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睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因的克隆及对3α-HSD/CR表达的调节 被引量:3
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作者 李明堂 王清爽 于源华 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期624-627,共4页
采用分子克隆技术构建睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因表达载体,并通过与PAX1共转化来分析LysR基因对3α-HSD/CR在E.coliHB101的表达调节。结果表明:酶切和DNA测序显示,所构建的表达质粒pKtac1-LysR含有编码LysR的基因序列且稳定性较好;共转... 采用分子克隆技术构建睾丸酮丛毛单胞菌LysR基因表达载体,并通过与PAX1共转化来分析LysR基因对3α-HSD/CR在E.coliHB101的表达调节。结果表明:酶切和DNA测序显示,所构建的表达质粒pKtac1-LysR含有编码LysR的基因序列且稳定性较好;共转化结果显示,加入重组质粒pKtac1-LysR的3α-HSD/CR的表达量显著高于加入pKtac1的3α-HSD/CR的表达量(P<0.01)。 展开更多
关键词 睾丸酮丛毛单胞菌 lysr基因 表达
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MsiR高可溶性蛋白突变株的筛选 被引量:1
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作者 马腾 赵亚琪 +1 位作者 路福平 蔡韬 《中国酿造》 CAS 北大核心 2015年第5期43-47,共5页
外源蛋白在表达宿主中的可溶性是影响其应用的关键因素。采用m Cherry报告基因,构建Msi R-m Cherry融合蛋白,通过测定荧光值定性定量的测定Msi R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量。随后,利用易错聚合酶链反应(Errorprone-PCR)和致突变菌... 外源蛋白在表达宿主中的可溶性是影响其应用的关键因素。采用m Cherry报告基因,构建Msi R-m Cherry融合蛋白,通过测定荧光值定性定量的测定Msi R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量。随后,利用易错聚合酶链反应(Errorprone-PCR)和致突变菌株(XL1-Red)两种方式构建了msi R-m Cherry基因突变文库,经筛选得到了4株在大肠杆菌中以37℃作为诱导温度下可溶性明显提高的蛋白突变体。 展开更多
关键词 mCherry报告基因 基因突变文库 筛选 lysr转录调控家族 MsiR
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离子环境对Acinetobacter sp. ADP1的salR基因活性的影响
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作者 李超 周琳 +2 位作者 张永军 宋福平 张杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期57-63,共7页
革兰氏阴性菌Acinetobacter sp. ADP1可以利用水杨酸作为惟一的碳源和能源生长,与这一代谢过程相关的基因为sal基因。利用sal基因启动子与细菌荧光素酶基因(lux)编码区融合而构建的工程菌Acinetobacter ADPWH_lux,通过定量测定活细胞发... 革兰氏阴性菌Acinetobacter sp. ADP1可以利用水杨酸作为惟一的碳源和能源生长,与这一代谢过程相关的基因为sal基因。利用sal基因启动子与细菌荧光素酶基因(lux)编码区融合而构建的工程菌Acinetobacter ADPWH_lux,通过定量测定活细胞发光度可以检测出salR基因在不同离子环境中的活性。本试验测定了不同浓度梯度的10种金属离子对处于指数期和稳定期的细菌的salR基因活性的影响。发光度检测表明重金属离子均会抑制指数期和稳定期的细菌的发光能力。RT-PCR试验也证明,凡能够抑制细菌发光能力的离子,均会抑制细菌的salA基因的转录。 展开更多
关键词 ACINETOBACTER sp. ADP1 salR基因 lysr型转录调节子 离子耐受性 生物发光
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中慢生型天山根瘤菌MsiR组成型蛋白突变株的筛选
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作者 赵亚琪 马腾 蔡韬 《中国酿造》 CAS 北大核心 2016年第10期130-134,共5页
MsiR蛋白来源于中慢生型天山根瘤菌(Mesorhizobium tianshanense),是Lys R转录调控蛋白家族中的一员,它可以响应宿主植物释放的抗代谢物-刀豆氨酸,激活外运蛋白msiA编码基因的转录表达。通过构建MsiR突变文库,筛选得到了7个MsiR组成型... MsiR蛋白来源于中慢生型天山根瘤菌(Mesorhizobium tianshanense),是Lys R转录调控蛋白家族中的一员,它可以响应宿主植物释放的抗代谢物-刀豆氨酸,激活外运蛋白msiA编码基因的转录表达。通过构建MsiR突变文库,筛选得到了7个MsiR组成型突变蛋白,L166P、A147V、P83L、A278T组成型突变蛋白丧失了对刀豆氨酸的响应,在没有刀豆氨酸时的荧光值为800左右;A147T、E59G组成型突变蛋白仍然可以响应刀豆氨酸的诱导信号,添加刀豆氨酸时荧光值是未添加时的1.7倍。通过蛋白同源建模分析了组成型突变的氨基酸残基在MsiR蛋白上的空间分布及其对MsiR蛋白调控功能可能的影响。组成型突变蛋白的研究对进一步揭示LysR家族蛋白转录调控的机理有重要意义。 展开更多
关键词 lysr家族转录调控蛋白 MsiR蛋白 组成型突变 mCherry毋报告基因
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