LukS-PV通过C5aR诱导急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素亚组分(LukS-PV)是否通过C5aR发挥其诱导急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的作用。方法将THP-1细胞株分为5组:未处理细胞为对照组,使用不同浓度的C5aR拮抗剂(0、50、100、150 nmol/L)预先作用于THP-1细胞后,再使用1μmol/L LukS-PV刺激细胞为处理组。24 h后通过Annexin V/PI染色法,线粒体膜电位法检测细胞凋亡,qRT-PCR法检测凋亡相关基因,Western blot法检测凋亡相关蛋白,酶标仪法检测Caspase-3活性。结果经过不同浓度C5aR拮抗剂干预后,LukS-PV诱导THP-1细胞凋亡的比率逐渐下降,促凋亡基因Bax、Bak、Bim和促凋亡蛋白cleaved-Caspase-3、Bak、Bax的表达量也逐渐减低,抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-w、Bcl-x和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量逐渐升高,Caspase-3活性逐渐降低。结论LukS-PV可能通过结合C5aR从而激活下游线粒体通路,发挥其诱导人急性髓系白血病细胞THP-1凋亡的作用。

LukS-PV对乳腺癌细胞MAD-MB-231增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的在体外研究金黄色葡萄球菌杀白细胞素S组分(LukS-PV)对三阴乳腺癌(TNBC)细胞(MAD-MB-231)形态、增殖、周期和凋亡的影响。方法 0.25、0.5、0.75、1μmol/L LukS-PV刺激乳腺癌细胞MAD-MB-231后,利用倒置显微镜观察细胞形态的改变;用CCK-8检测LukS-PV对MAD-MB-231细胞增殖的影响;通过PI单染流式细胞术检测LukS-PV对MAD-MB-231细胞周期的改变;采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测LukS-PV对MAD-MB-231细胞凋亡的影响,利用Western blot检测Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase3)、Caspase8表达的变化。结果 LukS-PV作用MAD-MB-231后,细胞逐渐变圆,随着浓度增加,悬浮细胞增多。LukS-PV以时间和浓度依赖性的方式抑制乳腺癌细胞的增殖。LukS-PV可使MAD-MB-231周期阻滞在G1/G0期,呈浓度依赖性。LukS-PV可诱导MAD-MB-231凋亡,上调Bax、活化的caspase3(Cleved-caspase3)、活化的caspase8(Cleved-caspase8)的表达,下调Bcl-2的表达。结论 LukS-PV可抑制MAD-MB-231增殖,使其周期阻滞在G1/G0期,并诱导其凋亡。