目的鉴定人肺特异性X蛋白(lung specific X protein,LUNX)基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段(E1:+3770~+3959bp;E2:+6454~+6555bp;E3:+14553~+14652bp),通过荧光素酶报告基...目的鉴定人肺特异性X蛋白(lung specific X protein,LUNX)基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段(E1:+3770~+3959bp;E2:+6454~+6555bp;E3:+14553~+14652bp),通过荧光素酶报告基因表达体系检测转录活性。结果 PCR产物经测序证实后,分别定向连接至pGL3-Promoter载体中报告基因启动子上游的Kpn I和Xho I酶切位点和报告基因下游的BamHI和Sal I酶切位点上,经酶切鉴定后,构建了6种荧光素酶报告基因表达体系。以pSV-β-Galactosidase质粒为内对照,瞬时转染HEK293细胞,培养48h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性。当3个DNA片段位于报告基因启动子上游时,均不具有增强转录的能力。将它们分别连接于报告基因下游时,E1和E3所调控的荧光素酶活性分别是对照pGL3-Promoter的2.83倍(P<0.05)和1.59倍(P<0.05)。结论 LUNX基因的+3770~+3959bp和+14553~+14652bp序列具有增强转录的能力,为LUNX表达调控机制的深入研究奠定了基础。展开更多
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)行肺癌根治术患者的外周血LUNX m RNA表达,及其对判断预后的价值。方法选择2013年3月至2014年3月于我科住院治疗的NSCLC患者共200例,用Trizol法提取其外周血总RNA,并进行逆转录及PCR扩增和荧光测定PCR反应,...目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)行肺癌根治术患者的外周血LUNX m RNA表达,及其对判断预后的价值。方法选择2013年3月至2014年3月于我科住院治疗的NSCLC患者共200例,用Trizol法提取其外周血总RNA,并进行逆转录及PCR扩增和荧光测定PCR反应,术后随访其复发及转移的情况。结果 142例外周血LUNX表达阳性者复发98例,复发率为69.0%;58例外周血LUNX表达阴性者复发8例,复发率为13.8%,明显低于外周血LUNX表达阳性者复发的比例,差异有统计学意义,P<0.05。结论 NSCLC患者外周血中LUNX阳性者,其复发率高、预后较差。展开更多
文摘目的鉴定人肺特异性X蛋白(lung specific X protein,LUNX)基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段(E1:+3770~+3959bp;E2:+6454~+6555bp;E3:+14553~+14652bp),通过荧光素酶报告基因表达体系检测转录活性。结果 PCR产物经测序证实后,分别定向连接至pGL3-Promoter载体中报告基因启动子上游的Kpn I和Xho I酶切位点和报告基因下游的BamHI和Sal I酶切位点上,经酶切鉴定后,构建了6种荧光素酶报告基因表达体系。以pSV-β-Galactosidase质粒为内对照,瞬时转染HEK293细胞,培养48h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性。当3个DNA片段位于报告基因启动子上游时,均不具有增强转录的能力。将它们分别连接于报告基因下游时,E1和E3所调控的荧光素酶活性分别是对照pGL3-Promoter的2.83倍(P<0.05)和1.59倍(P<0.05)。结论 LUNX基因的+3770~+3959bp和+14553~+14652bp序列具有增强转录的能力,为LUNX表达调控机制的深入研究奠定了基础。
文摘目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)行肺癌根治术患者的外周血LUNX m RNA表达,及其对判断预后的价值。方法选择2013年3月至2014年3月于我科住院治疗的NSCLC患者共200例,用Trizol法提取其外周血总RNA,并进行逆转录及PCR扩增和荧光测定PCR反应,术后随访其复发及转移的情况。结果 142例外周血LUNX表达阳性者复发98例,复发率为69.0%;58例外周血LUNX表达阴性者复发8例,复发率为13.8%,明显低于外周血LUNX表达阳性者复发的比例,差异有统计学意义,P<0.05。结论 NSCLC患者外周血中LUNX阳性者,其复发率高、预后较差。