新型环介导等温扩增技术开发与应用研究进展

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种成熟的、应用广泛的检测技术。目前LAMP技术已经经历了十余年的研究和发展,开发了多种新型环介导等温扩增技术。其技术改进主要体现在提高检测特异性、加快反应速度、简化样本处理、实现多重扩增以及应用于现场检测平台等方面。本文从免疫环介导等温扩增、微流体环介导等温扩增、电化学发光环介导等温扩增、分子信标指示环介导等温扩增、多重实时环介导等温扩增、结合FTA卡的环介导等温扩增等新型技术,以及环介导等温扩增技术在简单化、快速化与产物检测特异化等方面的改进进行了综述,为环介导等温扩增技术的进一步发展和实际应用提供依据。

多重分子信标环介导等温扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立多重分子信标环介导的等温扩增快速检测葡萄球菌耐药基因mecA和种特异性基因femA的方法。方法利用包被有SPA单克隆抗体的磁珠富集样品中的金黄色葡萄球菌,快速提取其DNA,用多重环介导等温扩增反应(LAMP)同时扩增金黄色葡萄球菌耐药基因mecA和femA,扩增条件为65℃保温1 h;在反应过程中,两种分子信标荧光探针分别与mecA和femA基因的扩增产物互补序列结合,探针上的FAM和TET荧光分子产生两种荧光,最后检测反应管中的两种荧光值。结果该方法的最低检测限为10CFU/ml,与M-H培养基苯唑西林药敏试验结果相比较,灵敏度99.0%,特异度90.9%。结论该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便快速,适用于直接快速基因检测临床样品中MRSA。