北京黑猪LPL和NUDT3基因多态性及其与肉质性状的关联分析

【目的】研究脂蛋白脂酶(lipoprteinlipase,LPL)和Nudix水解酶3(Nudix hydrolase homolog 3,NUDT3)基因多态性与北京黑猪肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量和背膘厚的关联性,从而在分子水平上指导北京黑猪的育种工作。【方法】利用347头北京黑猪背最长肌样本进行IMF含量和背膘厚数据测定,按照IMF含量进行高、低分组。根据猪NUDT3和LPL基因序列设计引物并进行PCR扩增及测序,运用DNAStar软件中SeqMan分析测序结果,使用Duncan’s多重检验对2个基因不同基因型与北京黑猪IMF含量和背膘厚进行关联分析,并运用实时荧光定量PCR对其进行基因表达差异分析。【结果】LPL基因存在1个错义突变、3个同义突变和3个3′-UTR突变;NUDT3基因存在6个3′-UTR突变。LPL基因CDS区c.431 G>C位点与北京黑猪第6~7肋背膘厚显著相关,c.647 G>C位点与胸腰结合处背膘厚显著相关,c.637 A>G位点与第6~7肋背膘厚、胸腰结合处背膘厚和腰荐结合处背膘厚均显著相关(P<0.05);3′-UTR区c.1683 A>G位点与胸腰结合处背膘厚显著相关,c.1689 C>A位点与IMF含量显著相关(P<0.05)。NUDT3基因上的突变位点均发生在3′-UTR区,其中c.7204 G>T位点与北京黑猪IMF含量和腰荐结合处背膘厚显著相关,c.6068 C>G位点与IMF含量和第6~7肋背膘厚显著相关,c.5729 G>A位点与IMF含量显著相关(P<0.05)。实时荧光定量PCR分析发现,北京黑猪NUDT3基因c.7204 G>T位点IMF含量高、低组间表达量无显著差异,LPL基因c.1689 C>A位点CC与AA基因型间表达量无显著差异(P>0.05)。【结论】北京黑猪群体中LPL和NUDT3基因的突变位点与IMF含量显著关联,为北京黑猪肉品质选育提供了新的分子标记。

植物乳杆菌素LPL-1的异源表达及理化性质分析

为在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的Ⅱa类细菌素,以植物乳杆菌素LPL-1为研究对象,将植物乳杆菌素LPL-1的表达基因克隆至阿拉伯糖启动子下,C-端与His-tag序列融合表达,以单核细胞性李斯特菌ATCC 54002为指示菌,鉴定重组细菌素的活性。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对大肠杆菌BW25331基因组进行编辑,突变过氧化物酶基因(ahpC),敲除硫氧还蛋白还原酶(trxB)和谷胱甘肽还原酶(gor)基因,成功构建了适宜IIa类细菌素表达的细胞工厂E. coil(ΔtrxB+Δgor+ahpC^(M))。表达产物经亲和层析纯化后,对其理化性质进行分析,证明重组细菌素具有热稳定性(60~100℃)、酸碱稳定性(pH 2~11)、表面活性剂稳定性。本研究实现了植物乳杆菌素LPL-1在大肠杆菌中的活性表达,重组表达的细菌素具有稳定的理化性质,在食品行业具有广泛的应用潜力。

早发冠心病患者中LPL基因多态性与脂代谢的相关性探究

早发冠心病(premature coronary artery disease,PCAD)是冠心病(coronary heart disease, CHD)的一种特殊类型之一,其发生和发展和多种因素有关。LPL基因参与动脉粥样硬化的形成相关已被多项研究证实,越来越多的研究显示LPL基因多态性与脂质代谢紊乱有关。本文将从以下几个方面分别阐述早发冠心病患者中LPL基因多态性与脂代谢的相关性。

响应面法优化植物乳杆菌LPL-1产细菌素发酵条件及细菌素理化性质分析

为提高新型植物乳杆菌LPL-1所产细菌素(植物乳杆菌素LPL-1)的产量,以单核细胞性李斯特菌为指示菌,相对抑菌效价为响应值,通过响应面法对发酵条件进行优化,确定了最优发酵条件。利用单因素试验与Plackett-Burman试验,确定主要影响因素为温度、发酵时间与初始pH值,通过最陡爬坡试验与Box-Behnken响应面试验,确定最优发酵条件为发酵温度31℃、培养基初始pH 6.40、发酵时间32 h、接种量0.5%、装液量60%,在此条件下细菌素效价(674.29 AU/mL)比优化前(292.02 AU/mL)提高了1.31倍。通过对细菌素理化性质的分析,证明了细菌素具有热稳定性(100℃,30 min)、酸碱稳定性(pH 2～10)、蛋白酶敏感性与抑菌性,同时利用二硫键变性剂对细菌素结构中的二硫键进行变性处理,证明二硫键对其抑菌特性的重要性。因此,通过细菌素发酵条件的优化与理化性质的分析,为菌种与细菌素的产业化生产与应用提供了理论支持。

LPL十年征程,雁过留痕

随着JDG战队以3比1战胜BLG战队,2023年LPL春季赛总决赛落下了帷幕。在决赛前,LPL举办了十周年纪念颁奖典礼,表彰了十年间取得代表性成绩和做出卓越贡献的选手及生态内的工作人员们。作为最成功的职业电竞联盟之一,如今,已经走过了十年的LPL,为我们留下了什么?

载脂蛋白E（apoE）和脂蛋白脂酶（LPL）双基因敲除小鼠（apoE^-／-／LPL^＋/-）用于大豆异黄酮调血脂作用研究

目的探讨大豆异黄酮提取物对高胆固醇合并高甘油三酯血症基因工程小鼠的调血脂作用。方法高脂饮食条件下，以C57BL／6成年小鼠10只（65，早5）为正常对照，载脂蛋白E和脂蛋白脂酶双基因缺陷（apoE^-／-／LPL^＋/-）成年小鼠（ELK小鼠）40只（620，早20），随机分为4组：高脂模型组，每天200mg/kg大豆异黄酮提取物，每周阳性对照药0．5mg／kg尼尔雌醇和每天20mg/kg洛伐他汀灌胃组。连续灌胃给药4周，测定血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和血糖含量。结果与C57BL／6空白对照组相比，ELK高脂模型组小鼠的血清TC、TG和LDL—c含量均极显著增高（P〈0．01）。与高脂模型组相比，大豆异黄酮给药4周可显著降低ELK小鼠血清TG含量（P〈0．05），同时使血清HDL—c增加9．3％，而洛伐他汀和尼尔雌醇组分别降低了13．5％和8．7％；高脂诱导的ELK小鼠血清TC、LDL—c水平极度增高，大豆异黄酮、洛伐他汀和尼尔雌醇均不能显著降低TC、LDL-c含量（P〉0．05）。结论大豆异黄酮有明显调血脂作用。

猪肌肉组织LPL基因表达的发育性变化及其与肌内脂肪沉积关系的研究

以40-90 kg 6个体重组的莱芜猪和鲁莱黑猪共72头去势公猪为试验对象(每组6头),采用相对定量RT-PCR方法,以-βactin基因为内标,分析肌肉组织LPL基因表达的发育性变化及其与肌内脂肪沉积的关系。结果表明:莱芜猪与鲁莱黑猪肌肉组织中LPL基因表达的发育性变化趋势基本相似,随体重的增长,莱芜猪50-70kg阶段LPLmRNA表达丰度逐渐下降(P<0.05),80 kg阶段迅速回升出现一个峰值后再次下降;鲁莱黑猪LPLmRNA表达丰度随体重的增加呈缓慢下降趋势,70 kg以后变化不大并维持较低水平,其前期(40-60 kg)与后期(70-90 kg)的表达量差异显著(P<0.05)。总体上莱芜猪肌肉组织LPL基因表达量略高于鲁莱黑猪(P>0.05)。相关分析表明,莱芜猪和鲁莱黑猪肌内脂肪相对含量与肌肉组织LPLmRNA表达的发育性变化分别呈显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)的正相关。研究结果提示:猪肌肉组织LPL是肌内脂肪沉积的重要参与者,其编码基因的表达具有明显的体重发育特征,并对肌内脂肪的沉积具有一定程度影响。

猪肌肉组织MDH和LPL基因表达与肌内脂肪含量和脂肪酸组成关系的研究

为了研究野莱F1代猪肌内苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase,MDH)和脂蛋白脂酶(Lipoprotein li-pase,LPL)基因表达与肌内脂肪含量及脂肪酸组成的关系,探讨肌内脂肪的沉积机理。本研究以长白山野猪与莱芜猪的杂交1代猪(简称野莱F1代猪)和长×大白猪(各40头,公母各半)为研究对象,在20、35、50、70、90kg 5个体重阶段采取背腰最长肌,利用荧光定量RT-PCR方法研究MDH和LPL基因表达的发育性变化,分析该变化与肌内脂肪含量和脂肪酸组成的关系。结果表明:随着体重的增加,野莱F1猪和长×大白猪肌内MDH基因表达在20～70kg阶段呈上升趋势,在70～90kg阶段呈下降趋势;野莱F1猪和长×大白猪肌内LPL基因表达皆呈持续上升的趋势。相关分析表明:野莱F1猪MDH和LPL mRNA表达均与肌内脂肪含量呈显著正相关(P<0.05),与多不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸的比值(PUFA/SFA)不相关(P>0.05);长×大白猪MDH和LPL mRNA表达分别与肌内脂肪含量不相关和显著正相关(P>0.05和P<0.05),分别与PUFA/SFA呈极显著和显著负相关(P<0.01和P<0.05);2种猪肌内PUFA/SFA与肌内脂肪含量皆呈显著负相关(P<0.05)。结果提示:猪肌内MDH和LPL基因表达皆具有明显的体重发育特征;可以通过控制猪饲料中PUFA的含量来调节猪肉中PUFA的含量,从而影响MDH和LPL的基因表达,达到调节肌内脂肪含量的目的。

针刺丰隆单穴及其配穴对高脂血症大鼠LPL HL及肝细胞脂肪变性的效应比较

目的:研究针刺丰隆单穴及其配穴对高脂血症大鼠血清脂蛋白代谢酶及肝脏组织细胞脂肪变性的影响作用及其效应差别。方法:采用高脂饮食饲料喂养造成高脂血症大鼠模型。将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、丰隆单穴组和丰隆配穴组,每组10只。空白组每天给予基础饲料喂养,其余3组每天给予高脂饲料喂养。造模第15天给予丰隆单穴组、丰隆配穴组针刺治疗。治疗5周后,所有大鼠腹腔静脉取血检测LPL、HL。摘取肝脏进行油红"O"染色。结果:丰隆单穴组、丰隆配穴组的LPL、HL均明显高于模型组,有极显著性差异(P<0.01),丰隆单穴组与丰隆配穴组比较无显著性差异(P>0.05)。丰隆单穴组和丰隆配穴组均比模型组脂肪细胞小、数量少、染色浅。丰隆配穴组的肝组织脂肪细胞明显比丰隆单穴组染色浅,密度相对小。结论:针刺丰隆单穴或丰隆、关元、内关3穴合用均可提高高脂血症大鼠血清LPL、HL的活性,催化TG水解,二者作用的差异不显著。针刺丰隆单穴或丰隆、关元、内关3穴合用均可减轻肝细胞内脂肪的堆积,对肝脏组织细胞脂肪变性具有一定的改善作用。其中,针刺丰隆、关元、内关3穴的效果优于丰隆单穴,能更好的调控肝脏脂质代谢。

牦牛LPL基因外显子7多态性与生长性状相关性的研究

采用PCR-SSCP技术对5个牦牛品种共398头牦牛脂蛋白脂肪酶基因(LPL)外显子7进行了多态性研究,分析了该基因与牦牛生长性状的相关性。结果表明,牦牛LPL基因外显子7存在2个等位基因3种基因型。各群体在该基因座上呈Hardy-Weinberg平衡状态。三种基因型与牦牛部分生长性状的最小二乘法分析表明,该位点多态与牦牛的体重、体高、胸围存在显著相关(P<0.05),BB型个体体重、体高、胸围显著高于AA和AB型个体。初步推断牦牛LPL基因第7外显子可作为牦牛标记辅助选择的遗传标记之一。

猪LPL基因PCR-RFLP遗传变异的研究

利用PCR-RFLP技术,对大白猪、长白猪、杜洛克、荣昌猪、内江猪、八眉猪、汉中白猪、汉江黑猪8个家猪品种和1个野猪种共368头猪LPL基因的第6和第8内含子进行遗传变异研究。结果表明:(1)在第6内含子的Sma -RFLP位点上,各猪种均存在多态性,长白、杜洛克、内江猪和八眉猪以AA和AB基因型为主,大白、荣昌猪、汉中白猪、汉江黑猪及野猪以AB和BB基因型为主;在Pvu -RFLP位点上,国外猪种均为DD纯合子,而国内猪种和野猪在此位点上均存在变异;(2)在第8内含子的Hind -RFLP位点上,国外猪种和荣昌猪表现出多态性,而国内其他猪种和野猪均为FF纯合子;在EcoR -RFLP位点上,各猪种均表现多态性,且以GH杂合子为主,没有表现出差异。

兴义鸭LPL基因外显子8多态性与生长和肉质性状的关联性分析

脂蛋白脂酶(LPL)是动物脂质沉积和新陈代谢的关键酶,对生长和肉质发挥着重要作用。试验采用PCR-SSCP法和DNA直接测序技术相结合对兴义鸭LPL基因外显子8进行多态性检测,并分析其多态与生长和肉质性状的关联性。结果表明,在兴义鸭LPL基因外显子8首次检测到1个T1251C同义突变,产生三种基因型TT、TC和CC,2个等位基因T和C,基因型TT和等位基因T的频率分别为0.807 7和0.875 0,多态信息含量为0.194 8,表现为低度多态,卡方(χ2)检验表明T1251C位点的基因型分布在兴义鸭中未偏离HardyWeinberg平衡。最小二乘分析显示,TT基因型个体的宰前体重显著低于CC基因型(p<0.05),胸宽显著低于TC基因型(p<0.05),推测等位基因C可能是兴义鸭生长性状的有利等位基因,可作为生长性状的一个标记性辅助选择位点。

日粮代谢能水平对北京油鸡脂肪沉积和LPL基因表达的影响

试验旨在研究不同日粮代谢能水平对北京油鸡脂肪沉积及脂蛋白酯酶(LPL)基因mRNA表达影响。试验以3周龄北京油鸡公鸡为研究对象,将480只公鸡随机分为4组,分别饲喂4个代谢能水平的日粮(12.122、12.540、12.958和13.376MJ/kg),每个处理组5个重复,每个重复24只鸡。试验期为10周。采用荧光定量PCR方法检测LPL基因mRNA表达水平。结果表明,日粮代谢能水平对鸡体脂沉积各项指标和LPL基因mRNA表达水平影响极显著,随日粮代谢能水平提高,各项体脂沉积指标极显著上升,胸肌和腿肌IMF、皮脂重和皮脂率在ME3达到峰值,LPL基因mRNA表达水平在ME2组达到峰值(P<0.01)。LPL基因mRNA表达水平与腹脂率、皮脂重和皮脂率呈显著正相关(P<0.05)。研究结果提示,日粮代谢能水平显著影响北京油鸡体脂沉积和LPL基因mRNA表达;LPL基因表达影响北京油鸡体脂沉积状况。

猪LPL基因多态性及其部分DNA片段的测序

脂蛋白脂肪酶（Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｌｉｐａｓｅ，ＬＰＬ） 是影响动物脂肪沉积的关键酶之一。本文利用ＰＣＲＳＳＣＰ法，对猪的ＬＰＬ基因进行了多态性分析，发现其５’端区域存在ＤＮＡ 多态性。脂肪型猪种梅山猪和通城猪表现出３种等位基因型（ＡＡ、ＡＢ、ＢＢ） ，其等位基因Ａ和Ｂ的频率分别为０．７６、０ ．２４ 和０．７７、０ ．２３ ；而瘦肉型猪种长白猪和大白猪表现出另外不同的３ 种等位基因型（ ＣＣ、ＣＤ、ＤＤ），其等位基因Ｃ和Ｄ 的频率分别为０．７６ 、０ ．２４ 和０．７２、０．２８ 。测序结果表明具四种等位基因纯合子的ＤＮＡ 片段之间存在５ 处碱基突变，分别表示为等位基因ＡＡＴＣＣＴ，ＢＡＴＴＣＴ，ＣＧＣＣＣＴ和ＤＧＣＣＧＣ，其中等位基因Ｄ 第＋ ３２ 处发生Ｔ／Ｃ 的突变导致亮氨酸到脯氨酸的改变（Ｌｅｕ→Ｐｒｏ） 。

湘西黄牛LPL基因第2外显子的遗传多态性及其与生长性状的关联分析

为了探讨湘西黄牛分子遗传特征及寻找与生长性状相关的分子标记,采用创造酶切位点PCR-RFLP(CRS-PCR-RFLP)和测序技术检测了湘西黄牛LPL基因第2外显子的多态性,并进行了LPL基因的基因型与湘西黄牛生长性状的关联分析。多态性分析结果表明,湘西黄牛群体LPL基因第2外显子存在g.355420C>T和g.355427T>A 2个突变位点,且都处于中度多态,其中g.355420C>T位点为本试验新发现的突变位点,g.355427T>A位点所编码的氨基酸由苏氨酸转变为丝氨酸。基因型与生长性状的关联分析结果表明,g.355420C>T位点CC基因型个体的体高、体长和体重均显著大于CT和TT基因型个体(P<0.05),C等位基因对湘西黄牛的生长性状为正效应。g.355427T>A位点的TT和AT基因型个体的体高、体长、胸围和体重均极显著大于AA基因型个体(P<0.01),T等位基因为正效应。表明LPL基因第2外显子的g.355420C>T和g.355427T>A位点对湘西黄牛生长性状有显著影响,可能为湘西黄牛生长性状的分子遗传标记位点。

大口黑鲈脂代谢相关基因NPY、UCP2、LPL、HL克隆与分子进化分析

采用RT-PCR和RACE方法克隆了大口黑鲈NPY基因cDNA全序列及UCP2、LPL、HL基因cDNA核心片段。序列分析结果表明,大口黑鲈NPY基因cDNA全序列长664 bp,其中5′端非翻译区(5′-UTR)长53 bp,3′端非翻译区(3′-UTR)长311 bp,开放阅读框(ORF)长300 bp,编码99个氨基酸,即前体NPY。大口黑鲈前体NPY包括三个部分,28个氨基酸组成的信号肽、36氨基酸组成的成熟NPY以及32个氨基酸组成的由Gly-Lys-Arg指示的NPY C端肽(CPON)。大口黑鲈UCP2、LPL、HL基因cDNA核心片段长度分别为737 bp、509 bp和666 bp,各自编码245个氨基酸、169个氨基酸和222个氨基酸。将4个基因的氨基酸序列分别与其他物种的氨基酸序列进行同源性比较,并通过MEGA3构建系统树,对这4个脂代谢相关基因的分子进化特征进行了探讨。

兴义矮脚鸡屠宰性能、肌肉品质及LPL基因表达的研究

为了研究兴义矮脚鸡的屠宰性能、肌肉品质、肌肉氨基酸含量及LPL基因mRNA的表达情况。屠宰了14周龄同批孵出的兴义矮脚鸡100只(公、母各半)。结果表明:公、母鸡屠宰率分别为87.40%、87.97%,公鸡的活重、半净膛率、全净膛率等均极显著(P<0.01)地高于母鸡;腹脂率极显著(P<0.01)低于母鸡。公鸡肌肉的脂肪含量(1.99%)、干物质含量(26.24%)显著低于母鸡的2.37%、27.31%(P<0.05),公鸡的蛋氨酸、缬氨酸含量显著低于母鸡(P<0.05)。腹脂、皮脂、肌肉的LPL mRNA表达量有性别差异性,而且也存在肝、腹脂、皮脂、肌肉等组织差异性。综上所述,兴义矮脚鸡公鸡产肉性能较好;母鸡的风味和营养价值较高,LPL基因mRNA的表达有组织和性别差异性。

猪生长肥育期背最长肌LPL基因表达与肌内脂肪含量相关研究

选取健康、体重接近10kg的杜洛克×长白×大约克去势公猪36头，体重达10，20，35，50，80，110kg时各屠宰6头。从背最长肌提取总RNA，反转录为cDNA，以猪B-actin基因作为内参，利用实时荧光定量RT-PCR技术，对各阶段LPL mRNA进行相对定量分析；结合IMF含量及大理石纹评分，分析LPL基因表达水平对IMF含量等的影响。结果表明：LPL mRNA、IMF含量及大理石纹评分随体重增加均呈上升趋势，其中LPL mRNA表达量80kg阶段显著高于10～50kg阶段（P〈0．05），肌内脂肪和大理石纹评分110kg均高于10～50kg阶段（P〈0．01）；IMF含量与大理石纹评分和LPL基因表达水平均呈现极显著正相关（P〈0．01）。

惠阳胡须鸡LPL、FASN基因多态性的研究

以惠阳胡须鸡为研究对象,分别以LPL、FASN基因为脂肪性状相关的候选基因,采用限制片段长度多态性(RFLP)检测这2个候选基因在惠阳胡须鸡中的多态性。研究结果表明,(1)用限制性内切酶HinfⅠ对LPL基因第8内含子进行RFLP分析,发现76.3%为已报道的BB型,另发现了两种新的基因型,分别占1.7%和22%,无AA型;(2)用限制性内切酶HaeⅢ对FASN基因进行RFLP分析,发现BB基因型比例为64.8%,BC型12.24%,CC型基因型比例23.4%。B等位基因频率为0.7041,C等位基因频率为0.2959,B等位基因频率明显高于C等位基因频率。

LPL基因多态性与黑羽番鸭肉质性状的相关性分析

采用PCR-SSCP技术对黑羽番鸭LPL基因部分序列进行了多态性研究,分析不同基因型与肉质性状的关联。结果表明:在第3内含子上发现了2个SNPs,分别为G120A、A128G,形成了HH、HI、II 3种基因型。群体纯合度为0.5001,多态信息含量为0.3749。II型公鸭胸肌中Pro含量显著高于HI型,II型Val、Met、Phe含量显著高于HH型;HI型母鸭胸肌中His含量显著性高于II型;II型公鸭腿肌中Asp含量显著高于HI型,HH型His含量显著高于II型,II型Pro含量显著高于HH型,II型Ile、Phe含量显著高于HH型、HI型;HI型母鸭腿肌中Gly含量显著高于II型,HI型Arg含量显著高于HH型(P<0.05)。