LncRNA-GAS5抑制miR-21介导的非完全匹配靶mRNA降解

LncRNA-GAS5作为miR-21的"分子海绵",通过"吸收"miR-21从而调控miR-21对靶基因的抑制.此外,miR-21直接调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的表达.我们首先在HEK293T和HeLa细胞中确认,miR-21通过碱基互补配对调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的蛋白表达,但不影响PTEN和TPM1mRNA的水平.此外,过表达miR-21后,qRT-PCR检测PTEN和TPM1mRNA的半衰期,发现它们的半衰期显著缩短,miR-21加速PTEN和TPM1mRNA的降解.通过转染lncRNA-GAS5的过表达质粒,发现lncRNA-GAS5竞争性地与miR-21结合能够延长PTEN和TPM1mRNA的半衰期,而miR-21与lncRNA-GAS5碱基互补配对结合后,又对lncRNA-GAS5存在调节作用,减弱lncRNA-GAS5的稳定性并加速lncRNA-GAS5的降解.LncRNA-GAS5作为miR-21的"分子海绵"能够抑制miR-21对非完全匹配靶mRNAPTEN和TPM1的降解,同时,miR-21与lncRNA-GAS5结合后又存在对lncRNA-GAS5的反馈调节,这些相互作用机制的发现有助于了解lncRNA、miRNA、mRNA之间这个复杂又精细的调控环路.

lncRNA-GAS5调节Notch通路对肺癌A549细胞血管生成拟态的影响

目的探讨lncRNA-生长停滞特异性转录本5(growth arrest specific transcript 5,GAS5)通过调节Notch通路对肺癌A549细胞血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响。方法培养人肺癌细胞A549和人正常肺细胞MRC-5,采用qRT-PCR技术检测细胞中lncRNA-GAS5的表达水平,向肺癌细胞A549转染GAS5过表达质粒(p-EGFP-C1-GAS5组)和空载体质粒p-EGFP-C1(阴性对照组),空白对照组未处理,荧光显微镜观察转染效率,收集转染后对数期细胞进行三维体外培养法,观察VM,Western blot法检测HIF-1α、VEGF、VE-cadherin、MMP-2、MMP-9及Notch通路蛋白Notch1、DLL4的表达水平。结果qRT-PCR结果显示,与正常细胞MRC-5比较,肺癌细胞A549 lncRNA-GAS5 mRNA水平显著降低(P<0.05);荧光显微镜下观察质粒转染24 h后细胞转染效率达80%;细胞转染后,与空白对照组比较,p-EGFP-C1-GAS5组lncRNA-GAS5表达水平显著升高(P<0.05),阴性对照组与空白对照组差异无显著性。肺癌A549细胞接种后10 h细胞贴附在Matrigel基质胶上彼此连接成空腔样、环状结构,形成拟态血管,转染过表达质粒的A549细胞组管腔形成数明显多于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),阴性对照组与空白对照组差异无显著性;Western blot检测显示,p-EGFP-C1-GAS5组VEGF、VE-cadherin、HIF-1α、MMP-2、MMP-9表达水平与阴性对照组和空白对照组相比,均显著降低(P<0.05),阴性对照组和空白对照组各蛋白表达量无显著变化;p-EGFP-C1-GAS5组血管生成相关蛋白Notch1、DLL4表达水平与阴性对照组和空白对照组相比,均显著降低(P<0.05),阴性对照组和空白对照组各蛋白表达量无显著变化。结论lncRNA-GAS5过表达抑制VM的形成和血管生成相关蛋白的表达,其可能通过抑制Notch通路的激活,抑制VM的形成。

广西人群LncRNA-GAS5基因rs6790A/G和rs1951625A/G位点多态性分布

目的:研究分析广西人群LncRNA-GAS5基因rs6790A/G和rs1951625A/G位点多态性的分布特征,并比较其与其他不同地区人群的分布差异。方法:采用SNPscan技术对289例广西人rs6790A/G和rs1951625A/G位点进行基因分型检测,并与国际千人基因组计划数据库公布的中国南方汉族人群(CHS)、日本人群(JPT)、欧洲人群(CEU)、非洲人群(AFR)和美洲人群(AMR)的分布数据进行比较,分析不同种族人群rs6790A/G和rs1951625A/G位点基因型及等位基因频率的分布差异。结果:rs6790A/G位点AA、GA和GG 3种基因型分布频率分别为15.6%、48.1%和36.3%;rs1951625A/G位点AA、GA和GG 3种基因型分布频率分别为8.3%、38.1%和53.6%。2个位点的基因型和等位基因频率在广西人群不同性别间的差异均无统计学意义(P>0.05)。广西人群rs6790A/G位点的基因型和等位基因频率与JPT、CEU、ARF和AMR人群差异均有统计学意义(P<0.05),与CHS人群差异无统计学意义(P>0.05);广西人群rs1951625A/G位点的基因型和等位基因频率与AFR人群差异有统计学意义(P<0.05),与CHS、JPT、CEU和AMR人群差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:广西人群LncRNA-GAS5基因rs6790A/G和rs1951625A/G位点存在基因多态性,且其在不同人群间存在不同程度的差异。

LncRNA-GAS5基因rs2235095G/A和rs2067079C/T单核苷酸多态性在广西人群中的分布

目的:研究广西人群lncRNA-GAS5基因rs2235095G/A和rs2067079C/T单核苷酸多态性(SNPs)的分布特征,并比较其在不同地区人群中的分布差异.方法:采用SNPscan技术对289例广西人群rs2235095G/A和rs2067079C/T位点进行基因分型检测,并分析其基因型和等位基因频率与国际千人基因组计划数据库公布的欧洲(CEU)、日本(JPT)、尼日利亚(YRI)和中国南方汉族人群(CHS)的分布差异.结果:rs2235095G/A位点存在GG、AG和AA 3种基因型,分布频率分别为37.0%、47.4%和15.6%;rs2067079C/T位点存在CC、CT和TT 3种基因型,分布频率分别为63.0%、31.5%和5.5%.2个位点的基因型和等位基因频率在广西人群不同性别间比较差异均无统计学意义.rs2235095G/A基因型和等位基因频率与国际千人基因组计划数据库公布的CEU、JPT和YRI人群比较差异均有统计学意义;rs2067079C/T基因型和等位基因频率与YRI人群比较差异均有统计学意义.结论:广西人群lncRNA-GAS5基因rs2235095G/A和rs2067079C/T位点存在基因多态性,且其在不同人群间存在不同程度的差异.

IncRNA-UCA1、lncRNA-GAS5在卵巢癌组织中的表达及与临床病理特征及预后的关系研究

目的分析IncRNA-UCA1、lncRNA-GAS5在卵巢癌组织中的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法回顾性选取2015年5月至2018年5月南通市妇幼保健院诊治的卵巢癌患者128例,获得其癌组织和癌旁组织(近2 cm)进行研究。进行IncRNA-UCA1、lncRNA-GAS5表达检查,问卷调查法统计患者的年龄、病理类型、分期、分级、淋巴转移和肿瘤直径。随访3年,统计2组患者生存时间。比较癌组织和癌旁组织IncRNA-UCA1、lncRNA-GAS5水平;分析不同临床病理特征患者IncRNA-UCA1、lncRNA-GAS5高表达和低表达情况;比较不同IncRNA-UCA1、lncRNA-GAS5表达患者生存情况,分析其预后。结果卵巢癌组织IncRNA-UCA1水平为7.19±1.21,高于癌旁组织(0.82±1.26),lncRNA-GAS5水平为2.74±0.14,低于癌旁组织(4.26±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05)。IncRNA-UCA1高表达66例,低表达62例。lncRNA-GAS5高表达63例,低表达65例。不同年龄阶段、病理类型、分期、分级、淋巴结转移患者IncRNA-UCA1高表达率和lncRNA-GAS5低表达率差异有统计学意义(P<0.05)。高表达IncRNA-UCA1患者3年生存时间(18.24±1.58)个月,少于低表达患者[(21.48±1.52)个月],高表达lncRNA-GAS5患者3年生存时间(22.57±1.04)个月,多于低表达患者[(17.98±1.01)个月],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论IncRNA-UCA1、lncRNA-GAS5在卵巢癌组织中的表达存在差异,其中IncRNA-UCA1高表达,lncRNA-GAS5低表达,并影响临床病理特征及预后。

lncRNA-GAS5/miRNA21 ceRNA调控网络在高氧性急性肺损伤发病过程中的作用研究

目的:探究lncRNA-GAS5/miRNA21 ceRNA调控网络在高氧性急性肺损伤(HALI)发病过程中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、lncRNA组和lncRNA联合miRNA组,空白组不做任何处理,lncRNA组静脉注射lncRNAGAS5过表达慢病毒载体,lncRNA联合miRNA组静脉注射lncRNA-GAS5和miR-21过表达慢病毒载体,模型组静脉注射等体积慢病毒空载体;模型组和各干预组大鼠均吸入高浓度氧气建立大鼠HALI模型。高氧处理48 h后检测大鼠动脉血氧合指数(OI)、呼吸指数(RI),ELISA检测血浆细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,观测肺组织病理损伤,计算左肺上叶湿/干重比(W/D),AnnexinⅤ-PI凋亡染色试剂盒检测肺泡上皮细胞凋亡,RT-PCR、Western blot检测肺组织lncRNA-GAS5、miR-21、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达及NF-κB激活情况。结果:模型组大鼠肺组织lncRNA-GAS5水平显著高于空白组,而miR-21水平显著低于空白组(P<0.01);与模型组相比,lncRNA组大鼠OI显著降低,RI、肺W/D、病理评分、肺组织凋亡细胞数、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达、IκBα磷酸化水平及细胞核内NF-κB p65水平显著升高(P<0.01);与lncRNA组相比,lncRNA联合miRNA组大鼠OI显著升高,RI、肺W/D、病理评分、肺泡上皮凋亡细胞数、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达、IκBα磷酸化及细胞核内NF-κB p65水平显著降低(P<0.01)。结论:lncRNA-GAS5/miRNA21轴参与HALI发病过程,lncRNA-GAS5通过负调节miR-21表达间接激活NF-κB通路,促发HALI。

血清lncRNA-GAS5及miR-451在重症肺炎患儿中的表达水平及临床意义

目的 探讨lncRNA-GAS5及miR-451在重症肺炎患儿血清中的表达及临床意义。方法 选取2017年1月至2020年1月西北妇女儿童医院收治的89例重症肺炎患儿为研究组,另选取同期健康体检儿童92例作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测血清lncRNA-GAS5和miR-451水平;通过免疫比浊法检测血清载脂蛋白E(ApoE)及C-反应蛋白(CRP)水平;通过化学发光法检测血清降钙素原(PCT)水平;通过Pearson相关分析lncRNA-GAS5、miR-451表达与ApoE、CRP、PCT水平的相关性;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA-GAS5及miR-451对重症肺炎的诊断价值。结果 与对照组相比,研究组血清lncRNA-GAS5水平明显降低,miR-451、ApoE、CRP、PCT水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);重症肺炎患儿血清中lncRNA-GAS5表达与ApoE、CRP、PCT水平呈负相关(r=-0.493、-0.526、-0.477,P<0.05),miR-451表达与ApoE、CRP、PCT水平呈正相关(r=0.547、0.446、0.454,P<0.05);lncRNA-GAS5与miR-451联合检测诊断重症肺炎的曲线下面积(AUC)高于二者单项检测。结论 lncRNA-GAS5及miR-451可作为早期诊断重症肺炎的分子标志物。

LncRNA-GAS5和miR-103在浸润性乳腺癌中的表达关系及意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)-生长停滞特异性转录物5(GAS5)与微小RNA(miR)-103在浸润性乳腺癌中的表达关系及临床意义。方法收集72例浸润性乳腺癌经手术切除的癌组织及癌旁正常组织标本,实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)测定LncRNA-GAS5、miRNA-103相对表达量,并收集患者病理资料,分析浸润性乳腺癌LncRNA-GAS5、miRNA-103表达与病理参数的关系及两者表达的相互关系。结果浸润性乳腺癌癌组织LncRNAGAS5相对表达量低于癌旁组织,miR-103相对表达量高于癌旁组织(P<0.05)。随临床分期的上升,LncRNA-GAS5表达降低,miR-103表达上升;伴淋巴结转移浸润性乳腺癌患者癌组织LncRNA-GAS5表达低于未伴淋巴结转移者,miR-103高于未伴淋巴结转移患者(P<0.05)。浸润性乳腺患者癌组织LncRNA-GAS5与miR-103表达呈负相关(P<0.05)。结论浸润性乳腺癌患者癌组织LncRNA-GAS5呈低表达,miR103呈高表达,两者表达呈负相关,且均与乳腺癌临床分期、淋巴结转移有关。

LncRNA-GAS5对鲍曼不动杆菌降解HeLa细胞中SNAP29的调控作用

本文旨在构建LncRNA-GAS5(长链非编码RNA-生长抑制特异性转录本5,long non-coding RNAgrowth arrest-specific transcript 5)的真核过表达载体及敲减载体,研究鲍曼不动杆菌对突触体相关蛋白29(synaptosomal-associated protein 29,SNAP29)表达的影响及LncRNA-GAS5在其中发挥的调控作用。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增LncRNA-GAS5基因,将其克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,形成pcDNA3.1-GAS5真核表达载体;通过RNA干扰技术,设计敲减GAS5的寡核苷酸序列,将其构建至pRNAT-U6.1/Neo载体中,形成pRNAT-U6.1-GAS5敲减载体;采用实时荧光定量PCR法检测GAS5的表达,以确定是否成功过表达和敲减;采用蛋白免疫印迹法检测过表达或敲减GAS5后HeLa细胞中SNAP29表达的变化,并检测鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞后不同时间点SNAP29的表达,以及敲减或过表达GAS5后再感染鲍曼不动杆菌的HeLa细胞中SNAP29的表达。结果显示:pcDNA3.1-GAS5和pRNAT-U6.1-GAS5构建成功;pcDNA3.1-GAS5可使LncRNA-GAS5在HeLa细胞中大量表达,而pRNAT-U6.1-GAS5可使HeLa细胞中GAS5表达明显减少;过表达LncRNA-GAS5可使HeLa细胞中SNAP29表达减少,而敲减LncRNA-GAS5可使SNAP29表达增加;随着鲍曼不动杆菌感染时间延长,HeLa细胞中SNAP29的表达减少,敲减LncRNA-GAS5可使SNAP29表达回复,而过表达LncRNA-GAS5可增强SNAP29的降解。结果提示,本研究成功构建了LncRNA-GAS5的过表达和敲减载体,并发现其对SNAP29表达具有负向调控作用,表明鲍曼不动杆菌对SNAP29的降解依赖LncRNA-GAS5,为进一步探讨鲍曼不动杆菌引起细胞自噬降解障碍的深层机制奠定了理论基础。

Ⅰ型子宫内膜癌组织中lncRNA-GAS5的表达及意义

目的 研究Ⅰ型子宫内膜癌组织中长链非编码核糖核酸GAS5 (lncRNA-GAS5)的表达及意义.方法 分别采集40例Ⅰ型子宫内膜癌患者及40例因子宫肌瘤等良性病变就诊患者的子宫内膜的组织标本,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法分别检测两种不同的子宫内膜组织中lncRNA-GAS5的表达,并结合Ⅰ型子宫内膜癌患者的病理和临床资料将检测的数据进行统计分析.结果 与正常子宫内膜组织相比较lncRNA-GAS5在Ⅰ型子宫内膜癌组织中表达下调,两组间的差异具有统计学意义(P<0.05).lncRNA-GAS5在期别较晚(Ⅲ~Ⅳ期)的Ⅰ型子宫内膜癌患者中低表达,低于期别较早(Ⅰ~Ⅱ期)的患者;在Ⅰ型子宫内膜癌有淋巴结转移的患者中lncRNA-GAS5呈现低表达,低于无转移者,且差异均具有统计学意义(P<0.05).在不同病理分级、肌层浸润深度,不同年龄的Ⅰ型子宫内膜癌患者中lncRNA-GAS5表达差异不显著(P>0.05).结论 子宫内膜癌组织中lncRNA-GAS5表达下调,在期别较晚(Ⅲ~Ⅳ期)及有淋巴结转移的Ⅰ型子宫内膜癌患者中也呈现低表达,lncRNA-GAS5可能在Ⅰ型子宫内膜癌发病和转移过程中起到了抑制作用.

枢经推拿对神经病理性疼痛大鼠TLR8/ERK信号通路及LncRNA-GAS5的影响及作用机制研究

背景近年来,枢经推拿在治疗神经病理性疼痛方面展现出较好的疗效,但其具体作用机制尚未充分阐明。目的以L5脊神经结扎而成的神经病理性疼痛大鼠模型为观察对象,根据各项研究指标观察枢经推拿对大鼠的镇痛作用,探讨其是否通过影响长链非编码RNA-生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA-GAS5)进而调控脊髓背角神经元凋亡达到镇痛效果。方法实验于2021年1—6月在广西中医药大学、广西大学动物医学实验中心完成。选取健康雌性SD大鼠120只,按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组,每组24只;模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组通过结扎L5脊神经来制备神经病理性疼痛大鼠模型。造模24 h后,假手术组暴露L5脊神经几分钟,不予结扎,逐层缝合关闭伤口;假推拿组轻抚大鼠双后肢18 min;枢经推拿组用自备按摩仪循序刺激两侧足少阳胆经上的环跳、阳陵泉、悬钟三穴,刺激力量为5 N,频率2 Hz,每穴、每法干预1 min,双侧6个穴位,3种手法,共计18 min;正常组、模型组正常喂养及观察,不施加任何干预。于造模前及造模后1、3、7、14 d分别进行行为学检测(机械缩足反射阈值、热缩足反射潜伏期);分别于干预7、14 d,随机抽取12只进行取材检测脊髓组织中介导TLR8/ERK信号通路相关蛋白表达情况[脊髓组织B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Caspase-3、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、Toll样受体8(TLR8)蛋白表达水平,LncRNA-GAS5、miR-21基因表达水平)]。结果(1)行为学方面,模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠造模后1、3、7、14 d机械缩足反射阈值均低于正常组(P<0.05);假手术组、假推拿组、枢经推拿组的机械缩足反射阈值在造模后14 d均高于模型组(P<0.05);假手术组、枢经推拿组造模后7、14 d机械缩足反射阈值高于假推拿组(P<0.05)。假手术组、枢经推拿组在造模后1、3、7 d热缩足反射潜伏期均低于正常组(P<0.05);假手术组、假推拿组、枢经推拿组在造模后7、14 d热缩足反射潜伏期均长于模型组(P<0.05);假手术组、枢经推拿组在造模后14 d热缩足反射潜伏期长于假推拿组(P<0.05)。(2)信号通路相关蛋白以及基因表达水平方面,造模后7 d,正常组Bcl-2蛋白表达水平低于其余各组(P<0.05);枢经推拿组的Bcl-2蛋白表达水平高于模型组,Caspase-3、ERK、TLR8蛋白表达水平均低于模型组(P<0.05);枢经推拿组的Bcl-2、Caspase-3、ERK、TLR8蛋白表达水平低于假手术组、假推拿组(P<0.05);造模后14 d,枢经推拿组的Bcl-2蛋白表达水平仍高于模型组,Caspase-3、TLR8蛋白表达水平仍低于模型组,而ERK蛋白表达水平高于模型组(P<0.05)。造模后7d,假推拿组和枢经推拿组LncRNA-GAS5基因表达水平均高于模型组,miR-21基因表达水平均低于模型组(P<0.05);枢经推拿组LncRNA-GAS5基因表达水平高于假推拿组,miR-21基因表达水平低于假推拿组(P<0.05);造模后14 d,模型组LncRNA-GAS5基因表达水平低于正常组,枢经推拿组与假推拿组lncRNA-GAS5基因表达水平高于模型组(P<0.05);枢经推拿组与假推拿组miR-21基因表达水平高于模型组(P<0.05)。结论枢经推拿手法对神经病理性疼痛大鼠起到一定的镇痛效果,初步推测镇痛作用机制可能是通过升高LncRNA-GAS5的表达来吸附miR-21介导TLR8/ERK通路相关蛋白抑制神经元凋亡,虽然其具体机制未明确证实,但LncRNA-GAS5有望成为以后治疗神经病理性疼痛的新靶点。

LncRNA-GAS5、LDH表达与胶质瘤放射治疗预后的关系研究

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录物5(LncRNA-GAS5)、乳酸脱氢酶(LDH)表达与胶质瘤放射治疗预后的关系。方法选取广西壮族自治区南溪山医院2017年6月~2019年6月收治的行放射治疗的脑胶质瘤患者112例,通过检测机体LncRNA-GAS5、LDH表达水平情况,分析其表达水平与患者预后的关系。结果截止随访时间点112例患者死亡43例,生存69例,两者间lncRNA-GAS5、LDH水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析发现lncRNA-GAS5表达水平与患者不良预后呈负相关(P<0.05),LDH水平与患者不良预后则呈正相关性(P<0.05);受试者工作特征曲线(ROC)显示:lncRNA-GAS5、LDH联合预测脑胶质瘤患者放射治疗后预后不良的曲线下面积为0.859,明显高于LDH曲线下面积(P<0.05);单因素分析发现肿瘤直径、病理分级及lncRNA-GAS5、LDH水平与脑胶质瘤患者放射治疗后预后不良有关(P<0.05);logistic多因素分析发现肿瘤直径≥3 cm、病理分级(Ⅳ级)及lncRNA-GAS5<0.41、LDH≥123.60 U/L是脑胶质瘤患者放射治疗后预后不良的危险因素(P<0.05)。结论lncRNA-GAS5、LDH表达水平与胶质瘤放射治疗后患者的预后情况密切相关,是影响患者预后的危险因素,对分析患者的预后情况具有较高的评估价值。

血浆lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1表达对非小细胞肺癌的诊断价值

目的:探讨血浆lncRNA生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)和lncRNA-CCAT1表达水平对非小细胞肺癌(NSCLC)的临床诊断价值。方法:分别收集60例NSCLC及60例良性肺病患者的血浆样本,采用实时荧光定量PCR法检测血浆中lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1的表达水平,比较两者在NSCLC组和良性肺病组的表达差异。构建受试者工作特征(ROC)曲线,根据ROC曲线图确定lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1诊断NSCLC的折点(cut off),计算两种lncRNA分别诊断及联合诊断NSCLC的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值和阴性预测值,同时与经典肿瘤标志物癌胚抗原、细胞角蛋白19(Cyfra21-1)进行比较,评估这两种lncRNA诊断肺癌的效能。结果:与良性肺病患者相比,NSCLC患者血浆中lncRNA-GAS5表达显著下调,而lncRNA-CCAT1表达明显上调(P均<0. 05)。除血浆lncRNA-GAS5表达与吸烟相关外,血浆lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1表达与NSCLC患者的性别、年龄、组织分型、临床分期均无相关性(P均> 0. 05)。lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1的ROC曲线下面积(AUC)略高于癌胚抗原和Cyfra21-1。血浆lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1诊断NSCLC的敏感性分别为86. 7%和88. 3%,高于癌胚抗原和Cyfra21-1(66. 7%和45. 0%)。相比于单独诊断,两种lncRNA联合诊断时敏感性提升到91. 7%,但特异性略有降低。当lncRNA-GAS5及lncRNA-CCAT1联合传统肿瘤标志物时诊断效能增加,且敏感性得到明显提升,特异性保持良好。结论:lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1在NSCLC患者血浆中的表达水平与良性肺病患者比较有显著差异,对NSCLC的诊断有一定价值。

LncRNA-GAS5在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2013年3月~2018年12月广东医科大学附属医院鼻咽癌组织标本56例为鼻咽癌组,正常鼻咽组织标本42例为对照组。qRT-PCR技术检测lncRNA-GAS5在两组的表达水平,分析lncRNA-GAS5的表达与患者临床病理特征及预后的相关性。结果鼻咽癌组lncRNA-GAS5相对表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度与lncRNA-GAS5的表达水平密切相关(P<0.05)。lncRNA-GAS5高表达患者的生存期显著高于低表达(P<0.01)。结论lncRNA-GAS5在鼻咽癌组织中表达降低,可能成为鼻咽癌患者新的预后因子。

非小细胞肺癌患者血浆lncRNA-GAS5、lncRNA-CCAT1表达变化及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆长链非编码RNA-生长阻滞特异度转录因子5(lncRNA-GAS5)、长链非编码RNA-结肠癌相关转录因子1(lncRNA-CCAT1)表达变化及临床意义。方法选择80例NSCLC患者作为NSCLC组,同期选择肺部良性疾病患者50例作为对照组。用荧光定量PCR法检测两组血浆lncRNA-GAS5、lncRNA-CCAT1表达,并分析二者表达与NSCLC患者临床病理特征的关系,用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆lncRNA-GAS5、lncRNA-CCAT1对NSCLC的诊断价值。结果与对照组比较,NSCLC组血浆lncRNA-GAS5表达低,血浆lncRNA-CCAT1表达高(P均<0.05)。血浆lncRNA-GAS5表达与NSCLC组织分化程度、TNM分期有关(P均<0.05),血浆lncRNA-CCAT1表达与NSCLC淋巴结转移、TNM分期有关(P均<0.05)。血浆lncRNA-GAS5诊断NSCLC的ROC曲线下面积(AUC)为0.756(95%CI:0.673~0.840),最佳截断值为26.71,此时灵敏度、特异度分别为0.81、0.79,准确度为0.77。血浆lncRNA-CCAT1诊断NSCLC的AUC为0.819(95%:CI 0.747~0.890),最佳截断值为13.11,此时灵敏度、特异度分别为0.85、0.82,准确度为0.81。血浆lncRNA-GAS5联合lncRNA-CCAT1诊断NSCLC的AUC为0.896(95%CI:0.841~0.951),此时灵敏度、特异度分别为0.89、0.92,准确度为0.86。结论NSCLC患者血浆lncRNA-GAS5表达低,血浆lncRNA-CCAT1表达高,二者均参与NSCLC的发生发展,且二者联合检测有助于早期诊断NSCLC。

LncRNA-GAS5基因多态性与广西人群系统性红斑狼疮的相关性研究

目的探讨lncRNA-GAS5基因rs55829688和rs75315904多态性与广西人群系统性红斑狼疮(SLE)易感性的相关性。方法选取2017年5月至2019年5月于右江民族医学院附属医院和百色市人民医院就诊的302例SLE患者与396名健康受试者为研究对象。采集SLE组与对照组受试者的静脉血样,提取基因组DNA,用SNPscan技术和Sanger测序对lncRNA-GAS5基因rs55829688和rs75315904位点进行基因分型与分析。结果rs55829688和rs75315904位点的基因型频率在两组之间差异无统计学意义(P>0.05),而rs55829688位点C等位基因的频率在两组之间差异有统计学意义(P<0.05);rs55829688位点C等位基因以及CT+CC基因型在伴有肾炎的患者中的频率显著低于不伴肾炎的患者(P<0.05);单倍型分析发现,rs55829688 C/rs75315904 A等位基因频率在SLE组中显著低于对照组(P<0.05)。结论在广西人群中,lncRNA-GAS5基因rs55829688位点携带C等位基因可能降低SLE及其并发肾炎的发病风险,并且rs55829688 C/rs75315904 A单倍型也可能降低SLE的发病风险。

原发免疫性血小板减少症患儿外周血lncRNA-GAS5和lncRNA-PVT1表达及意义

目的 分析原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患儿外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1表达情况及其与辅助T(helper T,Th)17、调节性T(regulatory T,Treg)细胞和出血评分、疗效的关系,探讨其对ITP的诊断价值和一线治疗无效的预测价值。方法 首次诊断为ITP患儿55例为ITP组,体检健康儿童45例为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测2组外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1相对表达量,应用流式细胞仪检测2组外周血Th17、Treg细胞百分比;采用Pearson相关法分析ITP患儿外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1相对表达量与Th17、Treg细胞百分比的相关性;评价ITP患儿出血评分及一线治疗反应,比较不同出血评分、一线治疗不同反应的ITP患儿外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1相对表达量;绘制ROC曲线,评估外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1相对表达量诊断ITP及预测ITP一线治疗无效的效能。结果 ITP组外周血lncRNA-GAS5(0.68±0.18)、lncRNA-PVT1(0.71±0.18)相对表达量及Treg细胞百分比[(4.41±0.73)%]均低于对照组[1.00±0.25、1.00±0.32、(5.62±0.84)%](P<0.05),Th17细胞百分比[(2.25±0.51)%]高于对照组[(1.61±0.36)%](t=7.093,P<0.001)。ITP患儿外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1相对表达量与Th17细胞百分比均呈负相关(r=-0.421,P=0.003;r=-0.294,P=0.017),与Treg细胞百分比均呈正相关(r=0.384,P=0.012;r=0.371,P=0.014)。出血评分1、2、3分的ITP患儿外周血lncRNA-GAS5(0.79±0.17、0.66±0.22、0.48±0.19)、lncRNA-PVT1(0.82±0.24、0.70±0.23、0.49±0.17)相对表达量均依次降低(P<0.05),一线治疗后完全反应、反应、无效的ITP患儿外周血lncRNA-GAS5(0.77±0.19、0.62±0.13、0.47±0.09)、lncRNA-PVT1(0.81±0.12、0.63±0.19、0.54±0.17)相对表达量均依次降低(P<0.05)。外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1相对表达量以0.761、0.851为最佳截断值,单独及联合诊断ITP的AUC分别为0.849(95%CI:0.775~0.922,P<0.001)、0.781(95%CI:0.682~0.888,P<0.001)、0.933(95%CI:0.888~0.978,P<0.001),灵敏度分别为88.89%、73.33%、82.22%,特异度分别为67.27%、80.00%、85.45%。外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1相对表达量以0.546、0.659为最佳截断值,单独及联合预测ITP一线治疗无效的AUC分别为0.886(95%CI:0.784~0.987,P=0.001)、0.806(95%CI:0.650~0.962,P=0.006)、0.910(95%CI:0.828~0.991,P<0.001),灵敏度分别为87.50%、87.50%、87.50%,特异度分别为80.85%、76.60%、85.10%。结论ITP患儿外周血lncRNA-GAS5、lncRNA-PVT1表达降低,出血评分越高、一线治疗反应越差其表达越低;二者通过调控Th17/Treg平衡参与ITP发生、发展,二者联合对ITP的诊断价值及一线治疗无效的预测价值均较高。

LncRNA-GAS5在食管鳞癌中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码核糖核酸生长组织特异性转录体5(LncRNA-GAS5)在食管鳞癌组织中的表达及其对食管鳞癌细胞株EC9706细胞增殖、凋亡的影响。方法:选取2016年2月至2019年1月于中国人民解放军陆军第958医院诊治的食管鳞癌患者78例,比较LncRNA-GAS5在食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达差异;过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)转染EC9706后通过CCK-8试剂盒以及平板克隆试验检测LncRNAGAS5过表达对细胞增殖能力的影响,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测LncRNA-GAS5过表达对细胞凋亡的影响,荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白质免疫印迹法检测抑癌基因PTEN表达变化。结果:与癌旁组相比,食管鳞癌组LncRNA-GAS5相对表达量降低(P<0.05);与空白组、阴性对照组相比,pEGFP-C1-GAS5组LncRNA-GAS5相对表达量升高(P<0.05);与空白组、阴性对照组相比,pEGFP-C1-GAS5组转染后48、72、96 h OD值、细胞克隆数降低(P<0.05),p EGFP-C1-GAS5组细胞凋亡率升高(P<0.05),PTEN mRNA、PTEN蛋白表达升高(P<0.05)。结论:食管鳞癌患者癌组织内LncRNA-GAS5低表达,LncRNA-GAS5过表达抑制癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡,可能是通过促进抑癌基因PTEN表达实现的。

白藜芦醇激活细胞外信号调节激酶5信号蛋白促进小鼠MC3T3-E1细胞增殖

背景:细胞外信号调节激酶5信号蛋白对生物体的存活不可或缺,白藜芦醇能通过多种途径促进成骨细胞增殖,但其是否能通过细胞外信号调节激酶5信号蛋白调控成骨细胞功能还需进一步验证。目的:探究细胞外信号调节激酶5对MC3T3-E1细胞增殖以及相关分泌蛋白的调控作用,进一步验证白藜芦醇通过激活细胞外信号调节激酶5完成上述过程。方法:小鼠MC3T3-E1前成骨细胞分别用完全培养基、XMD8-92(细胞外信号调节激酶5抑制剂)、表皮生长因子(细胞外信号调节激酶5激活剂)和白藜芦醇单独干预及XMD8-92+表皮生长因子、白藜芦醇+XMD8-92干预后,通过Western blot检测各组细胞内细胞外信号调节激酶5、磷酸化细胞外信号调节激酶5蛋白,增殖相关蛋白Cyclin D1、CDK4、PCNA,以及成骨细胞分泌蛋白骨保护素、核因子κB受体活化因子配体的表达情况,使用细胞免疫荧光染色检测各组细胞外信号调节激酶5、骨保护素和核因子κB受体活化因子配体荧光强度,使用EdU染色检测各组细胞增殖情况。白藜芦醇干预MC3T3-E1细胞的适宜浓度及时间由细胞形态学观察和CCK-8实验确定。结果与结论:①细胞外信号调节激酶5信号蛋白的激活能有效促进MC3T3-E1细胞增殖、上调骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值;②白藜芦醇干预MC3T3-E1细胞的适宜浓度及时间为5μmol/L,24 h;③白藜芦醇可以激活细胞外信号调节激酶5信号蛋白,进而促进成骨细胞增殖,并上调骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值;④研究结果表明,白藜芦醇可以通过激活细胞外信号调节激酶5信号蛋白促进MC3T3-E1细胞增殖,并通过激活细胞外信号调节激酶5信号蛋白上调骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值。

基于改进YOLOv5的红花目标检测算法研究

为实现农业非结构环境下采摘机器人对红花的准确识别,提出了一种基于改进YOLOv5的红花目标检测算法。将CBAM注意力机制嵌入到YOLOv5网络,提高了小尺寸目标物在高层次特征中的表现力;建立一种Alpha-IoU目标位置损失函数对原损失函数GIOU存在的梯度消失问题进行改进,提高了被遮挡红花的预测率,并通过在目标检测网络中增加分割检测模块,提高宽和高小于最低像素的小目标物检测精度,利用图像扩增数据集对改进后的YOLOv5算法进行训练,再分别与改进前后YOLOv5网络和Faster R-CNN网络在不同红花品种、不同自然光照情况、不同天气条件和不同遮挡情况下进行对比。试验结果表明:改进后的YOLOv5算法P值、R值分别为90.45%和0.90,对非结构环境下盛开期的未采摘红花mAP值达到94.48%,在不同影响因素下都可以准确识别出红花且置信度较高,可为红花采摘机器人自动化作业中的红花识别提供技术支持。