M-CSF、GM-CSF诱导人源外周血单个核细胞来源巨噬细胞的不同极化和吞噬

目的观察人源外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)在体外培养诱导单核巨噬细胞时是否因刺激剂M-CSF、GM-CSF的不同而造成极化状态差异,并衡量极化状态差异是否伴有吞噬能力的改变,并寻找可能相关的免疫表型标记。方法取健康献血员新鲜外周白膜血,分离获得PBMC后,每一份PBMC都分为MCSF、GMCSF组,分别对应M-CSF或GM-CSF作为诱导剂。培养d7时用诱导得到的单核巨噬细胞分别和致敏红细胞、未致敏红细胞、血小板(Plt)以及葡聚糖-40(dextran-40)共孵育,模拟MMA(单核细胞单层实验),利用流式细胞仪观察吞噬结果。同时用流式分析2组细胞的CD11C、CD14、CD15、CD16、DR、CD32、CD32b、CD49f、CD54、CD64、CD68、CD86、CD163等免疫表型。所有得到的结果进行配对t检验分析差异。结果 MCSF、GMCSF组CD14+CD16+细胞占比分别为(62.6±33.7)%vs(22.8±15.6)%,CD163+CD14+细胞(29.7±18.7 vs 0.64±0.42), CD14 MFI 3 829±2 091vs464±101,(P均<0.05)。同时MCSF组伴随CD64+(45.7±25)%vs(24.5±19)%、CD32b+(59.5±22.4)%vs(27.5±11.8)%细胞占比增高,CD32+、HLA-DR+细胞数虽然无明显变化,但其MFI分别较GMCSF组增高和降低(MFI CD32 1 093±380vs530±179;MFI DR 1 034±290vs1 661±367)。同时发现MCSF组具有较强的吞噬力,对被吞物的吞噬力多数为Plt> Dextran-40>致敏RBC>非致敏RBC。结论证实了人源PBMC诱导的单核巨噬细胞在体外培养时同一起源样品也可因M-CSF、GM-CSF而促成不同极化方向, M-CSF促进M2型极化, GM-CSF促进M1型极化,并由此影响对致敏红细胞、血小板(Plt)以及葡聚糖-40的吞噬能力,因此在临床使用M-CSF、GM-CSF时需注意单核巨噬细胞的极化方向,采取更有利于患者治疗和临床实验的制品。

小柴胡汤对CFA大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF作用的实验研究

目的基于治疗前后完全弗氏佐剂(CFA)大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的表达,探讨小柴胡汤(XCHT)治疗类风湿关节炎的机制。方法动物实验将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备大鼠类风湿关节炎CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、XCHT低剂量组、XCHT中剂量组、XCHT高剂量组、雷公藤多苷组。造模后分别按照药物干预方案, 2 mL/次,日3次灌胃,实验观察大鼠一般状态、关节炎状态及酶联免疫吸附测定大鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的含量。结果大鼠随着小柴胡汤剂量的增加,一般状态及关节炎状态改善。在血清炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF检测方面,随着小柴胡汤剂量的增大,其表达逐渐降低,与模型组比较,小柴胡汤中及高剂量统计结果显示P<0.01,降低很显著。结论本研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以改善CFA大鼠的一般状态及关节炎状态。小柴胡汤能够通过抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、M-CSF的表达,抑制炎症反应,从而延缓骨破坏,为中药方剂治疗类风湿关节炎提供基础实验依据。

毛冬青甲素对兔颈总动脉球囊损伤后炎性因子IL-6和M-CSF的影响

目的:观察毛冬青甲素(Ilexonin,IA)对兔颈总动脉球囊损伤后炎性因子IL-6、M-CSF的影响,为冠脉内介入治疗提供实验依据。方法:日本大耳白兔30只,高胆固醇饲料喂养4周后随机分为3组(每组10只):对照组,右颈外动脉切开后直接缝合切口;球囊扩张组,右颈外动脉切开并内膜球囊损伤后缝合动脉与伤口;IA治疗组,操作同球囊扩张组,缝合切口后静脉给予IA。三组实验兔继续高胆固醇饮食4周。术前1d,术后1d、1周、2周、4周采集血清,放免法测定白细胞介素-6(IL-6)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)。取损伤血管段,病理观察动脉病理改变。结果:①球囊扩张组术后血清IL-6水平明显高于IA治疗组(P<0.05),且较IA治疗组恢复延迟;②IA治疗组术后血清M-CSF水平虽增高,但低于球囊扩张组(P<0.05),且恢复术前血清水平时间也较球囊扩张组明显提前(P<0.05);③血管内皮病理变化:颈动脉损伤后对照组内膜光滑,未见泡沫细胞;球囊扩张组内膜增厚,血管平滑肌细胞增生,可见较多泡沫细胞,管腔狭窄;IA治疗组较球囊扩张组泡沫细胞减少,管腔狭窄程度明显减轻。结论:IA能降低动脉内膜球囊损伤后炎性因子IL-6、血清M-CSF水平,并抑制被损伤内膜血管平滑肌细胞增生。

骨巨细胞瘤瘤组织中M-CSF、TNF-α的检测及其意义

目的 :探讨细胞因子与骨巨细胞瘤局部溶骨的关系。方法 :通过ELISA法、Westernblot法和免疫组化法对 10例骨巨细胞瘤、5例骨肉瘤和 5例正常人血清进行了TNF -α和M -CSF表达及定位检测。结果 :骨巨细胞瘤组织TNF -α含量和M -CSF表达率明显高于骨肉瘤和正常人血清。TNF -α由骨巨细胞的部分单核基质细胞和多核巨细胞分泌 ;而M -CSF由部分单核基质细胞分泌 ,多核巨细胞则不表达。结论

腺病毒介导M-CSF和IFN-γ基因联合转染对巨噬细胞抗原提呈功能的影响

研究观察了Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ基因转染的巨噬细胞（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，Ｍφ）的体外抗原提呈能力，并对其机制进行了初步探讨，结果表明，ＩＦＮ－γ基因转染及Ｍ－ＣＳＦ／ＩＦＮ－γ联合基因转染的Ｍφ抗原提呈功能显著增强，联合基因转染组优于单基因转染组（Ｐ＜０．０５），Ｍφ表面Ｉａ、Ｂ７－１、ＩＣＡＭ－１的表达水平有不同程度的提高，这些细胞表面相关分子的高表达可能与其抗原提呈能力增加有关。混合淋巴细胞反应结果提示，当用５倍于Ｍφ量的肿瘤细胞制备的肿瘤抗原触发４ｈ，Ｔ淋巴细胞的增殖能力最强，该结果为过继回输肿瘤抗原体外触发的基因转染的Ｍφ治疗肿瘤提供了实验依据。

M-CSF受体配基结合区基因克隆及其在烟草中的表达

巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimu-lating factor,M-CSF)是一种多功能细胞因子,具有促进单核—巨噬细胞生长、增殖、分化等功能。M-CSF以可溶型和膜结合型等多种形式存在,在髓细胞白血病、卵巢癌、乳腺癌等肿瘤细胞中高表达。M-CSF受体(M-CSFR)是原癌基因C-fms编码的跨膜蛋白。

氟化物对成骨细胞OPGL mRNA和M-CSF mRNA表达的影响

目的 探讨氟对成骨细胞的骨保护蛋白配体 (OPGL)mRNA和巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)mR NA表达的影响。方法 应用酶消化法分离小鼠乳鼠成骨细胞 ,取第 3代成骨细胞 ,加入不同浓度的氟 6h ,提取细胞总RNA ,通过逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,观察成骨细胞分泌的OPGL和M CSF表达的变化。结果 在氟的作用下 ,成骨细胞的OPGLmRNA和M CSFmRNA的表达呈上升趋势 ,但未达到统计学差异水平。结论 氟有可能通过上调OPGL和M CSF的表达 。

M-CSF和RANKL体外诱导培养小鼠破骨样细胞及其骨吸收功能的动态观察

目的以巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)和核因子κB受体激动剂配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)联合体外诱导小鼠骨髓干细胞分化为破骨样细胞,并对其骨吸收功能进行动态观察。方法分离小鼠四肢骨获取骨髓干细胞,以M-CSF和RANKL诱导培养,将盖玻片及骨磨片置入培养基内,在诱导培养的第3,6,9天分别对盖玻片行抗酒石酸酸性磷酸酶(The tartrate-resistant acid phosphatase TRAP)染色,观察细胞形态和染色情况,并计算破骨样细胞数量;同时对骨磨片进行骨吸收陷窝的观察。结果诱导培养3 d后出现含TRAP(+)颗粒的细胞,可见淡染单核和双核;诱导培养6 d后可见TRAP(+)细胞较诱导培养3 d时增多,仍以双核为主;诱导培养9 d后出现多核巨型TRAP(+)细胞,细胞核达到3个以上。并且随着诱导培养的时间延长,破骨样细胞数量逐渐增长。诱导培养第3,6天骨磨片上均未发现骨吸收陷窝,第九天出现不同形态的呈蓝紫色的吸收陷窝。结论 M-CSF和RANKL联合体外诱导小鼠骨髓干细胞形成破骨样细胞是一种有效的诱导培养方法,本实验在诱导培养第九天发现破骨样细胞具有骨吸收功能。

腺病毒介导M-CSF,IFN-γ基因转染的腹腔巨噬细胞对体外抗肿瘤免疫功能影响的研究

巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)-IFN-γ是两种与单核巨噬细胞密切有关的细胞因子．M-CSF除了准持骨髓巨噬祖细胞增殖、分化、存活之外，对于成熟的Mφ也有一定的调节作用。IFN-γ是一种较强的巨噬细胞激活因子(MAD，除了激活Mφ外，也可刺激NK，LAK细胞的活性．刺激B细胞增殖、分化，T细胞增殖等，

M-CSF在青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中的表达及意义

目的从成骨细胞(osteoblast,OB)水平探讨巨噬细胞集落因子(macrophage colony stimulating factor,MCSF)与青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者骨量降低的关系。方法AIS患者27例,其中男25例,女2例;年龄12～18岁,平均14.9岁;Cobb角40°～94°,平均57.3°。将所有AIS患者分为两组:A组14例,为骨量正常患者;B组13例,为骨量减低患者。正常对照组8例(定为C组),年龄12～18岁,平均15.3岁。3组均采用双能X线吸收测量仪(dual-energy X-ray absorptiometry,DEXA)测量骨密度(bone mineral density,BMD),测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。所有受试者术中取适量髂前上嵴的松质骨,运用植块法培养成骨细胞。培养至P3代后行表型鉴定,用RT-PCR检测AIS组和正常对照组中M-CSF mRNA的表达水平。结果B组中M-CSFmRNA的表达量均较A组(P<0.05)和C组高(P<0.05),A组与C组M-CSFmRNA的表达量无显著统计学差异(P>0.05)。结论M-CSF在OB水平mRNA表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。

巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)融合EGFP真核表达载体的构建及表达

目的构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,并鉴定其在小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞能否正确表达。方法PCR扩增M-CSF基因,定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体,构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,脂质体介导将pEGFP-M-CSF转染入NIH3T3细胞,以一步法RT-PCR检测其在NIH3T3细胞中的表达情况。结果双酶切及测序鉴定证明成功构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,并在NIH3T3细胞中成功地表达了融合荧光蛋白,RT-PCR检测结果显示RT-PCR扩增产物与M-CSF目的基因片段大小相符,确实源于重组质粒转录后的mR-NA。结论真核表达重组体pEGFP-M-CSF的成功构建及在体外真核细胞中有效表达,为进一步研究M-CSF在真核细胞中的信号调控奠定了一定的实验基础。

M-CSF对RAW264.7细胞抗氧化系统的影响

目的：探讨巨噬细胞集落刺激因子（Macrophagecolony-stimulatingfactor，M－CSF）抗单核／巨噬细胞氧化损伤的作用机理，揭示M－CSF对小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞抗氧化系统影响。方法：以L929细胞条件培养液为M-CSF来源，采用酶活性测定等生化测定方法，考察M-CSF细胞内还原型谷胱甘肽含量、脂质过氧化物含量、过氧化氢酶活性、谷胜甘肽还原酶活性等检测指标的影响。结果：M-CSF处理可提高RAW264．7细胞内的过氧化氢酶活性及还原型谷胱甘肽含量，降低脂质过氧化物含量，且使细胞在tbOOH攻击下保持较高的抗氧化水平。结论：M-CSF可能通过改善单核巨噬细胞的氧化还原代谢而减轻细胞的过氧化损伤。

M-CSF对RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用

目的揭示巨噬细胞集落刺激因子 (M- CSF)是否能保护单核巨噬细胞免受过氧化损伤。方法以 L 92 9细胞条件培养液 (L92 9- CM)作为 M- CSF来源 ,以细胞显微形态、细胞活力等指标 ,观察了 M- CSF对叔丁基氢过氧化物 (tb OOH)诱导的巨噬细胞系 RAW2 6 4.7细胞氧化损伤的影响。结果 tb OOH可以引起 RAW2 6 4.7细胞的损伤 ,表现为细胞皱缩、伪足消失、细胞活力降低 ,且损伤随 tb OOH作用浓度的增加而明显 ;而 M- CSF可以减轻 tb OOH诱发的 RAW2 6 4.7细胞氧化损伤。结论 M-CSF对单核巨噬细胞的氧化损伤具有保护作用。

RANKL,M-CSF和破骨细胞体外培养

骨是一不断更新的组织,骨重建贯穿生命过程的始终.骨重建包括骨吸收和随后进行的骨形成.骨形成和骨吸收的动态平衡维持着正常的骨代谢.当骨吸收大于骨形成时,导致骨量减少.骨吸收的主要细胞是多核的破骨细胞(Osteoclast,OC).近年来,随着分子生物学和细胞生物学的发展,人们对骨髓微环境在调节破骨细胞形成和骨吸收方面有了较深入的了解.体内和体外模型的建立,为研究正常和病理情况下的破骨细胞的生物学特性提供了重要信息.在骨髓微环境中,成骨细胞和破骨细胞的细胞间接触,信号传递调控着破骨细胞的分化、活化及其功能活动.这对骨的纵向生长、更新及峰值骨量的保持等具有决定性的作用.

细胞因子M-CSF与卵巢癌

巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的研究是当前细胞生物学领域的热点之一,它是探讨细胞生长调节奥秘的一条重要途径,上皮性卵巢癌细胞可自身分泌 M-CSF,并促进癌细胞增殖与转移。因此,M-CSF 有望成为一有用标记物,有利于卵巢癌的早期诊断,亦为卵巢癌基因治疗提供理论依据。

局麻和全麻对病人血清IL-6、IL-8和M-CSF水平影响的初步探讨

目的:探讨了局麻和全身麻醉对手术病人血清IL-6、IL-8和M-CSF水平的影响。方法:根据不同的麻醉方法将68例胃部手术病人分为硬膜外麻醉组(A组)和静吸复合全麻组(B组),每组34例。在麻醉诱导前、手术切皮和手术开始后1h抽取静脉血3ml,分别测定血清IL-6、IL-8和M-CSF浓度。结果:A组血清IL-6、IL-8和M-CSF含量在切皮和术中1h与术前比较有显著性差异(P<0.05);B组血清IL-6、IL-8和M-CSF含量无显著性差异(P>0.05);在切皮和术中1h,B组IL-6、IL-8和M-CSF含量比A组含量低(P<0.05)。结论:静吸复合麻醉能明显降低IL-6、IL-8和M-CSF浓度,有一定的临床实用价值。

原因不明复发性流产患者Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体检查价值分析

目的观察Th1/Th2型细胞因子、M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)、封闭抗体检查在原因不明复发性流产患者中的价值。方法临床资料采集2017年10月~2018年10月妇产科诊治的80例URSA患者(设观察组),另选取我院80例正常妊娠女性(设正常妊娠组),对两组Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体进行检测,比较两组检测情况。结果观察组治疗后URSA的TNF-α(27.69±8.96)pg/mL、INF-γ(28.16±5.25)pg/mL、IL-2(25.76±8.56)pg/mL均高于正常妊娠组、治疗后正常妊娠水平,IL-4(2.19±0.86)pg/mL、IL-6(4.09±1.14)pg/mL、IL-10(1.35±0.33)pg/mL及M-CSF(89.77±8.68)pg/mL均低于正常妊娠组、治疗后正常妊娠水平,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗前BA阳性率11.25%比正常妊娠组85.00%低,差异有统计学意义(P<0.05),观察组治疗后URSA的BA阳性率52.50%低于正常妊娠组85.00%、治疗后正常妊娠87.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体与原因不明复发性流产存在密切联系,其中Th1细胞因子表达高,Th2细胞因子及M-CSF表达性低,封闭抗体阳性率低时,易引起流产。

乳腺癌患者手术治疗前后血清CA15-3、CA50和M-CSF检测的临床意义

目的:探讨了乳腺癌患者手术治疗前后血清CA15-3、CA50和M-CSF水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析对32例乳腺癌患者进行了手术治疗前后血清CA15-3、CA50和M-CSF检测,并与35名正常健康人作比较。结果:乳腺癌患者在手术治疗前血清CA15-3、CA50和M-CSF水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),经手术治疗6个月后则与正常人组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测血清CA15-3、CA50、M-CSF水平的变化对乳腺癌的诊断、治疗和预后观察均具有重要的临床价值。

M-CSF上调cyclinD1/D3和CDK2/6的表达促进HeLa细胞增殖

非分泌型巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的表达在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,为探讨胞质M-CSF对细胞增殖的影响,采用基因重组技术构建胞内稳定表达M-CSF的HeLa细胞系,以空载体(pCMV/myc/cyto)转染HeLa细胞和未转染HeLa细胞作为对照,MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响,并计算细胞倍增时间,RT-PCR观察胞内M-CSF对G1期细胞周期相关蛋白的影响.结果显示,与对照组比较,转染M-CSF的HeLa细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强,M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的HeLa细胞的增殖,且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强,转染M-CSF的HeLa细胞的cyclinD1/D3和CDK2/6 mRNA表达显著升高(P<0.05).提示:M-CSF可上调cyclinD1/D3和CDK2/6的mRNA表达,促进HeLa细胞的增殖.