乙肝病毒Pre S1与HBV M和HBV DNA检测的相关性分析

目的 了解PreS1与HBVM和HBVDNA检测的关系及其临床应用价值。方法 PreS1检测采用ELISA方法 ,HBVM检测采用电化学免疫发光法 ,HBVDNA检测采用荧光定量PCR法。结果 PreS1在HBeAg(+)组的检出率86 9% ,明显高于其他HBVM模式组 (P <0 0 1) ;PreS1检出乙肝病毒的灵敏性高于HBeAg检测 ,检测灵敏度为 80 9%(HBeAg为 6 1 8% ) ,检测有效率为 86 1% (HBeAg为 75 7% )。结论 PreS1与HBeAg具有较好的相关性 ,其检测灵敏性 (与HBVDNA的相关性 )和检测有效率都优于HBeAg检测 ,具有较好的临床应用价值。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M蛋白共表达的自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答

目的探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自杀性DNA疫苗的免疫效果。方法将ORF5和ORF6基因分别插入可以同时表达两个外源基因的表达载体pSCA2的26S启动子下游,获得ORF5和ORF6双基因共表达自杀性DNA疫苗pSFV-56。结果Westernblot检测证实ORF5和ORF6基因获得正确表达,并且所表达的GP5和M蛋白可以形成异源二聚体。将pSFV-56免疫Balb/c小鼠,首免后4周可检测到特异性PRRSV中和抗体,首免后8周的中和抗体最高可达1﹕32,同时还可检测到较高的特异性细胞免疫应答。进一步将pSFV-56免疫断奶仔猪,二免后4周即可产生1:8～1:16的中和抗体,直到二免后6周仍维持这种高水平的中和抗体,而且也可检测到较高的特异性细胞免疫应答。结论上述研究结果表明pSFV-56具有良好的免疫原性和诱发免疫动物产生较高免疫应答的能力。

IBV M基因与IL-18基因共表达DNA疫苗的免疫原性

将禽传染性支气管炎病毒(IBV)的M基因和禽白介素18(IL-18)基因分别插入双顺反子质粒pIRES-EGFP/DsRed中,构建IBV M和IL-18基因的共表达质粒pIRES-M/IL18及表达M基因的pIRES-M质粒。通过脂质体转染Vero细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光检测质粒在体外的表达。将构建的质粒用脂质体包裹后,通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄雏鸡,28日龄加强免疫1次;免疫前后均采血检测ELISA抗体效价和外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量;二免后2周用IBV肾型强毒进行攻毒。结果显示,pIRES-M/IL18、pIRES-M质粒均在Vero细胞中有效地转录并表达目的蛋白。从免疫后7 d起,pIRES-M/IL18免疫组产生的抗体水平及外周血T淋巴细胞亚群数量均高于pIRES-M组。pIRES-M/IL18、pIRES-M组对强毒的攻击保护率分别为65%和40%。以上结果表明,禽源IL-18基因与IBV M基因共表达可增强鸡体对DNA疫苗的免疫应答,提高对IBV强毒的抵抗力。

SARS相关冠状病毒M基因片段的克隆及其DNA疫苗诱导的体液免疫

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免疫小鼠后 ,用 SARS- Co V抗体 EL ISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。 结果 :构建了重组核酸疫苗质粒 p VCo- M,免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。 结论 :以 M为抗原基因的 DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体 ,为进一步改进或探索同类 DNA疫苗提供有益启示。

HeLa细胞中hR24L基因的表达、DNA损伤修复、G_2/M阻滞与电离辐射之间的关系(简报)

DNA是生命活动中最重要的遗传物质,保持其分子结构的完整性对于细胞至关重要,因此研究DNA损伤修复是生命科学的重要课题之一.基因组比较简单,易于操作的单细胞真核生物酵母遂成为研究DNA损伤修复的重要材料.对紫外线或电离辐射敏感的酵母突变株称为rad突变株.酵母细胞的基因组中有近30个遗传位点与辐射抗性有关.根据单突变和双突变的敏感特征所得出的上位关系可将其分为3个上位显性组[1,2]:RAD3组,该组成员参与核苷酸的切除修复,其突变株对紫外线敏感;RAD6组,参与复制后修复,其突变株对化学诱变剂敏感;RAD52组,参与重组修复(包括链断裂修复),其突变株对电离辐射敏感.RAD24基因属于RAD3组,兼有其他组的某些特性.

中国野桑蚕DNA多态性研究初报

用RAPD技术对浙江省、陕西省和重庆地区的野桑蚕及家蚕品种C1 0 8和大造进行了DNA多态分析。结果发现 :中国野桑蚕具有极为丰富的遗传多样性 ,就DNA多态性而言 ,不仅地区之间有很大的差异 ,同一地区不同个体之间的DNA多态性差异也类似家蚕品种之间的差异 ;同时 ,野桑蚕也与家蚕有较大的相似性 ,其共有的DNA带数高达 1 3 6%,相似系数也在 0 6以上 。

湖北海棠DNA的CTAB改良法提取及其SSR反应体系优化

为了利用分子标记技术研究湖北海棠的起源、系统发育和分类问题,本研究对湖北海棠及其近缘种叶DNA的CTAB提取法进行改良,并对SSR体系优化。结果表明,将EDTA用量从20mmol/L提高到80mmol/L,加大PVP和RNA酶的用量,有助于提高从湖北海棠叶中提取的DNA质量;利用反复实验优化的SSR体系,可从40对引物中筛选出18对多态性好、条带清晰的湖北海棠SSR引物。本研究筛选出的多态引物,将为探讨湖北海棠的起源、进化和遗传变异等提供基础资料。

在DNA芯片平台上探测AIV不同亚型cDNA

对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)、A/African starling/983/79(H7N1)和 A/Turkey/Wisconsin/1/66(H9N2)。通过RT-PCR获得大约500 bp的禽流感病毒基因cDNAs片段,克隆,从重组质粒扩增DNA片段,并点到玻璃载体上,制成芯片。在病毒RNA反转录过程中,用Cy5标记样品 cDNAs。样品 cDNAs是一个包括禽流感病毒HA和M基因的混合物。依据M基因鉴别型,依据HA基因鉴别亚型。扫描芯片上探针结合位点,杂交信号与预期设想基本一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV诊断方法。

X射线辐照诱导人神经胶质瘤细胞DNA双链损伤研究

采用免疫荧光染色法检测X射线诱导M059K细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)和磷酸化的毛细血管扩张性共济失调症突变基因(pATM)焦点的形成;流式细胞仪分析M059K细胞γH2AX和pATM表达的周期依赖性。免疫荧光染色检测结果显示,γH2AX和pATM焦点阳性细胞分别以照射后0.5、4 h表达最高,照射后24h,高剂量组焦点阳性细胞达100%。流式细胞仪分析结果显示,γH2AX和pATM的表达具有细胞周期依赖性。照射后0.5、4 h,γH2AX和pATM在细胞各期的表达均明显增加,并以G0/G1期为著;照射后24 h,γH2AX和pATM在G0/G1和S期表达降低,而G2/M期细胞表达明显增加。细胞呈现明显的G2/M期阻滞。结果提示,γH2AX和ATM信号通路参与X射线诱导的M059K细胞DNA双链断裂。

乙肝HBV DNA荧光定量检测与血清标志物结果相关性分析

目的研究乙肝血清学标志物(HBV-M)结果与HBV-DNA水平的关系,分析HBV DNA阳性率在各年龄组的分布情况。方法对深圳市部分服务行业人员血清应用荧光定量PCR检测和ELISA法检测并对结果进行分析。结果1 781例乙肝血清学标志物阳性血清中有1 102例HBV-DNA阳性。其中883例1.3.5阳性(俗称“大三阳”)血清中HBV-DNA的阳性率为96.15%;722例1.4.5阳性(俗称“小三阳”)血清中HBV-DNA的阳性率为24.38%;138例1.5阳性血清中HBV-DNA的阳性率为38.41%;22例1.3阳性血清中HBV-DNA的阳性率为90.91%;11例HBsAg阳性血清中HBV-DNA阳性率为36.36%。结论两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性。荧光定量PCR是检测HBV-DNA含量较精确的方法,能正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度;HBsAg和HBeAg与HBV-DNA含量有着明显的相关关系。

滇池铜绿微囊藻(M.aeruginosa Ktz)的分离培养与总DNA提取的改进

利用稀释法结合平板分离培养法将采自滇池水华中的铜绿微囊藻进行了成功的分离纯化 .对比纯化培养前后 ,发现纯化后该藻的生长速度明显加快 ,密度大为提高 ,约为纯化前的 5倍 .用乙醇乙醚混合液对该藻作预处理后 ,破坏了其胶质被 ,再经常规方法提取总DNA ,其得率提高 3- 4倍 .

不同咽拭子取样肺炎支原体DNA检测对支原体肺炎诊断价值研究

目的探讨不同咽拭子取样肺炎支原体DNA检测对支原体感染性肺炎病儿诊断价值。方法选择2017年2月至2019年6月在蚌埠市第一人民医院接受治疗的疑似肺炎支原体感染住院病儿174例进行研究。所有病儿入院后均由同一组护士采用常规咽拭子取样与改良咽拭子取样两种咽拭子采集方式对气道分泌物进行采集并行支原体DNA检测。参照诸福棠《实用儿科学》第7版中的诊断标准为金标准,分析两种咽拭子取样方式肺炎支原体DNA检测对支原体感染性肺炎病儿的诊断效能。结果174例病儿中37例(21.26%)经金标准诊断确诊为支原体感染性肺炎。常规咽拭子取样肺炎支原体DNA检测与金标准诊断结果一致性尚可(Kappa=0.526,P<0.001),常规咽拭子取样肺炎支原体DNA检测对支原体感染性肺炎诊断的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值分别为78.38%(29/37)、82.48%(113/137)、81.61%(142/174)、54.72%(29/53)、93.39%(113/121)。改良咽拭子取样肺炎支原体DNA检测与金标准诊断结果一致性良好(Kappa=0.781,P<0.001),改良咽拭子取样肺炎支原体DNA检测对支原体感染性肺炎诊断的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值分别为94.59%(35/37)、91.24%(125/137)、91.95%(160/174)、74.47%(35/47)、98.43%(125/127)。改良咽拭子取样肺炎支原体DNA检测对支原体感染性肺炎诊断效能灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值均高于常规咽拭子取样(P<0.05)。结论咽拭子取样肺炎支原体DNA检测对支原体感染性肺炎病儿具有较高的诊断价值,采取改良咽拭子取样可有效提高诊断灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值。

共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒修饰型GP5和M蛋白增强DNA疫苗免疫应答的研究

为了增强猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗免疫效力,分别以PRRSV ORF5m(修饰型ORF5基因)及ORF6为候选基因,构建了单基因或双基因共表达的真核表达质粒pCI-ORF5m、pCI-ORF6及pCI-ORF5m/ORF6。转染BHK-21细胞,Western blot检测证实ORF5m和ORF6基因均获得正确表达,并且共表达的GP5m和M蛋白能够形成异源二聚体。将构建的表达质粒免疫小鼠,首免后6周共表达ORF5m和ORF6基因的pCI-ORF5m/ORF6免疫组小鼠血清中和抗体全部阳转,8周时最高可达到1:32,同时还可检测到较高的特异性细胞免疫应答,明显高于单独表达ORF5m基因的pCI-ORF5m免疫组。进一步将DNA疫苗免疫断奶仔猪,pCI-ORF5m/ORF6免疫组同样能诱发优于pCI-ORF5m免疫组的中和抗体和细胞免疫反应。上述研究结果表明采用ORF5m和ORF6双基因共表达策略能够显著提高PRRSV DNA疫苗效力,为PRRSV新型疫苗的研制提供了有用的数据。

牛疱疹病毒Ⅰ型VP22和猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5融合基因DNA疫苗的免疫效应

为了提高表达GP5的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗的免疫效应,将具有蛋白转导功能的牛疱疹病毒1型(BHV1)VP22基因插入到经过修饰具有更好免疫原性的PRRSV修饰型ORF5基因(ORF5M)上游,构建VP22和ORF5M融合表达的真核表达质粒pCIVP22ORF5M。经间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实体外表达后,免疫BALBc小鼠,检测小鼠免疫后的GP5特异性ELISA抗体、抗PRRSV中和抗体和脾淋巴细胞增殖反应,并与非融合的真核表达质粒pCIORF5M进行比较。结果显示,融合表达VP22GP5的DNA疫苗pCIVP22ORF5M诱导的体液免疫和细胞免疫反应均明显高于非融合表达的DNA疫苗pCIORF5M,表明蛋白转导相关蛋白BHV1VP22能显著增强表达GP5的PRRSVDNA疫苗的免疫效应,有效发挥了基因免疫佐剂效应;这为研制PRRSV高效DNA疫苗奠定了基础,同时也为其它疾病的高效新型疫苗研究提供了思路。

乙型肝炎病毒标志物与PreS_1Ag及HBV-DNA的关系

目的:探讨乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)与PreS_1Ag及HBV-DNA之间的关系。方法:对339份乙型肝炎病毒携带者血清同时检测HBV-M、PreS_1Ag及HBV-DNA,并分析三者之间的关系。结果:PreS_1Ag与HBV-DNA的阳性率在HBeAg(+)模式中最高,与HBeAg(-)模式比较有显著性差异,PreS_1Ag与HBV-DNA检测交叉结果表明,二者之间有密切关系。结论:HBeAg、PreS_1Ag、HBV-DNA都是乙型肝炎病毒复制的重要指标,三者之间有密切关系。

乙型肝炎病毒DNA定量分析的临床意义

目的:探讨乙型肝炎病毒HBV DNA含量与血清标记物的相关性及其对乙型肝炎诊断、预后的意义。方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测1652例乙肝患者血清学标记物(HBV—M),其血清学模型包括以下9种组合;并选取160例HBV M全阴性正常人作为对照。实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测血清中HBV DNA含量。结果:1、2组HBV DNA阳性率为98.4%和96.67%,明显高于其它组。结论:HBV DNA含量与乙肝病毒e抗原具有显著相关性,HBV M和HBV DNA定量检测对于临床乙肝病毒感染、复制及临床治疗有重要意义。

基于OPC技术和Windows DNA-M结构的制造信息监视技术研究

针对传统的制造信息监视系统中底层通信接口的不一致性 ,并基于 Web应用的组件化需求 ,提出了基于OPC技术和 Windows DNA-M结构的制造信息监视技术。首先论述了 Windows DNA-M的体系结构和特性 ,探讨了 OPC和 XML在系统集成框架中的应用 ,构建了基于 OPC和 XML技术的 Windows DNA-M结构 ,详细描述了自行开发的基于 OPC技术和 Windows DNA-M体系的多层分布式制造信息监视系统实现的关键技术 ,最后通过该技术在某制造企业 DNC系统设备状态信息监视中的成功应用 ,验证了基于 OPC技术和

乙肝患者HBV-LP与HBV-DNA表达的相关性及临床应用评价

目的探讨不同模式乙型肝炎患者中乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)与乙肝病毒标志物(HBV M)、乙肝病毒前S1抗原(HBV perS1)及HBV-DNA表达的相关性,评价其在乙肝诊断和治疗中的临床应用价值。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,对286例HBV感染者和45名健康对照者血清分别检测HBV-LP、HBV前S1抗原、乙型肝炎病毒五项标志物的表达水平;采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA拷贝数;分析HBV-LP与其它方法的相关性。结果在286例HBV感染者血清HBV-LP阳性237例,阳性率82.9%。其中乙肝大三阳HBV-DNA阳性92例,阳性率82.8%,HBV-LP阳性94例,阳性率84.7%,两者无显著性差异(P>0.05),阳性符合率为79.6%;HBVperS1阳性185例,阳性率64.7%,两者有差异性显著(P<0.05);HBV DNA拷贝数与HBV-LP阳性间呈正相关。结论血清HBV-LP作为HBV患者临床诊断的一项新指标,较准确地反映了乙肝病毒的复制情况,是HBV-M有益的补充,在HBV病毒复制、疗效及预后监测中具有重要的意义。

荧光定量PCR检测HBV DNA与血清HBV标志物和preS1相互关系研究

目的探讨荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清免疫学标志(HBVM)模式,preS1之间的相互关系及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测801例血清的HBVDNA,用ELISA方法对其免疫学标志,preS1同时进行检测。结果HBVDNA的总检出率为67·0%,preS1的总检出率为74·9%。其中,在模式HBsAg(+),HBeAg(+),HBcAb(+)中血清HBVDNA含量明显高于HBsAg(+),HBeAb(+),HcAb(+)及HBsAg(+),HBcAb(+)组。在HBsAg(-)模式中HBVDNA亦有检出。在HBsAg(+),HBeAb(+),HcAb(+)组,HBVDNA的检出率为55·8%,而preS1的检出率为69·8%,两者有显著差异(P<0·01),其余HBVM模式,无显著差异(P>0·05)。结论HBVM和preS1提供了HBV感染的间接证据,荧光定量PCR法检测HBVDNA准确灵敏,是HBV感染及复制的直接证据,HBVM,preS1和HBVDNA的检测各有其独特的临床检测意义,在乙型肝炎的诊断治疗中均具有重要的临床指导价值。