分枝杆菌噬菌体D29 LysinA的表达及生物信息学分析

目的在耻垢分枝杆菌中克隆表达噬菌体D29LysinA基因,用生物信息学分析LysinA基因所编码蛋白的生物学特性及进化特征。方法增殖、收集噬菌体D29,提取其基因组DNA,PCR扩增LysinA基因后对产物进行测序和比对分析;采用ProtParam软件预测LysinA编码蛋白的结构、特性及进化特征。结果噬菌体D29LysinA基因扩增产物与预期值相符,大小约为1 482bp;测序表明LysinA基因序列与GenBank中已发表的完全一致。LysinA蛋白有493个氨基酸,分子式为C2419H3739N715O725S12,分子质量单位为54.8ku,理论等电点为5.79,在哺乳动物体外的半衰期约为30h;平均疏水系数为-0.443,总体上为亲水性蛋白;二级结构包含α-螺旋(占36.92%)、β-转角(占11.15%)、β-折叠(占17.04%)和无规则卷曲(占34.89%);预测的B细胞、CTL细胞及Th细胞抗原表位分别为17、15和21个,并模拟了LysinA蛋白进化树显示噬菌体D29与Chy5亲缘关系较近。结论成功表达了噬菌体D29LysinA蛋白,经生物信息学分析LysinA蛋白具良好免疫原性,为疫苗开发和结核病治疗奠定理论基础。