应用Luminex xMAP液相芯片技术研究miRNAs对THP-1细胞产生细胞因子的影响

目的研究let-7e单独作用或miR-106b和miR-20a共同作用对THP-1细胞产生细胞因子的影响。方法用Cy3标记的miRNA阴性对照瞬转THP-1细胞24h、36h和48h，免疫荧光法检测其转染效率；let-7e、miR-106b及miR-20amimic分别瞬转THP-1细胞24h、36h和48h，qRT—PCR检测各miRNA表达量并筛选各miRNA的最佳转染时间；1mg／L LPS刺激各miRNA转染的THP-1细胞1h后，Luminex xMAP液相芯片技术检测THP-1细胞产生的IL-8、干扰素诱导蛋白-10（IP-10）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP—1）、IL-1d、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-α和IFN—β，并进行差异性分析。结果转染后90％以上的THP-1细胞带有红色荧光；let-7e mimic的最佳转染时间是48h，miR-106b及miR-20amimic的最佳转染时间是24h；相对于各自的对照组，let-7e mimic组IL-8、IP-10和MCP-1表达量增加，而在miR-106b和miR-20a mimic共转染组各趋化因子表达量减少。结论let-7e促进THP-1细胞中IL-8、IP-10和MCP-1的表达，miR-106b和miR-20a共同抑制它们的表达。

多种呼吸道病原微生物快速筛查技术的建立

目的解决临床急性呼吸道感染病原微生物快速筛查诊断的难题,建立一种能同时快速检测多种病原体的有效方法。方法采用多重PCR与Luminex xMAP多重分析技术平台相结合,以荧光微球为检测载体,建立快速、多重检测DNA或RNA技术平台。结果经14种(18个亚型)常见呼吸道病原微生物标准株检测,在反应体系中多重PCR产物只与相应的病原菌检测微球杂交,无非特异性反应;通过138例临床标本检测验证,肺炎患者支气管肺泡灌洗液标本中,细菌检出率占总病原微生物的37.68%,其中结核分枝杆菌占18.84%;病毒检出率占总病原微生物的44.93%,支原体、衣原体占17.39%;患者支气管肺泡灌洗液和鼻咽拭子标本中流感病毒A型的检出率分别为18.75%和26.92%。结论多重检测技术平台对急性呼吸道感染疾病的病原微生物快速检测具有实用价值,尤其在解决流行病病原学分析方面具有重要意义。

液相芯片技术的原理与应用进展

液相芯片是20世纪90年代中期发展起来的被喻为后基因组时代的新型芯片技术,具有高通量、灵活、快速、准确、重复性好、操作简便等众多优点,可用作蛋白质和核酸等生物分子的高通量检测平台。本文简要介绍其原理、优点,并对该技术在基础研究、临床诊断等方面的应用进展作一综述。

Luminex液相芯片在微生物多重检测中的应用

液相芯片作为一种新的生物芯片技术,以不同荧光编码微球作为反应及信号检测载体,流式细胞术作为光学检测手段,在液相反应体系中实现蛋白质、核酸等多种生物大分子多重检测。它既保持了生物芯片高通量的特性,又具有高速度、低成本、准确性高、重复性好、灵敏度高、线性范围广、无需洗涤、操作简便等优势。该文对此技术的原理、特点及其在疾控机构微生物多重检测中的应用进行综述。

不同时间强度冷刺激对大鼠血清中炎症相关细胞因子的影响

将170只SPF级Wistar大鼠随机分为常温对照组及冷刺激试验组,冷刺激试验组又分为急性应激组及慢性应激组。急性冷刺激时间为3、6、12、24h,慢性冷刺激时间为3、6、9、12d。试验大鼠均于人工气候室中饲养,对照组及冷刺激试验组的饲养温度分别为(24±0.05)℃和(4±0.05)℃。经不同时间强度的冷刺激后,采用心脏采血,采集大鼠血液,并分离血清,利用Luminex xMAP技术检测大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10以及IP-10的含量。结果显示,冷刺激能够提高各试验组大鼠血清中IL-6的含量,急性应激组与对照组相比TNF-α、IP-10、L-2和IL-4的含量变化水平呈上调趋势,而慢性应激组TNF-α、IL-2和IL-4的含量变化呈下调趋势,IFN-γ和IP-10的含量在冷刺激9、12d时显著增强(P<0.05)。研究结果表明,冷刺激能够引起大鼠炎症相关细胞因子以及辅助性T细胞亚群的分泌,随着应激时间的延长,细胞免疫(Th1)向体液免疫(Th2)漂移,从促炎症细胞因子(特点是IL-1和TNF-α的升高)向抗炎症细胞因子(特点是伴随IL-4和IL-10的增强)转化,机体产生细胞免疫并刺激机体产生体液免疫。

人参皂甙Rd抑制大鼠局灶性脑缺血后趋化因子CXCL1和γ-干扰素的蛋白表达

目的:研究人参皂甙Rd(Ginsenoside-Rd,GS-Rd)在大鼠局灶性脑缺血后对炎症趋化因子CXCL1和γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)的影响。方法:将SD大鼠随机分为5组:正常组(n=5),假手术组(n=5),GS-Rd对照组(n=5),大脑中动脉栓塞模型(MCAO)组(n=20),MCAO+GS-Rd组(n=20)。正常组不做任何处理;假手术组进行大脑中动脉栓塞手术,但不插入栓线;GS-Rd对照组给予腹腔注射10 mg/Kg GS-Rd,不进行手术;MCAO组(n=20)和MCAO+GS-Rd组(n=20)进行大脑中动脉栓塞手术,术后2小时拔出栓线,MCAO+GS-Rd组在术前15分钟腹腔注射10 mg/Kg GS-Rd。在12小时、1天、3天、7天四个时间点分别提取脑组织蛋白,通过液相芯片技术检测CXCL1,IFN-γ含量。结果:正常组,假手术组和GS-Rd对照组组间CXCL1,IFN-γ含量无统计学差异;与三个对照组相比,MCAO组和MCAO+GS-Rd组中CXCL1,IFN-γ蛋白含量均有明显增加(P<0.05);而与MCAO组相比,MCAO+GS-Rd组CXCL1,IFN-γ的生成明显减少(P<0.05)。结论:10 mg/Kg GS-Rd预处理可有效抑制大鼠短暂性脑缺血后CXCL1,IFN-γ的生成;通过抑制炎症反应,GS-Rd可能在神经保护中发挥重要的作用。

采用液相芯片技术检测肾移植术前致敏受者抗HLA抗体的初筛漏检情况分析

目的探讨采用液相芯片技术的两种方法检测抗HLA抗体，比较两者检出率的差异，并分析初筛的漏检情况。方法收集2015年9月至2016年4月214例肾移植术前有致敏史受者的血清样本，经Luminex xMAP平台应用混合抗原试剂（初筛试剂）LABScreen Mixed（LM）和单一抗原试剂（特异性检测试剂）LABSreen Single Antigen（LSA）检测抗HLA抗体。结果LM法检测抗HLA-Ⅰ类抗体和抗HLA-Ⅱ类抗体的阳性率分别为50.9%和23.4%，LSA法检测阳性率分别为58.9%和46.7%，LM法检测抗HLA抗体的阳性率低于LSA法，且差异均具有统计学意义（P〈0.05）。LM法检测抗HLA-Ⅰ类抗体的灵敏度为80.2%，特异度为90.9%，漏检率为19.8%，误检率为9.1%，漏检频率最高的是Cw＊17：01、B＊15：12和B＊45：01，最高平均荧光强度（MFI）值为10603；检测抗HLA-Ⅱ类抗体的灵敏度为49.0%，特异度为99.1%，漏检率为51.0%，误检率为0.9%，漏检频率最高的是DPA1＊01：03, DPB1＊06：01和DPA1＊01：03, DPB1＊01：01，最高MFI值为3659。对于仅有输血史或妊娠史患者，两种方法检测抗HLA-Ⅰ类抗体时差异无统计学意义；而检测抗HLA-Ⅱ类抗体时的差异具有统计学意义（P〈0.05）。对于既有输血史又有妊娠史患者，LM法和LSA法检测两类抗HLA抗体的差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论LM法敏感性低于LSA法，且检测抗HLA-Ⅰ类抗体的漏检率低于抗HLA-Ⅱ类抗体。临床将LM法作为诊断性初筛实验存在一定弊端，建议对于有致敏史的患者，宜采用LSA法检测抗HLA抗体，通过LSA法可为临床提供更准确的抗HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体信息。

五种重要致病性弧菌高通量液相芯片检测方法的建立

为建立一种快速、准确同时检测5种致病性弧菌的高通量液相芯片技术,本研究针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌的10个目的基因,包括5个种特异性基因和5个毒力基因,分别设计特异性引物和探针,多重PCR扩增后的产物与偶联有不同核酸探针的微球混合物进行杂交反应,利用液相芯片检测仪分析结果。结果显示,本方法同时检测这5种致病性弧菌时,检出限最高达到1.8×10^(2)CFU/mL;检测包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、河流弧菌、沙门菌、李斯特杆菌和铜绿杆菌等常见细菌时,均无交叉反应,表明特异性好;检测不同批次的样品时,变异系数均小于8%,表明重复性良好。本研究建立的液相芯片检测方法能够快速同时检测这5种致病性弧菌,具有高通量、灵敏性高、重复性好、可控性强、节省样本和时间等优点,对水产品中多种重要致病性弧菌的检测和流行病学调查提供了技术支持。

应用液相芯片技术观察脐带间充质干细胞对T细胞分泌的改变

实验分为三组,即脐带间充质干细胞(UC-MSCs)组、脐血T细胞组和UC-MSCs与脐血T细胞的共培养组。采用液相芯片技术检测三组细胞培养上清液中细胞因子的分泌量。检测P1~P8代UC-MSCs14种细胞因子的分泌量,实验得知P6代UC-MSCs细胞因子分泌量较高。利用P6代细胞建立不同比例的共培养体系,检测与抗炎和促炎相关的五种细胞因子表达量。共培养组与对照组相比抗炎细胞因子白细胞介素-4和白细胞介素-10的分泌量显著增加(P<0.05),促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α和干扰素γ的分泌量显著减少(P<0.05),且脐血T细胞与UC-MSCs比值为10∶1以上比例时分泌量变化更显著(P<0.05)。共培养组中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子分泌量不受UC-MSCs存在的影响。

悬浮阵列技术在结核分枝杆菌检测中的研究进展

悬浮阵列技术(Luminex x MAP技术)是一种将编码微球捕获特定检测物的抗原、抗体或核酸探针等分子的有效方法。本文综述了结核分枝杆菌检测的研究进展,探讨以结核分枝杆菌的Rpo B基因和CYP141基因为靶标应用Luminex x MAP技术,构筑悬浮阵列体系,建立一种快速、灵敏、特异的方法,实现结核分枝杆菌及其耐药基因联合检测,拓展出一条更为经济、迅速、便捷的结核分枝杆菌快速检测新路径。