六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全模型小鼠的分子机制

背景:在临床上,大多数治疗早发性卵巢功能不全的方剂均以六味地黄丸为基础方演变而来,并且取得了较好的疗效。目前对六味地黄丸的实验研究大多为体内动物模型的形态学观察及生理生化指标的检测,而分子机制方面的研究报道较少。目的:探讨六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全的分子作用机制。方法:环磷酰胺120 mg/kg联合白消安12 mg/kg腹腔注射制备早发性卵巢功能不全小鼠模型,然后用六味地黄丸混悬液对早发性卵巢功能不全小鼠进行干预,干预12周采用ELISA法检测小鼠血清中促卵泡刺激素、促黄体生成素、雌激素、抗苗勒氏管激素、8-羟脱氧鸟苷、总抗氧化能力、活性氧水平;苏木精-伊红染色观察小鼠卵巢形态学改变;透射电镜观察小鼠卵泡颗粒细胞超微结构及颗粒细胞线粒体的凋亡情况;免疫组化法检测六味地黄丸对小鼠卵巢颗粒细胞中核受体转录辅激活因子(receptor gamma coactivator-1 alpha,PGC-1α)、线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,TFAM)的表达水平。结果与结论:①与模型组比较,实验组小鼠血清促卵泡刺激素、促黄体生成素、活性氧、8-羟脱氧鸟苷水平降低(P<0.05),雌激素、抗苗勒氏管激素、总抗氧化能力水平升高(P<0.05);②苏木精-伊红染色发现模型组小鼠卵巢组织中闭锁卵泡和黄体较多,个别可见次级卵泡,间质纤维化增生;实验组小鼠卵巢组织可见大量闭锁卵泡,黄体较少,边缘可见原始卵泡,次级卵泡较少,未见明显成熟卵泡;③透射电镜发现实验组小鼠卵巢颗粒细胞内细胞器较完整;④免疫组化结果显示,实验组小鼠卵巢组织PGC-1α的表达水平在第4周稍有升高至第8,12周无明显变化,与模型组有明显差异;实验组小鼠卵巢组织TFAM的表达水平在第4周时短暂升高,然后稍有所下降,但结果均与模型组有明显差异;⑤结果表明,六味地黄丸通过PGC-1α-TFAM-ROS信号通路在一定程度上抑制早发性卵巢功能不全小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,从而改善卵巢的内分泌功能,提高机体抗氧化能力,减轻氧化应激损伤程度。

六味地黄汤对老化模型大鼠视网膜组织铁死亡通路的影响

目的:观察六味地黄汤对老化模型大鼠视网膜组织中铁蛋白、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达水平的影响。方法:将45只SD大鼠随机分成空白组、模型组、中药组,各15只。空白组腹腔注射生理盐水,模型组、中药组腹腔注射D-半乳糖[500 mg/(kg·d)],同时,中药组灌服六味地黄汤[6.75 g/(kg·d)],空白组、模型组灌服等体积生理盐水,连续8 wk。检测各组大鼠视网膜组织中铁蛋白、SLC7A11、GSH、GPX4的表达水平。结果:模型组较空白组大鼠视网膜组织中铁蛋白表达增高(P<0.05),GSH、SLC7A11、GPX4表达降低(P<0.05)。中药组较模型组大鼠视网膜组织中GSH、SLC7A11、GPX4表达增高(P<0.05)。结论:六味地黄汤可能通过调控铁死亡途径发挥延缓视网膜老化的作用。

六味地黄汤对阿霉素肾病小鼠尿蛋白及肾小球p-p38 MAPK、α-actinin-4、synaptopodin的影响

目的探讨六味地黄汤对阿霉素肾病(adriamycin nephropaghy,ADRN)小鼠尿蛋白的干预作用及可能机制。方法30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机选取5只为空白组,余下小鼠以单次尾静脉注射阿霉素(0.01 g·kg^(-1))复制ADRN模型,2周后将造模成功的小鼠随机分为模型组、贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组,每组5只。空白组、模型组予等体积注射用水灌胃,贝那普利组予0.0013 g·kg^(-1)贝那普利灌胃,低、中、高剂量六味地黄汤组分别予9.75、19.5、39 g·kg^(-1)六味地黄汤灌胃,每日1次,连续8周。自动生化仪检测小鼠24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清钾;HE染色法、电镜观察小鼠肾脏病理改变及足突形态;免疫组织化学法、Western bolt检测小鼠肾脏磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)、α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、突触孔蛋白(synaptopodin)的表达;RT-PCR检测小鼠肾脏α-actinin-4、synaptopodin mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、24 h尿量、血清白蛋白降低,24 h尿蛋白定量升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增生,部分系膜区扩大、肾小管蛋白管型,间质可见炎性细胞浸润,足突广泛融合;α-actinin-4蛋白及mRNA、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),synaptopodin蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,各干预组病理改变及足突融合均得到不同程度改善,贝那普利组及中、高剂量六味地黄汤组24 h尿蛋白定量减少,高剂量六味地黄汤组p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),低、中、高剂量六味地黄汤组synaptopodin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组组间比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论六味地黄汤可能通过抑制p38 MAPK通路活化和上调α-actinin-4、synaptopodin蛋白及mRNA表达,改善肾脏病理及足突融合,减轻足细胞损伤,减少ADRN小鼠尿蛋白。

六味地黄汤调控TGF-β及Smad家族蛋白表达对肾间质纤维化的影响研究

目的探究六味地黄汤抑制肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的干预作用及机制。方法将30只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、阳性药物组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左侧输尿管结扎术制备RIF模型。造模结束后,假手术组和模型组予以蒸馏水灌胃,阳性药物组予以醋酸泼尼松片0.2 mg/kg灌胃,中药低、高剂量组分别予以六味地黄汤0.5、1 mg/kg灌胃,疗程为21 d。治疗结束后,采用HE染色法评估肾间质损伤,Masson染色法检测肾间质胶原蛋白沉积和纤维化,RT-PCR测定肾间质转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、针对半身不遂同源物2的重组母体(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2)、Smad3、Smad7的mRNA表达,Western blot测定肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组的病理呈现系膜增生、间质增宽、胶原蛋白大面积沉积和明显纤维化,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。与模型组相比,阳性药物组和中药低、高剂量组的病理表现均减轻,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与中药低剂量组相比,阳性药物组和中药高剂量组的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论六味地黄汤能够减轻RIF大鼠的肾间质纤维化程度,且高剂量效果更佳,其机制可能与调控TGF-β及Smad家族蛋白表达有关。

针灸联合六味地黄丸序贯治疗肾精亏虚型早发性卵巢功能不全临床观察

目的探究针灸联合六味地黄丸序贯治疗对肾精亏虚型早发性卵巢功能不全(POI)的临床效果。方法将63例POI患者纳入试验,于月经期、经后期口服六味地黄丸,排卵期、经前期行灸法序贯治疗,针刺治疗贯穿后三期,隔日1次,每周治疗3次;连续治疗3个月经周期。观察序贯治疗对患者促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平及中医证候积分的影响。结果治疗3个月后,患者E2增高,FSH、LH均降低,中医证候得到有效改善(P<0.05)。结论采用针灸联合六味地黄丸序贯治疗肾精亏虚型POI,能较好地改善性激素水平及临床症状,且具有良好安全性。

六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的效果分析

目的:分析六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的效果及对牙龈指数(GI)、探针深度(PD)的影响。方法:选取2021年1月-2022年1月广州市胸科医院诊治的慢性牙周炎患者86例作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和联合组,各43例。两组患者均采用常规治疗,对照组在此基础上局部应用大黄液治疗,联合组在对照组基础上给予六味地黄丸治疗。比较两组临床疗效、中医证候积分、牙周健康指标和炎性因子水平。结果:联合组临床疗效总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.044)。治疗后,两组牙齿松动、肢体沉重、牙龈红肿、胸闷口苦、反复咽痛评分均下降,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组GI和PD均下降,联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β水平均下降,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的临床效果显著,可有效改善患者中医证候积分和牙周健康指标,降低炎性因子水平。

消渴丸联合六味地黄丸治疗2型气阴两虚糖尿病的临床效果观察

目的:本文主要探究2型气阴两虚糖尿病患者联合采取消渴丸与六味地黄丸的临床效果。方法:随机选取我院2022年2月—2023年2月收录的74例2型气阴两虚糖尿病患者作为研究样本,依据计算机表法将患者均等分为37例对照组(消渴丸治疗)、37例实验组(消渴丸+六味地黄丸治疗),对比指标:(1)血糖水平。(2)临床治疗有效率。结果:血糖水平:治疗前两组患者空腹血糖值、餐后2h血糖值经对比无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者空腹血糖值、餐后2h血糖值经对比有统计学意义(P<0.05)。临床治疗有效率:实验组指标数值显著高于对照组(P<0.05)。结论:2型气阴两虚糖尿病患者采取消渴丸联合六味地黄丸治疗方案,可有效降低患者的血糖水平,快速缓解患者由高血糖所致的不适症状,提高临床治疗效果。

基于网络药理学及分子对接探讨六味地黄汤治疗原发性干燥综合征的作用机制

目的 探讨六味地黄汤治疗原发性干燥综合征(primary sjogren’s syndrome, pSS)的作用机制。方法 使用公共数据库平台TCMSP、GeneCards、DrugBank、PHARMGKB、OMIM和TTD对六味地黄汤组成药物的活性成分、作用靶点及PSS的疾病靶标进行检索,将药物成分靶点与疾病靶标取交集得到六味地黄汤治疗pSS的潜在靶点;使用STRING 11.5数据库获得六味地黄汤治疗PSS的蛋白互作网络(PPI),并通过Cytoscape 3.7.2软件分析得到核心靶点;通过基因本体(GO)富集分析、基因组百科全书(KEGG)通路富集分析筛选差异生物过程及靶点通路;使用Auto Dock 1.5.6及Pymol 2.2.0软件进行分子对接,验证核心靶点与活性成分之间的亲和力。结果 筛选得到六味地黄汤的药物活性成分74个,作用靶点184个,PSS疾病相关靶点1161个,药物-疾病交集靶点69个。数据分析显示,六味地黄汤的主要活性成分包括槲皮素、山柰酚、豆甾醇、海风藤酮和薯蓣皂苷元,六味地黄汤治疗pSS的8个核心靶点包括AKT1、CASP3、JUN、MMP9、NFKBIA、TP53、VEGFA。GO富集主要涉及脂多糖、氧化应激、活性氧代谢等生物过程。KEGG富集主要涉及抗炎、氧化应激等相关通路。分子对接结果显示,8个核心靶点与相应的活性成分的结合能均≤-5 kcal/mol,其中槲皮素与8个核心靶点均能较好地结合,可能是六味地黄汤干预pSS的主要有效成分。结论 六味地黄汤可能通过作用于AKT1、CASP3、JUN、MMP9、NFKBIA、TP53、VEGFA、IL-1β等关键靶点,通过“IL-17信号通路”“Th17细胞分化”“HIF-1信号通路”等发挥抗炎、免疫调节、抗氧化应激的作用,其中槲皮素可能是其发挥作用的主要有效成分。

六味地黄丸调节肠道微生物组平衡抑制卵巢早衰小鼠的氧化应激

背景:研究表明,卵巢早衰患者肠道菌群结构发生变化,肠道菌群失调可能是卵巢早衰发生的重要机制之一。目的:探讨六味地黄丸对环磷酰胺诱导卵巢早衰小鼠氧化应激和肠道微生物群的影响。方法:45只雌性ICR小鼠随机分为3组:空白组(正常小鼠)、模型组(卵巢早衰小鼠)、六味地黄丸组,后2组小鼠一次性腹腔注射环磷酰胺(120 mg/kg)制备卵巢早衰小鼠模型,造模成功后六味地黄丸组小鼠连续灌胃六味地黄丸(1.56 g/kg)28 d,其余2组灌胃等量生理盐水28 d,灌胃结束后取材。每周记录小鼠体质量,计算卵巢指数,苏木精-伊红染色观察小鼠卵泡的发育情况,ELISA法检测血清抗苗勒管激素、雌二醇、促卵泡激素、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和丙二醛水平,并通过16S rDNA测序检测所有小鼠的肠道微生物组。结果与结论:(1)模型组小鼠的毛发疏松,活力及抓力下降,体质量几乎无增长,卵巢指数下降;六味地黄丸治疗后小鼠的体质量高于模型组,卵巢指数也随之升高(P<0.05)。(2)模型组小鼠动情周期紊乱;六味地黄丸能恢复卵巢早衰小鼠的发情周期,减少闭锁卵泡数量。(3)模型组小鼠血清中促卵泡激素、丙二醛水平显著升高(P<0.01),血清雌二醇、抗苗勒管激素、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平显著下降(P<0.01);六味地黄丸组小鼠血清促卵泡激素、丙二醛水平显著降低(P<0.01),雌二醇、抗苗勒管激素、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平升高。(4)根据16S rDNA测序结果,六味地黄丸可调控肠道微生物群的丰度和多样性,可增加有益菌的相对丰度,KEGG通路分析显示,肠道微生物群与代谢途径、次生代谢产物的生物合成、不同环境中的微生物代谢、氨基酸的生物合成等通路受六味地黄丸的调控。(5)结论:肠道微生物组的改变可能是六味地黄丸治疗卵巢早衰的潜在机制之一。六味地黄丸能调节肠道微生物组结构,增加有益菌数量,减少有害菌数量,从而改善肠道微生态平衡。这种调节作用有助于降低氧化应激水平,进一步抑制卵巢早衰小鼠卵巢氧化应激。

六味地黄汤治疗细菌性阴道病的疗效及对阴道菌群和免疫功能的影响

目的 观察六味地黄汤治疗细菌性阴道病的疗效及对阴道菌群和免疫功能的影响。方法 选取2021年10月—2023年10月于泉州市中医院门诊就诊的细菌性阴道病患者95例,依照双盲法将患者随机分为试验组47例和对照组48例。对照组采用替硝唑栓治疗,试验组在对照组治疗的基础上采用六味地黄汤治疗,7 d为1个疗程,2组均治疗3个疗程。比较2组治疗效果、临床症状消失时间,治疗前后阴道菌群、阴道微生态情况及免疫功能指标。结果 试验组总有效率为95.74%,高于对照组的81.25%(χ^(2)=4.873,P=0.027);试验组白带异常、外阴瘙痒、阴道疼痛消失时间短于对照组(P<0.01)。治疗3个疗程后,2组阴道乳杆菌数量及阴道pH值≤4.5者占比和乳杆菌占优势者占比高于治疗前,肠杆菌、类杆菌及支原体、白色念珠菌数量少于治疗前,白介素-12、γ-干扰素水平低于治疗前,且试验组变化幅度大于对照组(P<0.01)。结论 六味地黄汤治疗细菌性阴道病临床治疗效果较好,可加速症状缓解,平衡阴道内酸碱度,促进患者阴道内有益菌的生长,同时能够调节免疫功能,增强患者的抵抗力,加速疾病痊愈。

丹荷六味地黄汤对绝经后NAFLD患者脂代谢及心理状态评分的影响

目的:探讨丹荷六味地黄汤对绝经后非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者脂代谢及心理状态评分的影响。方法:选取2021年12月至2022年12月河南中医药大学第一附属医院收治的绝经后NAFLD患者68例,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组34例。观察组给予丹荷六味地黄汤,对照组给予维生素E软胶囊,2周为1个治疗周期,对比两组患者治疗6个周期后的肝功能、脂代谢、雌激素E2、脂肪变和肝纤维化评分、改良Kupperman评分、焦虑自评量表评分(SAS)、自评抑郁量表评分(SDS)及不良反应。结果:治疗6个周期后,观察组患者总有效率88.2%,高于对照组的65.6%(P<0.05)。观察组患者BMI、腰围减少,ALT、AST、GGT、TG、TC、HDL、LDL、游离脂肪酸、雌激素E2水平改善,肝硬度指数(CAP)、肝硬度值(LSM)、APRI值降低,改良Kupperman评分、SAS和SDS降低均优于对照组(P<0.05)。结论:丹荷六味地黄汤治疗绝经后NAFLD疗效确切,具有改善肝功能、脂代谢、雌激素水平,减少肝脂肪变和纤维化评分的作用,且对绝经后NAFLD患者的心理状态具有一定调节作用。

基于网络药理学和分子对接探讨六味地黄丸异病同治老年性聋和阿尔茨海默病的作用机制

目的借助网络药理学和分子对接的方法探讨六味地黄丸异病同治老年性聋和阿尔茨海默病(AD)的共同分子机制,并采用细胞实验进行验证。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、成分靶点数据库(SwissADME)获取六味地黄丸有效成分,并结合基因和化学物质相互作用预测数据库(STITCH)获取作用靶点。利用人类基因综合数据库(Genecard)、人类疾病相关基因与突变位点信息数据库(DisGeNET)获取老年性聋和AD靶点。使用Cytoscape 3.7.1软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络,借助蛋白互作网络分析数据库(STRING)构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,获取核心靶点。利用富集分析数据平台(Metascape)对共有靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。采用AutoDock Vina 1.1.2软件对核心靶点与相关成分进行分子对接。采用过氧化氢(H2O2)致PC12细胞氧化损伤模型,观察六味地黄丸的作用。采用细胞计数(CCK-8)法观察细胞存活率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化-蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果共获得六味地黄丸有效成分86种,主要来自薯蓣皂素、视黄醇、丹皮酚、软脂酸等化合物,六味地黄丸防治老年性聋和AD共有靶点49个,核心靶点为AKT1、TNF、IL-6、MMP-9等。GO分析表明这些共有靶点主要参与对氧化应激的反应、对脂多糖的反应等生物进程。KEGG通路分析显示,共有靶点主要涉及缺氧诱导因子-1(HIF-1)、核因子-κB(NF-κB)等信号通路。分子对接结果显示,TNF-α、IL-6、AKT1、MMP-9与相关成分均存在结合可能。细胞实验结果发现,六味地黄丸含药血清可以增强细胞存活率,降低细胞ROS、TNF-α、IL-6水平,增加MMP-9蛋白表达水平,降低p-AKT蛋白表达水平。结论六味地黄丸异病同治老年性聋和AD具有物质基础,其共同的分子机制,可能是通过薯蓣皂素、视黄醇、丹皮酚等多种成分,作用于AKT、TNF-α、IL-6、MMP-9等核心靶点,抑制炎症反应和氧化应激,减少神经元死亡。

六味地黄丸对阿尔茨海默病秀丽隐杆线虫模型的神经保护作用

目的 从线粒体功能损伤角度探讨六味地黄丸提取物对阿尔茨海默病(AD)秀丽隐杆线虫(C.elegans)模型的神经保护作用。方法 以C.elegans为模式生物,实验分为空白组(CL2122型)、模型组(CL2355型)、阳性药组(CL2355型,50 mmol/L二甲双胍)和六味地黄丸低、中、高剂量组(CL2355型,0.5、1.0、2.0 mg/mL)。通过行为学方法观察线虫的学习记忆能力,Western blot法检测线虫体内磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达,RT-qPCR法检测paqr-1、aak-1、sir-2.1 mRNA表达。结果 六味地黄丸提取物提高了模型组线虫的化学趋向性(P<0.01),并显著改善其学习记忆能力。与空白组比较,模型组p-AMPK和SIRT1蛋白表达降低(P<0.01),aak-1、sir-2.1、paqr-1 mRNA表达降低(P<0.01);与模型组比较,阳性药组和六味地黄丸中、高剂量组p-AMPK和SIRT1蛋白表达升高(P<0.01),aak-1、sir-2.1、paqr-1 mRNA表达升高(P<0.01)。结论 六味地黄丸通过增强AD模型线虫脂联素受体1(AdipoR1)表达,激活AMPK/SIRT1信号通路改善中枢神经线粒体功能,修复神经元损伤,从而发挥对AD模型线虫的神经保护作用。

六味地黄丸对钛颗粒诱导骨溶解成骨影响的机制

背景:目前已有大量研究发现六味地黄丸可用来治疗骨质疏松,而鲜有关于六味地黄丸对磨损微粒诱导的成骨细胞分化与矿化方面的相关研究。目的:探讨不同浓度六味地黄丸含药血清对钛颗粒诱导的小鼠MC3T3-E1成骨细胞体外骨溶解模型的积极作用。方法:大鼠口服六味地黄丸后提取含药血清,筛选六味地黄丸含药血清和钛颗粒对MC3T3-E1细胞活力影响的最佳浓度。将MC3T3-E1细胞为3组:空白组给予成骨分化培养;模型组给予钛颗粒(5μg/mL)+成骨分化培养;加含药血清组给予钛颗粒(5μg/mL)+六味地黄丸含药血清(分为10%,15%,20%剂量)共培养+成骨诱导。通过CCK-8法检测成骨细胞活力,碱性磷酸酶染色检测细胞碱性磷酸酶活性,通过硝酸银(Von Kossa)和茜素红染色检测细胞矿化情况,qRT-PCR检测成骨分化相关基因Runx-2、Osterix、Ocn、Axin、ALP和Opn的表达,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、p-GSK-3β、GSK-3β、Runx2和Osterix蛋白表达。结果与结论:①六味地黄丸含药血清培养可以逆转钛颗粒诱导的MC3T3E-1细胞碱性磷酸酶活性的降低,增加MC3T3E-1细胞茜素红染色及钙化结节,增加MC3T3E-1细胞成骨相关基因的表达,同时提高Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。②结果说明,六味地黄丸含药血清体外可以逆转钛颗粒对成骨细胞分化矿化的抑制作用,上调成骨相关基因的表达,其机制与调控Wnt/β-catenin信号通路相关,提示六味地黄丸有望成为防治人工关节无菌性松动的有效药物。

六味地黄丸通过干预缝隙连接通讯功能调控树突状细胞抗原交叉提呈能力研究

【目的】探讨六味地黄丸是否通过提高缝隙连接通讯功能(GJIC)增强树突状细胞(DC)抗原交叉提呈能力,并对其机制进行相关探索。【方法】采用Western Blot实验、免疫荧光法观察六味地黄丸含药血清对黑色素瘤细胞(B16)缝隙连接蛋白43(Cx43)表达及膜定位的影响;采用钙黄绿素(Ca-AM)/DiI荧光示踪实验观察六味地黄丸含药血清对B16细胞GJIC功能的影响;采用流式细胞术观察GJIC在六味地黄丸含药血清增强DC抗原提呈能力中的作用;采用碘化丙啶(PI)/Hoechst染色实验观察CD8+T淋巴细胞的免疫杀伤效果。【结果】Western Blot及免疫荧光实验结果显示,六味地黄丸含药血清上调Cx43表达;荧光示踪实验证明,六味地黄丸含药血清显著增强B16细胞GJIC功能;流式细胞术分析表明,六味地黄丸含药血清增强DC抗原提呈能力;PI/Hoechst染色结果显示,六味地黄丸含药血清干预B16-OVA后CD8+T细胞的免疫杀伤效果更加显著。【结论】六味地黄丸通过上调黑色素瘤细胞Cx43表达,改善GJIC功能,进而增强DC的交叉提呈能力,从而激活更强的CD8+T细胞免疫杀伤反应。

基于网络药理学结合动物实验探究六味地黄丸治疗孤独症谱系障碍的作用机制

目的采用网络药理学、分子对接技术结合动物实验探究六味地黄丸治疗孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)的潜在作用机制。方法通过TCMSP数据库获取六味地黄丸的有效活性成分及对应的靶基因信息,通过GeneCards、OMIM、DrugBank数据库获取ASD疾病靶基因;将上述靶基因用韦恩图取交集后再用STRING数据库构建关键靶点PPI网络;用Metascape数据库对关键靶点进行GO功能和KEGG信号通路富集分析;用Autodock软件对核心靶点及六味地黄丸有效成分进行分子对接。动物实验验证:选用8只SPF级SD孕鼠,随机分为空白孕鼠组(1只)及模型孕鼠组(7只),采用腹腔注射丙戊酸钠(valproate,VPA)造模。筛选符合ASD疾病模型的30只雄性仔鼠,随机分为模型对照组,维生素D组和中药高、中、低剂量组;同样筛选出空白仔鼠,为空白组,每组6只。中药低、中、高剂量组分别予六味地黄丸悬浮液0.75、1.5、3 g/kg灌胃;维生素D组予维生素D滴剂1480 IU/kg灌胃;模型组、空白组予等量生理盐水灌胃。均干预1次/d,连续干预2周。采用三箱社交实验、旷场实验评估大鼠社交情况;ELISA检测各组仔鼠海马体糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)、β-连环蛋白(β-Catenin)水平;Western blot检测各组仔鼠海马体中β-Catenin、髓细胞增生原癌基因(cellular myelocytomatosis oncogene,c-Myc)、细胞周期蛋白D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)蛋白表达水平。结果从六味地黄丸中筛选共得到74个活性成分及205个药物靶基因,3903个ASD疾病靶基因,127个关键靶点及蛋白激酶Bα(protein kinase Bα,Akt1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因(tumor necrosis factor,TNF)等核心靶点。GO功能富集显示主要作用于有机氮原化合物的细胞反应、突触后膜、突触后神经递质受体活动等,KEGG通路富集显示调控TNF、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、Wnt等信号通路。分子对接结果显示,六味地黄丸中的有效成分可与核心蛋白Akt1结构稳定。动物实验结果显示,在社交能力测试阶段,模型组、维生素D组及中药低、中、高剂量组仔鼠接触陌生鼠1的时间均短于空白组(P<0.05);给药2周后,维生素D组及中药低、中、高剂量组接触陌生鼠1的时间延长(P<0.05)。在社交新颖性测试阶段,模型组、维生素D组和中药低、中、高剂量组仔鼠接触陌生鼠2的时间短于较空白组(P<0.05);给药2周后,维生素D组及中药低、中、高剂量组接触陌生鼠2的时间延长(P<0.05)。矿场实验结果提示,治疗后,中药低、中剂量组活动总路程及中央区域活动路程均增加(P<0.05),维生素D组、中药高剂量组活动总路程增加(P<0.05)。与模型组比较,维生素D组及中药低、中、高剂量组GSK-3β水平升高(P<0.05),β-Catenin水平降低(P<0.05),β-Catenin、c-Myc蛋白表达减少(P<0.05);中药低剂量组Cyclin D1蛋白表达减少(P<0.05)。结论六味地黄丸可有效调控Wnt信号通路,改善VPA诱导的ASD仔鼠社交行为、焦虑状态。

超量服用六味地黄丸致罕见不良事件病例分析

该院2019年10月31日收治1例服用大剂量六味地黄丸后出现心、肾功能损害患者,应用临床药学专业知识,从六味地黄丸的成分及患者所患基础疾病方面进行分析,表明六味地黄丸成分中的泽泻具有肾毒性,酒萸肉含有机酸,大剂量服用可能出现中毒。六味地黄丸并不是人们所认为的安全、无毒,临床应用中应告知患者避免随意服用,提高公众对六味地黄丸安全性的认识,避免不良事件的发生。

基于BDNF/TrkB/CREB通路研究六味地黄丸对丙戊酸钠诱导的孤独症谱系障碍模型仔鼠的作用机制

目的基于脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)通路,探讨六味地黄丸对丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)诱导的孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)仔鼠的作用机制。方法将13只SD孕鼠随机分为两组,其中10只孕鼠在第12.5天时腹腔注射VPA溶液(600 mg·kg^(-1))为VPA组,另外3只孕鼠注射等体积生理盐水为对照组。第21天对两组雄性仔鼠开展行为学检测,筛选出符合ASD疾病模型的仔鼠30只,随机分为模型组(等体积生理盐水),维生素D组(1480 IU·kg^(-1)),六味地黄丸高(3 g·kg^(-1))、中(1.5 g·kg^(-1))、低(0.75 g·kg^(-1))剂量组,每组6只。正常雄性仔鼠6只,设为空白组(等体积生理盐水)。各组仔鼠连续灌胃14 d,1次/d,给药后再次开展行为学检测。尼氏染色观察各组仔鼠海马组织神经元形态学变化,比色法检测各组仔鼠海马组织中谷氨酸(glutamic acid,GLU)、γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)含量;qRT-PCR检测各组仔鼠海马组织中BDNF、TrkB、CREB mRNA相对表达。结果与对照组比较,VPA组仔鼠体质量、身长、尾长更小(P<0.05)。与空白组比较,模型组社交障碍症状明显(P<0.01),焦虑障碍症状明显(P<0.01),重复刻板行为增多(P<0.05或P<0.01),海马神经元结构损伤,GLU升高(P<0.01)、GABA下降(P<0.01),BDNF、TrkB、CREB mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,维生素D组及六味地黄丸中、低剂量组仔鼠社交能力增强(P<0.05或P<0.01),焦虑障碍减轻(P<0.05或P<0.01),重复刻板行为减少(P<0.01或P<0.05),海马神经元结构明显复原,GLU下降(P<0.01),BDNF、TrkB、CREB mRNA表达增加(P<0.05或P<0.01),六味地黄丸中、低剂量组GABA上升(P<0.05或P<0.01)。结论六味地黄丸能显著改善VPA诱导的ASD仔鼠行为表现,增强海马组织神经元的再生与修复,其机制可能与平衡GLU、GABA水平,上调仔鼠海马组织中BDNF/TrkB/CREB的表达有关。

六味地黄丸介导RAGE抑制MMP-2/MMP-9对Aβ_(1-40)损伤bEnd.3细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨六味地黄丸对β淀粉样蛋白1-40(Aβ_(1-40))损伤的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的保护作用及其机制。方法采用CCK8法检测Aβ_(1-40)和六味地黄丸含药血清(MSLDP)对细胞活性的影响,筛选合适的作用浓度。将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、MSLDP+Aβ_(1-40)组和MSLDP组,采用Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,免疫荧光检测LRP1、RAGE、ZO-1表达;再将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、FPS-ZM1(RAGE抑制剂)+Aβ_(1-40)组和FPS-ZM1+Aβ_(1-40)+MSLDP组,Western blot检测RAGE、MMP-9、MMP-2、ZO-1蛋白表达。结果Aβ_(1-40)呈剂量依赖性降低bEnd.3细胞活性(P<0.01),MSLDP对Aβ_(1-40)损伤的细胞活性具有保护作用(P<0.05,P<0.01),因此选择10μmol/L Aβ_(1-40)和10%MSLDP进行后续实验。与对照组比较,Aβ_(1-40)组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.01),LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),并且LRP1、ZO-1荧光强度降低(P<0.01),RAGE荧光增强(P<0.01);与Aβ_(1-40)组比较,MSLDP组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达和RAGE荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),而LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达和LRP1、ZO-1荧光强度升高(P<0.05,P<0.01)。与Aβ_(1-40)组比较,Aβ_(1-40)+FPS-ZM1组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.05);Aβ_(1-40)+FPS-ZM1+MSLDP组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.01),FPS-ZM1和MSLDP联合使用的效果更佳。结论六味地黄丸能够保护Aβ_(1-40)损伤的脑微血管内皮的细胞紧密连接,减轻血脑屏障障碍,保护神经血管单元防治阿尔茨海默病,可能通过调节RAGE途径抑制MMP-2/MMP-9途径实现。

六味地黄汤加减对慢性肾衰竭患者微炎症指标及肾功能的影响

目的:探讨六味地黄汤加减对慢性肾衰竭(CRF)患者微炎症指标及肾功能的影响。方法:选取宜春市中医院2021年7月—2022年12月收治的95例CRF患者,按随机数字表法将其分为对照组(n=48)、研究组(n=47)。对照组予常规治疗,研究组基于常规治疗予六味地黄汤加减治疗。对比两组疗效、微炎症指标、肾功能指标及不良反应。结果:相比对照组,研究组总有效率较高,差异有统计学意义(P<0.05);相比对照组,研究组治疗4周后C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平均更低,内生肌酐清除率(Ccr)水平更高,差异均有统计学意义(P<0.05);两组不良反应总发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CRF患者采用六味地黄汤加减治疗效果较好,可降低微炎症指标水平,改善肾功能,且安全性好。