白藜芦醇通过下调LRP5/6表达抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖

目的通过体外实验研究白藜芦醇(RES)抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的作用机制。方法将处于对数生长期小鼠乳腺癌4T1细胞消化后接种于3.5 cm细胞皿中,分别加入0、2.5、5、10、20μmol/L的RES干预72 h,使用倒置显微镜拍照观察法和台盼蓝计数法检测RES干预后细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测低密度脂蛋白相关受体结合蛋白5(LRP5)、低密度脂蛋白相关受体结合蛋白6(LRP6)蛋白表达量。再将细胞分为对照组、RES组,分别加入0μmol/L和前述所筛选的最佳干预浓度的RES干预72 h,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)核蛋白表达量。接着将细胞分为siCtr组、siLRP5组、siLRP6组、siβ-catenin组,siCtr组给予正常培养,siLRP5组加入LRP5小干扰RNA(siRNA)沉默LRP5基因,siLRP6组加入LRP6 siRNA沉默LRP6基因,siβ-catenin组加入β-catenin siRNA沉默β-catenin基因,使用倒置显微镜拍照和台盼蓝计数检测上述4组细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测LRP5、LRP6和β-catenin蛋白表达量。最后将细胞分为Vector组、Vector+RES组、LRP5组、LRP5+RES组、LRP6组、LRP6+RES组、N端缺失的β-catenin突变体组(β-cateninΔN组)、β-cateninΔN+RES组,Vector组给予正常培养,Vector+RES组加入前述所筛选的最佳干预浓度的RES干预,LRP5组加入过表达LRP5质粒,LRP5+RES组加入过表达LRP5质粒联合RES最佳干预浓度,LRP6组加入过表达LRP6质粒,LRP6+RES组加入过表达LRP6质粒联合RES最佳干预浓度干预,β-cateninΔN组加入过表达β-cateninΔN质粒,β-cateninΔN+RES组加入过表达β-cateninΔN质粒联合10μmol/L的RES干预。使用倒置显微镜拍照和台盼蓝计数检测上述8组细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测LRP5、LRP6和β-catenin蛋白表达量。结果与0μmol/L RES组比较,10、20μmol/L RES组细胞密度和活细胞浓度均降低(P<0.05),对LRP5、LRP6蛋白表达下调显著(P<0.05),故后续选用10μmol/L浓度的RES进行干预。与对照组比较,RES组β-catenin核蛋白表达量下调(P<0.05);与siCtr组比较,siLRP5组、siLRP6组和siβ-catenin组细胞密度和活细胞浓度降低(P<0.05);与Vector组比较,Vector+RES组细胞密度和活细胞浓度降低(P<0.05);与Vector+RES组比较,LRP5+RES组、LRP6+RES组和β-cateninΔN+RES组细胞密度和活细胞浓度升高(P<0.05)。结论白藜芦醇可阻止小鼠乳腺癌4T1细胞增殖,其机制与通过下调LRP5、LRP6表达抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

仙灵骨葆胶囊对糖尿病骨质疏松大鼠β-catenin、Runx2、LRP5的影响

目的观 察糖尿病大鼠在仙灵骨葆胶囊的干预下,骨保护作用的发挥及仙灵骨葆胶囊对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的作用,探讨仙灵骨葆胶囊在防治糖尿病骨质疏松中可能的作用机制。方法 雄性SD大鼠36只,左下腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg·kg^(-1)),建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、仙灵骨葆组(250 mg·kg^(-1))、阿仑膦酸钠组(1 mg·kg^(-1)),每组12只;同时设正常组12只。治疗12周后,检测生化指标:空腹血糖(FBG)、血钙(BC)、血磷(BP)、碱性磷酸酶(ALP);酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定骨碱性磷酸酶(BALP)、I型前胶原氨基末端前肽(PINP)、骨钙素(OCN)、骨保护蛋白(OPG)含量;检测大鼠骨密度(BMD)和股骨生物力学性能;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠骨组织β-catenin、Runt相关转录因子2(Runx2)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清FBG、ALP、BALP、PINP、OPG水平升高(P<0.05),血清BC、BP、BMD、OCN水平降低(P<0.05),股骨生物力学性能下降(P<0.05),β-catenin、Runx2、LRP5 mRNA表达降低(P<0.05);与模型组大鼠比较,仙灵骨葆组能有效降低FBG、ALP、BALP、PINP、OPG水平(P<0.05),升高BC、BP、BMD、OCN含量(P<0.05),改善糖尿病骨质疏松大鼠股骨生物力学性能(P<0.05),升高β-catenin、Runx2、LRP5 mRNA的表达(P<0.05)。结论 仙灵骨葆胶囊可以改善糖尿病大鼠骨代谢,主要与调节Wnt/β-catenin信号转导通路有关,其中β-catenin、Runx2、LRP5 mRNA表达的增加对骨代谢有积极意义,在骨细胞分化方面有促进作用,具体表现在骨组织形态的改善及骨破坏减少,为糖尿病骨质疏松的防治提供了一条新思路。

固本活血壮骨颗粒通过Wnt/LRP5/β-catenin信号通路改善糖皮质激素性骨质疏松症机制研究

目的:观察固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠骨微结构的影响及作用机制。方法:3月龄的Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及西药组。采用苏木精-伊红染色观察大鼠股骨组织病理形态变化;采用Micro-CT检测大鼠股骨的骨密度(BMD)、结构模式指数(SIM)、各向异性程度(DA)、骨小梁数量(Tb.N)、皮质骨总面积(Tt.Ar)、皮质骨厚度(Ct.Th)、骨髓腔面积(Ma.Ar);采用RT-PCR检测股骨组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)和Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达。结果:固本活血壮骨颗粒可改善GIOP大鼠骨微结构,提高BMD、Tb.N、Ct.Th值,降低SIM、Tt.Ar值(均P<0.05)。固本活血壮骨颗粒可提高GIOP大鼠骨组织中LRP5、Runx2 mRNA表达(均P<0.05)。结论:固本活血壮骨颗粒通过调节Wnt/LRP5/β-catenin信号通路拮抗GIOP,减少骨质丢失。

薯蓣皂苷通过上调Lrp5、β-catenin表达促进成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化

目的探讨薯蓣皂苷对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化的影响,并初步探讨薯蓣皂苷预防与治疗骨质疏松的作用机制。方法①体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分别加入含不同浓度的薯蓣皂苷(0.3、0.6、1.2μmol·L-1)进行培养,以洛伐他汀(0.04μmol·L-1)作为阳性对照。采用MTT法检测细胞增殖情况;用ALP试剂盒检测细胞内ALP的活性;采用RT-PCR检测Lrp5、β-catenin、OPG/RANKL mRNA表达情况;Von Kossa染色法检测细胞矿化能力。②通过RNAi技术将Lrp5基因沉默,检测薯蓣皂苷是否依赖于Lrp5来调节OPG/RANKL的比值。结果①薯蓣皂苷可以剂量依赖的促进MC3T3-E1细胞的增殖;②薯蓣皂苷可以剂量依赖的增加MC3T3-E1细胞ALP的活性;③薯蓣皂苷可以剂量依赖的上调MC3T3-E1细胞Lrp5、β-catenin、OPG/RANKL mRNA表达水平;④薯蓣皂苷可以使MC3T3-E1细胞产生的矿化结节数增加;⑤薯蓣皂苷依赖于Lrp5来调节MC3T3-E1的OPG/RANKL比值。结论①适量浓度的薯蓣皂苷可以促进MC3T3-E1细胞的增殖与分化;②薯蓣皂苷可以调节Lrp5等与骨代谢相关的基因的表达以产生抗骨质疏松作用。

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的影响

目的:观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组。线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2?h再灌注2周。治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值。结果:皮质LRP5的平均吸收光密度值(A值),模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著(P<0.05),模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异(P<0.01);皮质LRP5的阳性面积值(Area值),模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异(P<0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异(P<0.05),益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性(P<0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。结论:益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化。

小鼠Lrp5基因启动子的克隆及功能分析

为分析小鼠LDL受体相关蛋白 5 (Lrp5 )基因启动子的结构与功能 ,采用DNA重组技术 ,构建了 7种含小鼠Lrp5基因启动子荧光素酶报告基因表达体系 ,分别为 :pGL3 10 3(- 10 3bp～ + 132bp) ,pGL3 30 3(- 30 3bp～ + 132bp) ,pGL3 4 99(- 499bp～ + 132bp) ,pGL3 70 8(- 70 8bp～ + 132bp) ,pGL3 90 9(- 90 9bp～ + 132bp) ,pGL3 10 34(- 10 34bp～ + 132bp ) ,pGL3 12 2 9(- 12 2 9bp～ + 132bp) .以pRL TK为内参照质粒 ,瞬时转染成骨细胞株 (U2OS )及非成骨细胞株 (COS 7) ,收集细胞测定荧光素酶相对表达活性 .7种荧光素酶表达质粒在 2种细胞中表达无显著差异 ,即在所分析的小鼠Lrp5基因的 136 1bp(- 12 2 9bp～ + 132bp)范围内 ,不存在成骨细胞特异的表达元件 ;而且 7种表达质粒在 2种细胞中呈现相似的变化趋势 ,pGL3 10 3表达活性最高 ,pGL3 12 2 9表达活性显著降低 .表明小鼠Lrp5基因转录所必需的基本启动子序列在 - 10 3bp～ + 1bp范围内 ,- 10 34bp～ - 12 2 9bp之间的 195bp片段内可能含有负调控元件 .

FDPS、LRP5基因多态性与绝经后妇女骨质疏松的关系

目的探讨FDPS、LRP5基因多态性与绝经后妇女骨质疏松的关系。方法在2017年6月至2019年8月期间,共纳入364名绝经后妇女,其中228名确诊为骨质疏松症(OP),为骨质疏松组,另136名骨质正常者为对照组。收集所有参与者的临床数据和血液样本,分别采用TaqMan荧光探针及限制性片段长度多态性(PCR-RELP)法对FDPS rs2297480、LRP5 rs3736228位点进行基因分型,统计其与骨密度(BMD)和骨质疏松的关系。结果FDPS rs2297480 TT基因型腰椎和全髋关节的BMD值明显较低,T等位基因的存在与骨质疏松症有显著相关性。LRP5 rs3736228携带CC基因型的股骨颈和全髋关节骨密度值较低。结论在绝经后的骨质疏松症妇女中,BMD和FDPS基因多态性之间有很强的相关性,与LRP5基因多态性之间存在较低的关连。

石河子地区中老年人群LRP5基因Q89R位点多态性与骨质疏松的关联性分析

目的本研究旨在探讨石河子地区中老年人群LRP5基因Q89R位点多态性与骨质疏松之间的关系。方法通过采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)对115例健康汉族中老年人、74例骨量低下者和33例骨质疏松患者的LRP5基因Q89R位点进行分型,并计算其基因频率分布;全自动生化仪对生化指标进行检测;双能X线骨密度仪测定腰椎L1-L4和股骨颈、Ward’s三角区、大转子、股骨干的骨密度。结果中老年男性人群LRP5基因Q89R位点各基因型之间的骨密度、生化指标均无统计学差异。中老年女性LRP5基因Q89R位点QQ、QR、RR基因型总基因频率分别为82.14%、16.97%、0.89%;正常对照组分别为88.10%、11.90%、0%;骨量低下组分别为90.24%、9.76%、0%,骨质疏松组分别为62.07%、34.48%、3.45%,QQ、QR型在骨质疏松组与骨量低下组、正常对照组之间的基因频率存在显著性统计学差异;腰椎L1-L3、大转子的骨密度与Q89R基因型相关;未发现腰椎第四节、Ward’s三角区、股骨颈、股骨干的骨密度值与Q89R基因型具有相关性;生化指标中,血清磷含量与基因型显著相关。结论 LRP5基因Q89R位点多态性具有种族、地区差异性。LRP5基因Q89R位点基因多态性是石河子地区中老年女性骨质疏松的预测因素,提示LRP5基因是影响骨密度的候选基因之一。

东亚人群LRP5基因A1330V位点多态性与骨密度相关性的Meta分析

目的利用Meta分析的方法,综合评价LRP5基因A1330V位点多态性与东亚人群骨密度(BMD)的相关性。方法计算机检索Pubmed、Embase、中国生物医学文献数据库和万方数据库数据库等,并手工检索相关杂志,收集有关东亚人群LRP5基因A1330V位点多态性的基因型频率与BMD相关性的研究。检索时间截止至2012年11月。在评价纳入研究质量,提取有效数据后,采用Stata 12.0软件进行Meta分析。结果共11项研究符合既定的纳入和排除标准,合计5906名研究对象。Meta分析结果显示:AA基因型较AV/VV基因型腰椎BMD高,且差异有统计学意义[SMD=0.107,95%CI(0.044,0.171)]。在股骨颈BMD方面,AA基因型高于AV/VV基因型[SMD=0.190,95%CI(0.034,0.346)]。AA基因型的桡骨、全身BMD也高于AV/VV基因型。但是,AA基因型群体的转子间BMD与AV/VV基因型的差异无统计学意义[SMD=0.090,95%CI(-0.029,1.143)]。除腰椎、转子间BMD以外,AA基因型群体的股骨颈、桡骨以及全身BMD高于VV基因型,但此基因型间比较的纳入研究数量过少,证据尚不充分。结论本Meta分析结果提示,东亚人群中LRP5基因A1330V位点的突变可能与骨密度的变化具有相关性,尤其AA基因型人群在股骨颈、腰椎部位有比AV/VV或VV基因型人群更高的骨密度值。但目前的结论尚需进一步大样本、高质量的研究去验证。

小鼠Lrp5基因基本启动子分析

目的:研究小鼠Lrp5基因基本启动子。方法:PCR扩增小鼠Lrp5基因基本启动子序列,构建荧光素酶报告基因表达体系,以PRL鄄TK为内参照质粒,瞬时转染COS鄄7细胞熏48h后收集细胞测定荧光素酶相对表达活性。结果:在小鼠Lrp5基因基本启动子区域,构建了三种荧光素酶报告基因表达体系pGL3鄄16(鄄16bp～+132bp)、pGL3鄄54(鄄54bp～+132bp)和pGL3鄄103(鄄103bp～+132bp)。pGL3鄄103表达载体的相对荧光素酶活性最高;pGL3鄄54的相对荧光素酶活性是pGL3鄄103表达载体的80%;而pGL3鄄16相对荧光素酶表达活性急剧下降,与阴性对照pGL3鄄basic的活性相近,无启动子活性。结论:鄄54bp～鄄16bp区域内含有小鼠Lrp5基因转录所必需的基本启动子序列,其中三个SP1保守序列是小鼠Lrp5基因基本启动子所必需的。

高通量测序法检测胃癌患者融合基因LRP5-LITAF

目的了解胃癌发病过程中融合基因表达水平的变化,探讨其在胃癌的发病机制中的作用。方法用Illumina高通量测序仪对早期胃癌患者组织及匹配的癌旁组织进行RNA测序,以检测差异基因表达水平及结构变化。结果在胃癌组织中发现1 590个基因上调和709个基因下调;功能富集分析表明,这些差异表达基因富集于细胞周期、肿瘤侵入与扩散有关的基因实体(gene ontology,GO)注释中;且在约40%(2/5)的胃癌患者的癌组织中发现融合基因LRP5-LITAF。结论发现了胃癌发病过程中的大量差异表达基因及融合基因LRP5-LITAF,为胃癌的辅助诊断及靶向治疗提供了初步实验依据。

小鼠Lrp5基因5′端调控区域的功能

为研究小鼠低密度脂蛋白(LDL)受体相关蛋白5(LRP5)基因5′端调控序列的功能,PCR扩增小鼠Lrp5基因翻译起始位点上游3041bp(-2909bp^+132bp)DNA序列.PCR产物定向克隆到pGL3-basic载体上,重组质粒命名为pGL3-2909.以pGL3-2909质粒为模板,以不同的引物扩增出不同长短的DNA片段,分别定向克隆到含小鼠Lrp5基因基本启动子并含有荧光素酶报道基因的pGL3-103载体上,构建了12种荧光素酶报告基因表达体系:pGL3-267,pGL3-513,pGL3-535,pGL3-560,pGL3-575,pGL3-623,pGL3-645,pGL3-719,pGL3-770,pGL3-1032,pGL3-1330,pGL3-1619.以pRL-TK为内参照质粒,瞬时转染COS-7细胞,48h后收集细胞测定荧光素酶相对表达活性,pGL3-575(-2909bp^-2334bp)活性是pGL3-513(-2909bp^-2396bp)的20%,pGL3-535(-2909bp^-2374bp)的活性是pGL3-513的44%,pGL3-575的活性是pGL3-560(-2909bp^-2349bp)的48%,均有显著性差异.结果表明,在-2396bp与-2374bp之间的22bp区域内以及-2349bp与-2334bp之间的15bp区域内存在负调控元件.软件分析表明,此区域含有IK2,LYF1及MZF1调控元件.

小鼠LRP5基因负调控区分析

为研究小鼠LRP5基因-1 229 bp^-1 034 bp之间存在的负调控区,在此区域内构建了3种荧光素酶报告基因表达载体,即pGL3-1229(-1 229 bp^-914 bp),pGL3-1130(-1 130 bp^-914 bp)及pGL3-1051(-1 051 bp^-914 bp)。以PRL-TK为内参照质粒,瞬时转染COS-7,48 h后收集细胞测定荧光素酶相对表达活性。结果表明pGL3-1229质粒的相对荧光素酶活性是pGL3-1130的26%,有显著性差异。在-1 229 bp^-1 130 bp之间存在负调控元件,软件分析COUP可能是小鼠LRP5基因的负调控元件,有待进一步突变分析证实。

瑞舒伐他汀对体外培养人成骨细胞增殖及LRP5、Runx2基因表达的影响

目的观察不同浓度的瑞舒伐他汀对体外培养的人成骨细胞增殖及LRP5、Runx2基因表达的影响,探讨瑞舒伐他汀影响骨代谢可能的分子机制。方法(1)成骨细胞的培养与鉴定;(2)给予不同浓度(0、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)的瑞舒伐他汀刺激体外培养的人成骨细胞,24 h后采用CCK-8比色法检测细胞的增殖能力,用荧光定量PCR法检测LRP5、Runx2的相对表达水平。结果瑞舒伐他汀可明显促进细胞增殖(P<0.05),并促进成骨细胞LRP5、Runx2基因的表达(P<0.05),10-7M增殖最明显、基因的表达量最高。结论瑞舒伐他汀可促进成骨细胞的增殖,可能与LRP5、Runx2基因表达增加有关。

肠源性TPH1、LRP5表达及血清5-HT水平与雄性大鼠增龄性骨量丢失相关

目的观察不同月龄SD雄性大鼠十二指肠TPH1、LRP5表达水平及血清5-HT水平,分析其在增龄中的变化及增龄性骨量丢失的相关性。方法分别选取2、6、12、15和18月龄大鼠各6只,共30只,按照月龄分组以模拟增龄性模型。分别用RT-PCR法、Western blot法检测十二指肠TPH1和LRP5的mRNA和蛋白表达,用ELISA方法检测血清5-HT水平,双能骨密度仪测定大鼠离体股骨骨密度。结果十二指肠TPH1 mRNA和蛋白表达及血清5-HT水平随年龄的增长而增加,与增龄性骨量丢失呈负相关性(P<0.001)。结论肠源性5-HT及其关键合成限速酶TPH1表达在增龄性骨量丢失中发挥着重要作用,可能成为老年性骨质疏松潜在治疗干预靶。

家族性渗出性玻璃体视网膜病变一家系LRP5基因突变和临床表型分析

目的:应用高通量二代基因测序技术分析一个家族性渗出性玻璃体视网膜病变家系的基因突变情况,并对临床表型进行描述。方法:收集临床确诊为家族性渗出性玻璃体视网膜病变的先证者及其家族成员的血液样本,进行高通量二代基因测序,并通过Sanger验证,在该家系突变基因中确定致病基因突变。同时收集所有家系成员的眼底检查、眼底荧光血管造影(FFA)和家族史,对临床表型进行分析。结果:LRP5基因的一个新缺失突变c.2013delC,为该家系家族性渗出性玻璃体视网膜病变的疑似致病突变。该突变位于LRP5基因的9号外显于区域,造成该临床病例在发病早期出现严重视力下降和典型周边视网膜血管异常,同时使其家系成员出现合并永存原始玻璃体增生症的眼底改变。结论:LRP5基因的一个新缺失突变c.2013delC,可能导致临床上合并永存原始玻璃体增生症的异质性表现。扩大了LRP5基因的突变谱,对于家族性渗出性玻璃体视网膜病变的诊断、预后、遗传咨询有重要价值。

全外显子组测序揭示家族性渗出性玻璃体视网膜病变新型LRP5突变的研究

目的确定两个不相关印度家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)家系的致病性基因突变。方法对2个FEVR家系的先证者进行全外显子组测序(WES),通过Sanger测序进行验证,利用数据分析评估所有已确定的致病突变。使用双荧光素酶报告基因实验技术,探究突变对Norrin/β-catenin信号通路活性的影响。结果在2个FEVR家系中,鉴定出LRP5基因上两个新的错义突变:c.3503A>G;p.Y1168C和c.4391T>C;p.M1464T,且上述突变分别在两个FEVR家系中与疾病表型共分离。观察到上述两个LRP5基因突变均使Norrin/β-catenin信号通路活性下调。结论本研究扩展了FEVR的LRP5突变谱,为该病的分子诊断提供理论依据。

盐酸二甲双胍对人成骨细胞增殖及CollagenⅠ、LRP5mRNA表达的影响

目的观察不同浓度二甲双胍对体外培养人成骨细胞增殖、CollagenⅠ及LRP5mRNA表达的影响,探讨二甲双胍对成骨细胞作用的可能机制。方法不同浓度二甲双胍(0、25、50、100、200μmol/L)刺激体外培养人成骨细胞72 h,采用CCK-8比色法检测细胞增殖情况,用荧光定量RT-PCR法检测CollagenⅠ、LRP5mRNA表达。结果显示二甲双胍可促进其增殖(P<0.05),并促进成骨细胞CollagenⅠ及LRP5mRNA表达(P<0.05),在200μmol/L时增殖、表达最明显,呈剂量效应关系。结论二甲双胍在一定浓度范围内可促进人成骨细胞增殖,可能通过Wnt/LRP5信号通路增强CollagenⅠ及LRP5mRNA的表达来调控。

LRP5基因一个新的突变位点相关的家族性渗出性玻璃体视网膜病变

目的分析家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)一家系的临床表型和基因突变特点。方法采用家系调查研究方法,收集2019年10月于西安交通大学第一附属医院诊断为FEVR的1个汉族家系2代3名成员。对患者及其父母进行视力、眼压、裂隙灯显微镜和广角荧光素眼底血管造影(FFA)检查,采集3名成员外周血送检,应用高通量测序法筛选致病基因,针对检测出的变异位点进行Sanger测序验证,根据美国医学遗传学协会(ACMG)指南和Mutation Taster、Polyphen-2、PROVEN及REVEL软件对新发现的变异位点进行致病性分析。结果先证者,男,27岁,裸眼视力(UCVA)右眼1.0,左眼1.2,眼压正常,眼底检查可见双眼颞侧周边部视网膜血管迂曲扩张,FFA示双眼周边视网膜血管扩张成毛刷样改变并有无灌注区形成。先证者母亲51岁,最佳矫正视力(BCVA)双眼均为1.0,眼底检查可见左眼颞侧周边视网膜血管迂曲,FFA示左眼颞侧周边视网膜末梢血管荧光素渗漏。先证者父亲56岁,BCVA双眼均为1.0,眼底可见视盘周围萎缩环及豹纹状眼底,FFA未见眼底血管有明显荧光素渗漏。基因检测结果显示LRP5基因c.4110T>G(p.Cys1370Trp)和FSCN2基因c.1495G>A(p.Gly499Ser)2个新的突变位点。根据ACMG指南,c.4110T>G为临床意义未明的变异,Mutation Taster、Polyphen-2、PROVEN及REVEL软件预测该变异会对基因或基因产物造成有害影响,REVEL评分为0.93,可能为致病变异。结论LRP5基因c.4110T>G(p.Cys1370Trp)可能是引起FEVR的1个新的突变位点,丰富了LRP5基因的突变谱。

Wnt/β-catenin通路中LRP5/6在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路中低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6(LRP5/6)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义。方法:选取初发且诱导缓解治疗后达完全缓解的ALL患儿43例,治疗前作为初发组,诱导治疗后完全缓解时作为缓解组,另选取39例免疫性血小板减少症患儿作为对照组。采集初发组、缓解组、对照组患儿骨髓血各3 ml,采用qRT-PCR法检测骨髓血单个核细胞中LRP5和LRP6 mRNA的表达,Western blot法检测LRP5和LRP6蛋白的表达。依据LRP5、LRP6蛋白的表达水平,将患儿分为低表达组和高表达组,比较两组患儿的临床生物学特征。Kaplan-Meier法进行生存分析。结果:初发组LRP5、LRP6 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于缓解组及对照组(P<0.05),高危组患儿的LRP5、LRP6 mRNA及蛋白表达均明显高于中危组(P<0.05),中危组LRP5、LRP6 mRNA及蛋白表达均明显高于低危组(P<0.05)。初发组中LRP5、LRP6 mRNA及蛋白表达与危险度呈正相关(r_(LRP5 mRNA)=0.84,P<0.05;r_(LRP6 mRNA)=0.66,P<0.05;r_(LRP5 protein)=0.82,P<0.05;r_(LRP6 protein)=0.76,P<0.05)。LRP5及LRP6高表达组初发白细胞计数、乳酸脱氢酶水平显著高于低表达组(P<0.05),而其他生物学特征无明显差异。Kaplan-Meier生存分析显示43例患儿3年总生存率为(91.7±4.7)%,3年无事件生存率为(87.6±5.2)%。结论:LRP5/6高表达是儿童ALL发病机制之一,其增高程度与危险度有关。