尿道癌相关基因1通过微小RNA-513a-3p/细胞色素P_(450)1B1生物学轴促进人胃癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)在人胃癌细胞中的表达,并探讨UCA1通过微小RNA-513a-3p(miR-513a-3p)/细胞色素P_(450)1B1(CYP1B1)生物学轴对胃癌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法分别向人胃癌细胞中转入UCA1小干扰RNA(siRNA)、miR-513a-3p模拟物和miR-513a-3p抑制剂以抑制UCA1、上调miR-513a-3p和抑制miR-513a-3p表达。通过定量PCR检测不同细胞UCA1、miR-513a-3p和CYP1B1 mRNA的表达,CCK8试剂盒检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移。结果与GES-1细胞相比,UCA1在人胃癌细胞HGC-27、SNU-5、AGS、SGC-7901中表达均升高(t=11.106,P<0.001;t=10.872,P<0.001;t=12.134,P<0.001;t=16.178,P<0.001),细胞增殖活性(t=7.252,P<0.001;t=8.964,P<0.001;t=8.666,P=0.003;t=8.697,P<0.001)和细胞迁移能力(t=4.040,P=0.010;t=7.079,P<0.001;t=6.833,P=0.003;t=7.527,P<0.001)均升高。双荧素酶基因报告实验显示miR-513a-3p与UCA1和CYP1B1靶向结合。与NC siRNA组相比,UCA1 siRNA显著下调UCA1和上调miR-513a-3p在SGC-7901细胞中的表达(t=7.895,P<0.001;t=12.911,P<0.001);miR-513a-3p表达上调显著抑制SGC-7901细胞中UCA1和CYP1B1 mRNA表达(t=7.224,P<0.001;t=5.645,P=0.002),而抑制miR-513a-3p则显著上调SGC-7901细胞中UCA1和CYP1B1 mRNA表达(t=9.628,P<0.001;t=11.665,P<0.001)。与单独UCA1敲低的SGC-7901细胞相比,UCA1和miR-513a-3p共同敲低的SGC-7901细胞CYP1B1 mRNA表达、细胞增殖活性和细胞迁移能力均升高(t=3.695,P=0.014;t=4.198,P=0.009;t=3.602,P=0.016)。结论UCA1通过miR-513a-3p/CYP1B1生物学轴促进人胃癌细胞的增殖和迁移。

猪肝细胞微粒P_(450)体外代谢隐丹参酮的研究

用钙离子沉淀法制备猪肝细胞微粒体Ｐ４５０ 进行了体外代谢隐丹参酮的研究。用Ｌｏｗｒｙ 法测定肝微粒体蛋白含量平均为２ ．４６０ ±０ ．６９９ ｍｇ／ ｍ Ｌ；Ｏｍ ｕｒａ 法测定猪肝微粒体Ｐ４５０ 含量平均为０ ．１７６ ±０ ．０５３ ｎ ｍｏｌ／ ｍ ｇ 。从Ｐ４５０加还原型辅酶Ⅱ的体外代谢系统中分离纯化了２ 个主要代谢产物，经光谱分析鉴定为丹参酮ⅡＡ 与１羟基丹参酮ⅡＡ，并比较了隐丹参酮在猪体内外的代谢差异。

对氨基苯甲酸酯同系物形成细胞色素P_（450）代谢中间体络合物的定量结构与活性关系

细胞色素Ｐ４５０（Ｐ４５０，Ｅｃ１．１４．１４．１）是一种十分重要的催化氧化反应的酶。本文测定了１２个对氨基苯甲酸酯同系物与Ｐ４５０相互作用而形成Ｐ４５０代谢中间体络合物的活性，用半经验分子轨道法ＭＮＤＯ－ＰＭ３计算得到了这些同系物的分子轨道指数，并用逐步多元回归分析法导出了活性与分子轨道指数及正辛醇／水分配系数的对数值（ＬｏｇＰ）之间的定量结构与活性关系（ＱＳＡＲ）。结果表明：对氨基苯甲酸脂同系物形成Ｐ４５０代谢中间体络合物的活性与原子净电荷的绝对值之和（∑Ｑ）和ＬｏｇＰ均具有很好的抛物线型相务性，同时，ＬｏｇＰ与∑Ｑ之间也存在相当好的相关性。

PCR和探针自我杂交──Northern Blot方法对二甲基苯蒽诱导的P_（450）Cyp^（1b－1）mRNA的定量

通过ＰＣＲ和探针自我杂交──ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法对０．３μＭ二甲基苯蒽（ＤＭＢＡ）诱导的２×１０６个小鼠胚胎成纤维细胞１０Ｔ１／２产生的Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ进行了定量。在这个方法中，与Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ相同的特定的单链ＣＤＮＡ探针片断通过ＰＣＲ合成。而双链探针中的一条链与单链探针和Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ的特定片断是相同的。双链探针上的另一条链（Ｈ链）则与单链探针和Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ的特定片断是互补的。用３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记Ｈ链后，它就能够与单链探针和Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ同时进行杂交。这样，就能用已知浓度的单链探针作为标准物制做标准工作曲线和对Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ的含量进行定量。经测定，在０．３μＭＤＭＢＡ分别于１、２、３、４、６小时对２×１０６个细胞进行诱导后，２×１０６个细胞在不同时间产生的Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ分别为０．００９８、０．０１３５、０．０１７４、０．０１９０和０．０１２０μＭ。

环孢素与小檗碱合用抑制肝CYP3A1、CYP2E1、mdr1基因表达的实验研究

目的:观察环孢素(cyclosporin,CsA)单用及与小檗碱(berberine chloride,Ber)合用对小鼠和大鼠肝CYP3Al、CYP2El基因及多药耐药基因mdrla和mdrlb表达的影响。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定小鼠和大鼠肝CYP3Al、CYP2El、mdrla和mdrlb基因在给药后的变化。结果:小鼠灌胃给药6 d时,Ber与CsA合用对CYP3Al和CYP2El基因均有明显抑制作用;大鼠灌胃给药12 d时,与对照组比较,除了Ber 100 mg·kg^(-1)组外,其余各组对大鼠肝CYP3Al、CYP2El、mdrla、mdrlb基因均有明显的抑制作用。结论:Ber与CsA合用可明显抑制小鼠和大鼠肝CYP3Al及mdrla、mdrlb基因的表达,从而减少CsA在肝的代谢及消除,这可能是Ber增加CsA血药浓度的重要机制。

甘草酸的临床应用和对细胞色素P_(450)影响的研究进展

甘草酸作为甘草的主要活性成分,具有抗炎、抗病毒、镇咳祛痰、免疫调节等药理作用,近年来又陆续发现很多临床新用途,并且会对人和动物的细胞色素P_(450)产生影响。笔者对甘草酸的临床应用及其对细胞色素P_(450)的影响进行了整理分析,以期为临床合理使用甘草酸制剂提供参考。

聚合酶链反应技术分析家蝇抗性基因的研究

目的：家蝇对拟除虫菊酯抗药性与细胞色素Ｐ４５０的ＣＹＰ６Ｄ１基因有关，采用分子生物学的特异性基因聚合酶链反应技术分析家蝇抗药性的发生、发展规律，探讨早期预测及防治策略。方法：提取雄性家蝇腹部ＤＮＡ作为反应模板，根据ＣＹＰ６Ｄ１基因序列设计特异性基因引物，进行３０个循环扩增，电泳分析扩增产物与生物测试结果比较。结果：Ｄ－Ｒ品系扩增阳性率１００％，敏感品系扩增阳性率为０，深圳、汕头、韶关、广州、茂名品系扩增阳性率分别为５９％、５６．３％、５４％、５５％及２５％。扩增阳性率与家蝇对拟除虫菊酯抗性倍数呈正相关（ｒ＝０．８３４４，Ｐ＜０．０５）。结论：聚合酶链反应技术应用于家蝇抗性发生、发展规律分析，早期诊断及抗药性发生机理研究有重要意义。

净地灵对大鼠肝微粒体酶及全血胆碱酯酶活性影响的研究

研究了有机磷农药净地灵对大鼠肝微粒体细胞色素Ｐ４５０、细胞色素ｂ５、苯胺羟化酶及全血胆碱酯酶活性的影响。结果表明：以净地灵１ｍｇ／ｋｇ灌胃，每天１次，连续１周后，对大鼠肝微粒体细胞色素Ｐ４５０有明显抑制作用，对细胞色素ｂ５和苯胺羟化酶无显著影响。大鼠按净地灵１ｍｇ／ｋｇ经口１次授药后，对全血胆碱酯酶活性影响的时相效应表明，其最大抑制作用是在授药后２ｈ，授药后２４ｈ胆碱酯酶活性基本恢复至正常水平。根据在亚慢性实验中期（４５ｄ）和结束时（９０ｄ）分别测定各组动物全血胆碱酯酶活性的结果，表明该农药对大鼠的最大无作用剂量为０．０５ｍｇ／ｋｇ。

不同时辰鼠肝微粒体药物代谢酶的变化

本实验选择鼠类肝脏微粒体药物代谢酶活性变化指标,在不同时辰进行测定。结果表明:微粒体细胞色素 P450总量、NADPH-细胞色素 C 还原酶和二甲基亚硝胺脱甲基酶在雄性大鼠和两性小鼠均呈现明显昼夜节律性变化。其峰值在晚间亥时至子时,谷值在清晨寅时至卯时,日间波动在一定范围内,黄昏酉时明显上升,而后达到最高值。

苯巴比妥对氯硝西泮药代动力学的影响及机理研究

采用遗传性听源性癫痫模型（Ｐ７７－ＰＭＣ）大鼠，从药代动力学角度研究了苯巴比妥（ＰＢ）对氯硝西洋（ＣＺＰ）的影响，并对其机理进行了探讨。结果表明：ＰＢ使ＣＺＰ各时间点的血药浓度都显著降低（Ｐ＜０．０１），使ＣＺＰ的药代动力学参数发生相应的变化：半衰期（Ｔ１／２）、曲线下面积（ＡＵＣ）、峰浓度（Ｃｍａｘ）显著降低；清除率（ＣＬ）、表观分布容积（Ｖ／Ｆ）、清除速率常数（Ｋｅ）增高。另外ＰＢ对ＣＺＰ的代谢有显著的促进作用是由于ＰＢ引起肝滑面内质网增多，使Ｐ４５０酶显著增加所致。提示临床上ＰＢ与ＣＺＰ合用时应结合临床。

辅酶Q_（10）对超量醋氨酚所致急性肝损伤的保护作用观察及机理探讨

本文报道辅Ｑ１０（ＣｏＱ１０）对超量ＡＡＰ引起小鼠急性肝损伤的保护作用。结果表明，预先给小鼠皮下注射ＣｏＱ１０，能对抗用量醋氨酚（ＡＡＰ）所致的肝糖原含量下降和肝损伤引起的ＳＡＬＴ活性升高及病理组织学变化；同时也发现ＣｏＱ１０。能使血清ＡＡＰ浓度和肝匀浆谷膦甘肽（ＧＳＨ）含量高于对照组。这说明ＣｏＱ１０对超量ＡＡＰ所致的急性肝损伤确有保护作用。从后三项实验结果来看，ＣｏＱ１０有间接稳定肝细胞膜的作用，使ＡＡＰ毒性中间代谢产物生成减少。

丹参酮Ⅱ_A磺酸钠治疗先天性人巨细胞病毒性肝炎小鼠的实验研究

目的建立小鼠先天性人巨细胞病毒肝炎动物模型,研究丹参酮Ⅱ_A磺酸钠的治疗机制,为治疗人类感染先天性巨细胞病毒肝炎的合理用药提供理论依据。方法 Balb/c小鼠80只(雌雄各半),配对后随机分对照组、病毒感染组、丹参酮大剂量组、丹参酮小剂量组,丹参酮大、小剂量组经腹腔注射丹参酮Ⅱ_A磺酸钠1、0.5 mg/(10 g·d),对照组、病毒感染组注射等体积细胞维持液DMEM,四组均治疗21d。放射免疫法检测治疗前后小鼠血清肝纤维化血清学指标:层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(cⅣ)、透明质酸(HA)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1),小鼠肝功能:总胆红素(STB)、胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酰转移酶(GGT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),肝微粒体细胞色素P450亚型酶:CYP2E1、CYP1A2、CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9活性。结果经丹参酮Ⅱ_A磺酸钠治疗21 d后,丹参酮大小剂量组LN、PC-Ⅲ、cⅣ、HA、TGF-β_1、STB、TBA、ALT、GGT、AST及CYP2E1、CYP3A4酶活性均有不同程度降低,与病毒感染组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),丹参酮大、小剂量组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对小鼠接种人巨细胞病毒性肝炎有明确的治疗作用,机制与其活血化瘀、降低TGF-β_1、抑制小鼠肝微粒体细胞色素_(450)亚型酶酶活性,促进肝功能恢复有关。

滇南地区心脑血管疾病患者细胞色素P_(450)2C19基因分析及临床意义

目的分析滇南地区心脑血管疾病患者细胞色素P_(450)2C19(CYP2C19)基因分布及临床意义。方法回顾性分析滇南中心医院2019年5月至2020年6月诊治的心脑血管疾病患者245例的资料,分析CYP2C19基因分布情况,分析其与民族、年龄、性别、血脂、高血压、糖尿病的关系,并与其他地区进行比较。结果245例患者CYP2C19基因的7种表型^(*)1/^(*)17、^(*)1/^(*)1、^(*)1/^(*)2、^(*)1/^(*)3、^(*)2/^(*)2、^(*)2/^(*)3、^(*)3/^(*)3所占比例分别为2.86%、38.37%、39.18%、5.31%、9.39%、4.08%、0.82%,超快代谢者占2.86%,快代谢者占38.37%,中间代谢者占44.49%,慢代谢者占14.29%。CYP2C19基因的多态性位点突变频率观察值符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P>0.05),具有恒定性及群体代表性。使用Fisher检验发现滇南地区心脑血管疾病患者的CYP2C19基因分布与民族、年龄、性别、基础疾病、血脂及心脑血管疾病种类无明显关联,均差异无统计学意义(均P>0.05),滇南地区人群与东莞、江西、福建、川北、赤峰、厦门、陕西、昆明地区人群CYP2C19基因分布均差异有统计学意义(P<0.001、<0.001、0.045、0.008、0.001、0.005、<0.001、0.016)。结论滇南地区心脑血管疾病患者的CYP2C19基因分布与民族、年龄、性别、基础疾病、血脂及心脑血管疾病种类无明显关联。CYP2C19基因分布与地区分布相关,可以指导不同地区个性化用药。

安定身体依赖性小鼠肝微粒体酶水平和血浆安定浓度的研究

用掺食法递增安定剂量56 d致小白鼠身体依赖性,肝微粒体蛋白及细胞色素P_(450)含量均显著增加,高于进食安定7 d组,分别为313.0±s 30.56及261.17±s 23.04 mg·g^(-1)肝,P<0.05及3.96±s 0.07和2.60±s 0.52 nmol·mg^1蛋白,P<0.01。戒断后血浆安定浓度随戒断时间延长逐渐降低,而去甲基安定浓度急剧下降,于戒断后24 h达最低水平,以后逐渐回升。而进食安定7 d组的安定及去甲基安定浓度均逐渐下降,二者间无显著性差异。

CYP2C19基因多态性及Hp感染与缺血性脑卒中患者的关联性

目的探讨细胞色素氧化酶P_(450)2C19(CYP2C19)基因多态性、幽门螺杆菌(Hp)感染与缺血性脑卒中发病风险和氯吡格雷治疗的关联性。方法回顾性选取2018年9月-2020年8月湖北省武汉市新洲区人民医院收治的92例缺血性脑卒中患者设为研究组,均采用氯吡格雷进行抗血小板治疗;另选取同期于医院体检的非脑血管病变人群60例作为对照组,检测两组CYP2C19基因多态性,缺血性脑卒中患者血清脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、同型半胱氨酸(Hcy),分析CYP2C19基因分型和Hp感染与缺血性脑卒中发病风险和氯吡格雷治疗的相关性。结果92例缺血性脑卒中患者中CYP2C19基因分型为野生型GG 44例(47.83%),突变杂合型GA 27例(29.35%),突变纯合型AA 21例(22.83%);高血压、糖尿病、血清Hcy≥25μmol/L、CYP2C19基因为突变型(GA或AA)和Hp感染是缺血性脑卒中发生的影响因素(P<0.05)。缺血性脑卒中患者携带突变杂合型GA和突变纯合型AA的血小板抑制率低于携带野生型GG患者(P<0.05),且氯吡格雷抵抗率高于野生型GG患者(P<0.05)。缺血性脑卒中合并Hp感染患者的血清Hcy、Lp-PLA2和MCP-1水平和上消化道出血发生率均高于未发生Hp感染患者(P<0.05)。结论Hp感染和携带CYP2C19基因突变型GA或AA均可增加缺血性脑卒中发病风险,CYP2C19基因GA型或AA型相比GG型患者更易发生氯吡格雷抵抗,进而降低抗血小板治疗效果。