠肝癌的抑瘤率皆大于３０％，能延长荷腹水型肝癌小鼠的生存期；随ＧＢＥＰ剂量增大，Ｇ０－Ｇ１期和Ｓ期细胞（％）不断减少，而Ｇ２—Ｍ期细胞及凋亡细胞（％）则不断增加。结论：ＧＢＥＰ可抑制小鼠肝癌（Ｈｅｐｓ）．其作用机制可能与阻止Ｇ２—Ｍ期细胞转换而影响癌细胞在细胞周期中的进程和干扰Ｓ期细胞ＤＮＡ合成以及诱导小鼠肝癌细胞凋亡有关。

东北菱提取物对肝癌细胞的体内外抑制作用

目的 :探索东北菱提取物对肝癌细胞体内外抑制作用。方法 :采用 3H- Td R掺入法分别测定东北菱醇提取物和水提取物对肝癌细胞的体外敏感性 ;对荷瘤小鼠进行体内实验 ,观察该提取物对肝癌细胞生长的抑制率。结果 :体外实验当剂量达 2 2 5 .0 0 g· L- 1 时 ,抑制率为 75 .4 9% ;体内实验抑瘤率为 6 0 %以上。结论 :东北菱不同溶剂提取物均具有抑制肝癌细胞的作用。

健脾补肾方加味调节调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞平衡的抗肝纤维化作用机制

目的观察健脾补肾方加味对大鼠肝纤维化的治疗效果及对调节性T淋巴细胞(Treg)和辅助性T淋巴细胞(Th)17的影响。方法 32只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、健脾补肾方组和健脾补肾方加味组,四氯化碳溶液皮下注射造模。用药组在第4周开始分别给予健脾补肾方和健脾补肾方加味,第8周末处死。测定大鼠血清肝功能,观察肝组织炎症及纤维化情况、Foxp3和白细胞介素(IL)17蛋白与基因表达及血清IL-4和IL-17表达情况。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,等级资料比较采用Ridit检验。结果与正常组相比,模型组大鼠血清总胆汁酸(TBA)、ALP、TBil、ALT和AST均明显升高(P值均<0.05),肝脏胶原沉积明显、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)表达增多(P值均<0.05)。与模型组相比,健脾补肾组血清ALP、TBA、TBil和ALT均明显降低(P值均<0.05);健脾补肾方加味组血清ALP、TBA、TBil、ALT和AST均明显降低(P值均<0.05);各用药组肝脏胶原沉积和αSMA表达明显减少(P值均<0.05)。与健脾补肾方组相比,健脾补肾方加味组TBA、ALT和AST均明显降低(P值均<0.05)。与正常组相比,模型组肝组织IL-17蛋白及基因表达显著增高且IL-17和Foxp3基因表达比值显著增高(P值均<0.05),血清IL-17水平明显增高且IL-4和IL-17水平比值明显降低(P值均<0.05)。与模型组相比,用药组肝组织IL-17蛋白及基因表达明显降低且IL-17和Foxp3基因表达比值明显降低(P值均<0.05),血清IL-17水平明显降低且IL-4和IL-17水平比值明显增高(P值均<0.05)。结论健脾补肾方加味可以提高抗肝纤维化的治疗效果,其作用机制可能与调节Treg/Th17失衡有关。

Influence of BOL on hyaluronic acid,laminin and hyperplasia in hepatofibrotic rats

AIM: To study the anti-hepatofibrosis mechanism of Bie Jie Jian oral liquid (BOL).METHODS: The model was induced by subcutaneous injection of CCl4. BOL was administered and the change of serum hyaluronic acid (HA) and laminin (LN) was observed and the degeneration of liver cells and the degree of fibre hyperplasia analyzed. Changes of ultra micro-structure in liver cells were observed in some samples.RESULTS: HA was reduced in both the groups with Iow and high dosage of BOL, which showed a remarkable difference as compared with that of the model group ( Iow dosage group: 376.15 μg/L ± 35.48 μg/L vs 806.07 μg/L ± 98.49 μg/L, P < 0.05; high dosage group: 340.14 μg/L ± 30.18 μg/L vs 806.07μg/L± 98.49 μg/L, P<0.05). The LN content of Iow and high dosage group of BOL was lower than that of model group (Iow dosage group: 71.99 μg/L± 8.15 μg/L vs 133.94μg/L± 14.45 μg/L, P< 0.01; high dosage group: 71.68 ig/L± 11.62 μg/L vs 133.94 μg/L ± 14.45 μg/L, P<0.01) and colchicine group (Iow dosage group: 71.99 μg/L ± 8.15 μg/Lvs 118.28 μg/L ± 16.13 μg/L, P< 0.05; high dosage group:71.68 μg/L ± 11.62 μg/L vs 118.28 μg/L ± 16.13 μg/L,P<0.05). Examined by Ridit, BOL could reduce the degeneration and necrosis of liver cells (X2 = 11.99P<0.05), the degree of fibre hyperplasia (X2 = 13.24P<0.05) and the pathological change of ultra micro-structure as well.CONCLUSION: The BOL has certain therapeutic effect on the experiment hepatofibrosis. Its mechanisms might include:protecting the function of liver cells, inhibiting excessive synthesis and secretion of extraceiluar matrix from hepatic stellate cells, relieving the cepillarization of hepatic sinueoid, improving liver micro-circulation, and regulating immune function.

半枝莲多糖对肝癌细胞SMMC7721生长抑制及机制的研究

【目的】研究半枝莲多糖(Scutellaria barbata polysaccharides,SBP)对肝癌细胞SMMC7721生长的抑制及相关机制。【方法】将不同浓度SBP作用于SMMC7721肝癌细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测半枝莲多糖对肝癌细胞SMMC7721生长增殖的抑制作用;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2)与转录因子E2F1 mRNA表达;蛋白印迹法(Western blot)检测CDK2与E2F1蛋白表达。【结果】SBP对肝癌细胞SMMC7721具有明显的生长抑制作用,其中10、2.5μg/mL SBP组作用显著,均可使CDK2与E2F1 mRNA和蛋白表达下调。【结论】SBP对肝癌细胞SMMC7721具有增殖抑制作用,其机制可能与CDK2和E2F1表达下降有关。

叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞白细胞介素-6信号通路与微小RNA let-7a网络的调控作用

【目的】研究叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞白细胞介素-6(IL-6)信号通路与微小RNA let-7a网络失衡的调节作用。【方法】以不同浓度的叶下珠复方Ⅱ号体外作用于人肝癌Huh7细胞株,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对人肝癌Huh7细胞增殖的影响。设空白对照组、叶下珠复方II号高剂量组(48.0 g/L)和低剂量组(24.0 g/L),采用放射免疫法检测药物作用后肝癌Huh7细胞分泌IL-6的变化;采用茎环结构的逆转录实时荧光定量PCR方法检测肝癌Huh7细胞MicroRNA let-7a和miR-21的表达变化,采用实时荧光定量PCR方法检测药物作用后IL-6、核因子-κB亚基P65(NF-κB/P65)、转录活化因子(STAT3)、蛋白激酶2(AKT2)、PTEN、K-ras、c-myc、Bcl-2基因的mRNA表达变化,采用Westernblot法检测PTEN、STAT3、AKT2蛋白表达的变化。【结果】肝癌Huh7细胞经叶下珠复方Ⅱ号处理48 h,高、低剂量组Huh7细胞增殖率和上清液IL-6含量均显著下降,与空白对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量处理后microRNA let-7a表达量显著上升、miR-21的表达显著下降,与空白对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.01);叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组与空白对照组比较,NF-κB/P65、STAT3、AKT2、K-ras、c-myc、Bcl-2基因mRNA的表达量均显著下降(P<0.01),而PTEN mRNA的表达显著增加(P<0.01),并呈明显的量效关系。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组处理后PTEN的蛋白表达显著增加,STAT3、AKT2的蛋白表达显著减少,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。【结论】叶下珠复方Ⅱ号对人肝癌Huh7细胞增殖有明显的抑制作用,作用机制与抑制IL-6表达和IL-6/STAT3信号通路活化,调节IL-6信号通路与MicroRNA let-7a网络的失衡作用有关。

破血逐瘀中药虻虫对荷H22肝癌小鼠内皮生长因子及MMP-9蛋白表达的影响

【目的】观察破血逐瘀中药虻虫对荷H22小鼠肝癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响。【方法】选用雄性昆明种(KM)小鼠50只随机分为模型组,化疗组,虻虫高、中、低剂量组。腋下注射H22细胞建立荷H22肝癌小鼠模型。虻虫治疗组以0.045、0.09、0.18 g·kg-1·d-1剂量灌胃给药,化疗组以5-氟尿嘧啶(5-FU)25 mg·kg-1·d-1剂量腹腔注射给药,隔日1次;模型组予以等容积生理盐水灌胃给药,2周后处死小鼠,称体质量及瘤体质量,采用苏木精—伊红(HE)染色观察肝癌组织形态变化,免疫组织化学法检测VEGF及MMP-9蛋白的表达。【结果】高、中剂量虻虫组均可使肝癌组织呈大片坏死;虻虫高、中剂量组及化疗组瘤体质量、瘤指数显著减小,虻虫高剂量组VEGF及MMP-9蛋白表达显著减小,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。【结论】破血逐瘀中药虻虫能显著抑制荷H22小鼠肝癌细胞增殖,其机理可能与减少VEGF、MMP-9蛋白表达有关。

高破壁富硒灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2的抑制作用

【目的】观察高破壁富硒灵芝孢子粉对人肝癌细胞的生长抑制作用。【方法】选用体外培养的HepG2细胞用于检测高破壁富硒灵芝孢子粉的抑癌活性,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察高破壁富硒灵芝孢子粉对HepG2细胞生长的抑制作用,Hoechst 33258荧光染色法观察高破壁富硒灵芝孢子粉诱导细胞凋亡。【结果】高破壁灵芝孢子粉能够抑制HepG2细胞的生长,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),这种抑制作用具有浓度剂量效应,且同浓度下较灵芝孢子粉抑制作用更明显。【结论】高破壁富硒灵芝孢子粉具有一定抑制肿瘤细胞生长的作用。

华蟾素治疗中晚期原发性肝癌HBV-DNA高表达患者的近期疗效

【目的】观察华蟾素治疗中晚期原发性肝癌过程中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量变化与治疗效果的相关性,并对患者治疗前后的生存质量加以评价。【方法】将120例肝癌患者随机分为治疗组和对照组,每组60例。对照组在一般护肝治疗、对症治疗基础上辨证使用中药汤剂,治疗组在对照组基础上加用华蟾素注射液,连用14 d为1个疗程,后间歇7 d,开始下一个疗程,共使用2个疗程。观察2组实体瘤近期客观疗效、治疗前后肝功能分级、卡氏评分(Karnofsky评分)分级疗效、HBV-DNA下降疗效、远期疗效和不良反应情况。【结果】华蟾素在稳定瘤体、改善肝功能、改善生存质量、控制HBV-DNA方面较对照组有显著优势,差异有统计学意义(P<0.05);但在缩小瘤体方面差异无统计学意义(P>0.05)。在改善机体功能状态方面,应用华蟾素也有显著优势(P<0.05)。远期疗效方面:治疗组中位生存期为(178±20.689)d,3个月、半年、1年生存率分别为81%、64%、10%;对照组中位生存期为(168±16.324)d,3个月、半年、1年生存率分别为82%、63%、5%;2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。不良反应方面:治疗组和对照组均未见明显肝肾功能损伤、消化道反应、骨髓抑制,也未见静脉炎等情况出现。【结论】华蟾素治疗HBV-DNA高表达中晚期肝癌患者,能提高生存质量、改善机体功能和延长生存期,充分体现了中医治疗肿瘤"带瘤生存"的特点。