超声造影联合血清Ficolin-3,FOXM1对2型糖尿病下肢动脉病变的诊断价值分析

目的超声造影联合血清纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)、叉头框蛋白M1(FOXM1)对2型糖尿病(T2DM)下肢动脉病变的诊断价值分析。方法选取2022年2月至2023年2月我院收治的T2DM患者114例,以下肢动脉血管造影检查为金标准,将患者分为下肢动脉病变组23例(病变组)和无下肢动脉病变组91例(T2DM组),另选取同期于本院进行体检的健康志愿者91例为对照组。对患者及健康志愿者进行血清Ficolin-3、FOXM1及超声造影检查;ROC曲线分析血清Ficolin-3、FOXM1对T2DM下肢动脉病变的诊断价值;采用四格表法分析血清Ficolin-3、FOXM1、超声造影及3项联合对T2DM下肢动脉病变的诊断价值。结果病变组、T2DM组血清Ficolin-3水平显著高于对照组,且病变组血清Ficolin-3水平显著高于T2DM组(均P<0.05);病变组、T2DM组血清FOXM1水平显著低于对照组,且病变组血清FOXM1水平显著低于T2DM组(均P<0.05);血清Ficolin-3诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.868,敏感度为86.96%,特异度为75.82%,最佳截断值为35.12μg/ml;血清FOXM1诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.854,敏感度为82.61%,特异度为78.02%,最佳截断值为0.57;血清Ficolin-3、FOXM1检查结果与金标准均具有中度一致性(Kappa=0.480、0.481,均P<0.001);超声造影检查结果显示,T2DM下肢动脉病变的阳性检出率为73.91%,与金标准具有较高一致性(Kappa=0.631,P<0.001);3项联合检测的敏感度、漏诊率均显著优于超声造影单独诊断,准确度显著优于Ficolin-3、FOXM1单独诊断,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论血清Ficolin-3、FOXM1联合超声造影检查在T2DM下肢动脉病变诊断中的应用价值较高,进一步提升了诊断的敏感度、准确度,减少了误诊率。

中药通心络胶囊对糖尿病足大鼠nephrin、podocin 水平、巨噬细胞M1表型及VEGF蛋白的作用

目的研究中药通心络胶囊对糖尿病足大鼠nephrin、podocin水平、巨噬细胞M1表型及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的作用。方法SPF级健康SD大鼠50只,随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余40只进行糖尿病足模型建立,建模成功后40只大鼠按随机数字表法分为模型组,通心络低、中、高剂量组,每组10只,健康组、模型组给予2 ml生理盐水灌胃;通心络低、中、高剂量组分别给予通心络胶囊0.50、0.75、1.00 g/kg灌胃。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾组织病理形态,HE及Masson染色观察大鼠足部病理形态,RT-聚合酶链反应(PCR)检测Nephrin、podocin表达,多重免疫荧光检测伤口组织中M1型和M2型巨噬细胞数量,Western印迹检测细胞中VEGF、缺氧诱导因子(HIF)-1α蛋白表达水平,应用ImageJ 1.46医学图像分析糖尿病足大鼠溃疡面积。结果模型组肾小球萎缩,基底膜增厚,有炎性细胞浸润,足部炎症细胞较多,新生胶原纤维组织较薄,且排列疏松、不规律,管腔较少;与模型组相比,通心络低、中、高剂量组有所改善。与健康组相比,模型组nephrin、podocin、VEGF、HIF-1α水平显著降低;与模型组相比,通心络各剂量组nephrin、podocin、VEGF、HIF-1α水平显著升高,且以高剂量组效果最为显著(P<0.05)。与模型组相比,通心络低、中、高剂量组M1型巨噬细胞显著减少、M2型巨噬细胞数目显著增多(P<0.05)。结论通心络胶囊可促进VEGF/HIF-1α表达,使巨噬细胞向M1极化,从而促进创面愈合,提高nephrin/podocin表达水平,减轻由糖尿病足导致的肾脏负担。

缺血性疾病患者血清lncRNA PVT1和FOXM1表达水平及联合心脏磁共振延迟强化成像与预后的关系

目的 探讨缺血性疾病患者血清长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(lncRNA PVT1)和叉头框转录因子M1(FOX M1)表达水平及联合心脏钆对比剂延迟增强磁共振成像(LGE-MRI)与预后的关系。方法 选取2021年2月-2022年2月我院收治的缺血性心脏病患者118例即为研究组,随访一年根据随访过程中是否发生主要心脏不良事件(MACE),分为MACE组32例,无MACE组86例。同期选择在我院体检健康的志愿者118例为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清lncRNA PVT1的相对表达量。采用酶联免疫吸附试验(E LISA)检测FOXM1水平。受试者工作特征(ROC)曲线分析LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1对缺血性心脏病患者预后发生MACE的预测价值。结果 研究组患者DBP、SBP、TG、TC、 LDL-C、GLU水平与对照组相比显著升高,HDL-C水平显著降低(P<0.05)。与对照组相比,研究组的血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平显著升高(P<0.05)。与无MACE组相比,MACE组患者DBP、SBP、TC、LDL-C水平显著升高, HDL-C水平显著降低(P<0.05)。与无MACE组相比,MACE组患者血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平显著升高(P<0.05)。MACE组的LGE-MRI阳性数量显著高于无MACE组(P<0.)05。与LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1单独预测相比,三者联合预测MACE发生的AUC更高(Z=7.221,P<0.001;Z=7.737,P<0.001;Z=7.091,P<0.001)。结论 缺血性心脏病预后发生MACE的患者血清lncRNA PVT1和FOXM1水平呈高表达,二者联合LGE-MRI对MACE的发生有一定的预测价值。

小檗碱联合姜黄素调控M1巨噬细胞极化对动脉粥样硬化的作用机制

目的探究小檗碱联合姜黄素通过介导巨噬细胞向M1极化对动脉粥样硬化(AS)的作用及机制。方法常规培养小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7),通过脂多糖(LPS,100 ng/mL)和γ干扰素(IFN-γ)(20 ng/mL)诱导巨噬细胞RAW264.7获得M1型巨噬细胞,建立细胞模型。将细胞分为对照组、模型组、小檗碱组、姜黄素组、小檗碱+姜黄素联合治疗组。通过CCK-8方法检测小檗碱和姜黄素的处理浓度。ELISA检测各组巨噬细胞上清液M1型巨噬细胞标记物iNOS、TNF-α、CXCL9和p-STAT6/STAT6的表达水平;RT-PCR方法检测iNOS、TNF-α和CXCL9 mRNA水平;Western blot检测各组iNOS、STAT6和p-STAT6蛋白水平。此外,通过siRNA技术下调STAT6水平后,通过Western blot检测p-STAT6蛋白水平的表达;ELISA检测iNOS、TNF-α、CXCL9和p-STAT6表达水平。结果LPS和IFN-γ联合诱导M1巨噬细胞极化中,相较于其他药物浓度组比,小檗碱(25μmol/L)、姜黄素(20μmol/L)为最佳药物浓度,两者单用和联用均不能显著抑制RAW264.7细胞活力(P<0.05)。与正常组比较,模型组iNOS、TNF-α和CXCL9 mRNA和蛋白水平均升高,p-STAT6/STAT6水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,小檗碱组、姜黄素组、小檗碱+姜黄素联合治疗组中iNOS、TNF-α和CXCL9 mRNA和蛋白水平均降低,p-STAT6/STAT6水平升高,且小檗碱+姜黄素联合治疗组中变化的更加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。在小檗碱+姜黄素联合治疗组的M1型巨噬细胞中转染STAT6 siRNA后可下调p-STAT6水平,上调iNOS、TNF-α和CXCL9表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小檗碱和姜黄素对M1型巨噬细胞的活性均有抑制作用,能够减轻炎症反应。此外,小檗碱与姜黄素联合作用较单药使用更有优势,可能是通过活化STAT6发挥其主要作用机制。

miR-21及FOXM1在妊娠期高血压与子痫前期患者血清中的表达

目的探讨微小RNA-21(miR-21)及叉头框蛋白M1(FOXM1)在妊娠期高血压(GHT)与子痫前期(PE)患者中的表达及意义。方法选取妊娠期高血压疾病(HDP)患者150例,其中GHT患者112例作为GHT组、PE患者38例作为PE组,选择年龄及孕周匹配同期产检正常孕妇150例作为对照组;3组均于入组当天采集晨空腹外周静脉血4 mL,检测血清miR-21及FOXM1水平;分析GHT组及PE组患者血清miR-21与FOXM1 mRNA的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC),评估PE的影响因素;分析miR-21及FOXM1 mRNA对PE的预测价值及对妊娠结局的影响。结果PE组、GHT组血清miR-21及FOXM1 mRNA水平低于对照组,PE组低于GHT组(P<0.05);PE组、GHT组miR-21与FOXM1 mRNA均呈正相关(P<0.05);miR-21及FOXM1 mRNA是PE的独立保护因素(P<0.05);基于miR-21及FOXM1 mRNA构建的风险模型评估PE的AUC值为0.841,高于miR-21及FOXM1 mRNA单独评估的AUC值(P<0.05);PE组不良妊娠结局发生率高于GHT组(χ^(2)=4.053,P=0.044),不良妊娠结局患者血清miR-21及FOXM1 mRNA水平低于正常妊娠者(P<0.05)。结论miR-21表达降低可能会靶向下调FOXM1 mRNA表达,促进GHT与PE的发生、发展,且与不良妊娠结局有关。

circFOXM1作为新型胃癌标志物调控胃癌发生、发展的机制研究

目的分析新型胃癌标志物环状叉头框蛋白M1(circFOXM1)在胃癌发生、发展机制中的调控作用。方法选取2022年1月至2023年4月该院肿瘤科收治的60例胃癌患者作为研究对象,检测其胃癌组织及癌旁组织中circFOXM1的表达水平。根据circFOXM1的表达水平,将60例患者分为circFOXM1高表达组和circFOXM1低表达组。比较circFOXM1高表达组和circFOXM1低表达组的临床病理资料(淋巴结转移、肿瘤侵袭深度和临床分期)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹法检测GES-1、HGC-27、BGC-823、MKN-45、MKN-1细胞中circFOXM1信使RNA(mRNA)、微小RNA(miR)-182-5p mRNA与母亲信号蛋白同源物7(SMAD7)mRNA及SMAD7蛋白的表达水平。体外培养MKN-45细胞,将其随机分为对照组、circFOXM1敲低组[转染circFOXM1小干扰RNA(siRNA)质粒]、circFOXM1过表达组(转染circFOXM1过表达质粒)、共转染阴性对照组(转染空载质粒和miR-182-5p抑制剂阴性对照)、circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组(转染circFOXM1 siRNA质粒和miR-182-5p抑制剂),分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组MKN-45细胞circFOXM1 mRNA、miR-182-5p mRNA与SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白的表达水平;采用Transwell侵袭及细胞划痕试验检测各组MKN-45细胞侵袭迁移情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组MKN-45细胞增殖情况。取50只裸鼠随机分为对照小鼠组、circFOXM1敲低小鼠组、circFOXM1过表达小鼠组、共转染阴性对照小鼠组、circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,每组10只。将各组MKN-45细胞接种在对应裸鼠右腋附近背部皮下构建胃癌移植瘤模型,饲养4周后检测各组移植瘤裸鼠MKN-45细胞增殖率、肿瘤体积及肿瘤质量。将MKN-45细胞随机分为野生miR-182-5p+空载组、野生miR-182-5p+circFOXM1过表达组、突变miR-182-5p+空载组、突变miR-182-5p+circFOXM1过表达组、野生SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组、野生SMAD7+miR-182-5p mimic组、突变SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组、突变SMAD7+miR-182-5p mimic组,再按照不同方式对各组MKN-45细胞进行转染。采用荧光素酶报告试验检测各组MKN-45细胞circFOXM1对miR-182-5p、SMAD7的靶向调控。结果circFOXM1低表达组有17例患者,circFOXM1高表达组有43例患者。circFOXM1低表达组和circFOXM1高表达组患者淋巴结转移、肿瘤侵袭深度和临床分期情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MKN-45、HGC-27、BGC-823、MKN-1细胞中circFOXM1 mRNA、SMAD7 mRNA、SMAD7蛋白表达水平均高于GES-1细胞,miR-182-5p mRNA表达水平均低于GES-1细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组circFOXM1 mRNA表达水平低于circFOXM1过表达组,高于circFOXM1敲低组和circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组miR-182-5p mRNA表达水平高于circFOXM1过表达组,低于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白表达水平低于circFOXM1过表达组,高于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低组miR-182-5p mRNA表达水平高于circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白表达水平均低于circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组MKN-45细胞侵袭数、迁移率均高于circFOXM1敲低组,均低于circFOXM1过表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组MKN-45细胞侵袭数、迁移率均高于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低小鼠组MKN-45细胞增殖率低于对照小鼠组及circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,肿瘤体积及肿瘤质量均小于对照小鼠组及circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1过表达小鼠组MKN-45细胞增殖率高于对照小鼠组、肿瘤体积及肿瘤质量均大于对照小鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。野生miR-182-5p+circFOXM1过表达组相对荧光素酶活性低于野生miR-182-5p+空载组(P<0.05)。野生SMAD7+miR-182-5p mimic组相对荧光素酶活性低于野生SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组(P<0.05)。结论敲低circFOXM1可经上调miR-182-5p而抑制表达SMAD7,从而抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及其体内肿瘤生长,可作为胃癌的新型标志物。

4M1E精细化管理法在缩短门诊药房长期处方调配时间中的应用

目的探索实施长期处方政策的情况下,门诊药房采用4M1E精细化管理法在缩短门诊药品调配时间中的效果。方法选取苏州大学附属第一医院人机混合调配窗口实施前(2022年1—6月)、人机混合调配窗口实施后(2022年7—12月)处方各10000张,比较实施前后门诊药房人机混合调配窗口单张处方药品调配时间、高峰期窗口调配处方量及处方药品数、智能化设备使用情况及实施前后患者满意度。结果人机混合调配窗口实施前后,单张处方药品调配时间由每张(96.88±1401.17)s降低至(55.84±526.24)s(P<0.01);高峰时段(9:30—11:30)窗口处方调配处方量由(135.20±21.06)张·(2 h)^(-1)增加至(147.19±21.24)张·(2 h)^(-1),处方药品数由(871.74±215.61)个·(2 h)^(-1)增加至(1008.53±267.87)个·(2 h)^(-1);处方直发率及设备自动化率均大幅提高;门诊患者满意度明显高于管理前,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期处方压力下,医院门诊药房采用4M1E精细管理法后,能够大幅度缩短处方调配时间,提高患者满意度。

南美奥连特盆地白垩系Napo组Main-M1亚段沉积体系重建及油气勘探意义

厄瓜多尔奥连特盆地是南美安第斯前陆盆地群中最重要的含油气盆地之一,上白垩统Napo组Main-M1亚段是目前勘探开发的主力层位之一,其沉积环境一直存在争议,沉积体系及演化过程尚不明确。本研究基于岩心、测录井等资料,针对Main-M1亚段沉积时期的主要沉积微相类型、沉积体系及演化过程进行了研究。结果表明:研究区位于水动力条件复杂的海陆过渡环境,在东部发育潮汐三角洲,向西部逐渐过渡为浅海陆棚环境;研究区内主要识别出水下分流河道、水下分流河道间、潮汐水道、潮汐沙坝、潮汐沙坪、潮汐水道间等8类沉积微相。根据岩电特征,进一步将Main-M1亚段划分为3个小层。通过分析3个小层的岩性组合演变特征,确定在Main-M1亚段沉积时间内,Auca古隆起逐渐形成,同时挠曲作用导致相对海平面升高,3个小层在垂向上呈水体逐渐变深、潮汐三角洲前缘不断向陆地退缩的形式;基于对Main-M1亚段沉积时期潮汐三角洲—浅海陆棚沉积体系的重建,研究区东部的水下分流河道及前缘沙坝也被认为具有一定的岩性油气藏勘探潜力。

南美奥连特盆地坎潘阶碳酸盐岩建隆的识别及科迪勒拉运动早期抬升对Main-M1储集层沉积的控制作用

厄瓜多尔奥连特盆地Main-M1砂岩储集层是该盆地近年来重要的构造-岩性圈闭勘探目的层系,寻找砂体和岩性尖灭带是Main-M1砂岩勘探的关键。该盆地为晚白垩世弧后热沉降盆地和新生代前陆盆地的叠合盆地,在构造上分为西部逆冲褶皱带、中部前渊带和东部斜坡带,在前渊带发育一系列近N-S走向长轴背斜。综合观察和分析发现,在研究区内长轴背斜上生长了1个碳酸盐岩建隆,地震上具有明显的边界反射形成丘状外观和较连续的弱振幅内部反射,测井上具有厚层、近箱型低GR响应特征。该建隆表明在其沉积的坎潘阶时期,长轴背斜已经开始抬升,将背斜顶部推升至古水面附近,形成建隆局部生长的条件。压实回剥方法恢复古地貌证实,长轴背斜在坎潘阶早期开始发育,构造抬升幅度为7~10 m。由于构造抬升和建隆发育始于Main-M1沉积前,抬升古地貌可影响砂岩沉积。根据背斜上数十口已钻井Main-M1砂体厚度统计,发现背斜顶部砂岩储集层整体较发育,但古建隆顶部砂层厚度减薄或者缺失,在背斜的南部延伸段,构造顶部砂岩缺失,仅在东部侧翼富集。提出了近N-S向背斜古地貌影响Main-M1砂体沉积,使砂岩于富集于构造下倾方向的控砂模式。该模式可形成上倾尖灭型构造-岩性圈闭,从而提供了通过古地貌恢复在奥连特盆地前渊带寻找新圈闭的勘探思路。

早期短暂M1巨噬细胞在骨组织工程中的作用及应用

背景:早期短暂存在的M1巨噬细胞在骨组织工程材料植入后可以发挥有益作用,调控M1巨噬细胞产生早期适度炎症反应的策略研究逐渐广泛,在骨组织工程材料的设计中取得了许多研究进展。目的:综述早期短暂存在的M1巨噬细胞在骨组织工程中的作用,以及近年诱导激活早期短暂M1巨噬细胞策略在骨组织工程领域的应用研究进展。方法:检索收录在PubMed、万方数据库、CNKI中国期刊全文数据库2012年1月至2022年10月的相关文献,以“M1,巨噬细胞,骨免疫学,骨免疫调节,骨缺损,骨再生,炎症反应,血管生成,组织工程,生物材料”为中文检索词,以“M1,macrophage,bone,osteogenesis,osteoimmunology,angiogenesis”等为英文检索词,筛选排除与研究目的无关与重复的文献,最终选取符合标准的63篇文献进行综述。结果与结论:早期短暂存在的M1巨噬细胞在骨组织工程中具有促进血管形成、促进骨髓间充质干细胞成骨分化以及促进M2表型转化的重要作用。诱导激活早期短暂M1巨噬细胞策略能够以符合早期自然骨愈合规律的方式调控局部免疫微环境进而促进骨缺损修复,策略包括通过改变骨组织工程材料的理化性质促进M1巨噬细胞产生适当炎症反应,递送细胞因子、微小RNA或生物活性离子实现M1向M2巨噬细胞顺序极化,控释抗炎物质实现M1巨噬细胞介导的早期炎症反应的保持。

电针肾俞穴对肾阳虚近视豚鼠视网膜M1受体表达的影响

目的:观察电针肾俞穴对肾阳虚近视豚鼠生长发育、视力及视网膜毒蕈碱样乙酰胆碱(mAChR)M1受体表达的影响,为肾阳虚近视的治疗提供依据。方法:将60只豚鼠随机分为正常对照(NC)组、透镜诱导近视(LIM)组、肾阳虚近视假穴(KYDM+SHAM)组、肾阳虚近视电针(KYDM+EA)组,每组15只。NC组不采取干预措施;LIM组豚鼠右眼配戴-6.00 D透镜构建近视模型;其余两组在戴镜基础上连续2周腹腔注射氢化可的松(剂量10 mg/kg)构建肾阳虚近视模型,造模2周后,KYDM+EA组电针豚鼠双侧肾俞穴,KYDM+SHAM组电针豚鼠臀部假穴,共4周。观察造模不同时间各组豚鼠一般情况,测量体质量和肛温,检测双眼屈光度和眼轴长度,检测血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、睾酮(T)、雌二醇(E_(2)),并在造模结束后采用定量聚合酶链反应(Q-PCR)、免疫组织化学和蛋白质印迹法检测视网膜M1受体mRNA和蛋白表达水平。结果:造模2周后,KYDM+SHAM组和KYDM+EA组豚鼠出现毛发枯槁、无光泽及消瘦、拱背眯眼、倦怠懒动、畏寒肢冷等肾阳虚症状,血清FT3、FT4、T水平低于LIM组,E_(2)高于LIM组,体质量、肛温以及右眼屈光度均低于LIM组,眼轴长度长于LIM组,差异均有统计学意义(P<0.05)。电针4周后,KYDM+EA组豚鼠肾阳虚症状有效改善,血清激素水平趋于正常,与KYDM+SHAM组相比,体质量、肛温、右眼屈光度均明显升高,右眼眼轴长度缩短,视网膜M1受体mRNA和蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与LIM组相比,KYDM+EA组豚鼠体质量增加,差异有统计学意义(P<0.05);肛温、右眼屈光度和眼轴长度、视网膜M1受体mRNA和蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针肾俞穴有利于促进肾阳虚近视豚鼠生长发育恢复及视力改善,机制可能与降低视网膜中M1受体表达有关。

LPS诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响。方法 将Balb/c雌性小鼠随机分为对照组和实验组。Renca细胞皮下建模,待肿瘤体积生长至50mm3时瘤旁注射生理盐水(100μl/只,1次/2d)或LPS(100μg/只,1次/2d),采用流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞M1型极化水平。将小鼠肿瘤细胞系(ML-1、MC38、Renca)分成三组:空白组(完全培养基加入50%DMEM基础培养基)、对照组(完全培养基加入50%巨噬细胞培养基上清液)和实验组(完全培养基加入50%LPS预处理的巨噬细胞培养基上清液)。采用细胞计数试剂-8(cellcountingkit-8,CCK-8)实验检测肿瘤细胞增殖情况;采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。结果 经LPS处理后肿瘤相关巨噬细胞M1型比例增多(P<0.001),从而增强其抗肿瘤功能;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可显著抑制肿瘤细胞的增殖(Renca:P=0.023;ML-1:P=0.045);LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞周期G0/G1(MC38:P=0.011;ML-1:P=0.022)或S期(Renca:P=0.022)阻滞,进而抑制细胞分裂;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞凋亡(Renca:P=0.04;ML-1:P=0.007)。结论 LPS可通过诱导巨噬细胞M1型极化发挥抗肿瘤功能。

泽泻汤基于PI3K/AKT通路调节巨噬细胞M1/M2极化平衡机制研究

目的:探讨泽泻汤(ZXT)对巨噬细胞M1/M2极化平衡的影响及可能的作用机制。方法:体内使用西式饮食(WD)诱导脂代谢紊乱小鼠模型,体外通过LPS/IL-4诱导RAW264.7细胞M1/M2型巨噬细胞模型,设置空白组、模型组、ZXT组。采用免疫荧光染色观察脂肪组织和RAW264.7细胞M1、M2型巨噬细胞标志物荧光强度;Western blot检测p-AKT、AKT、COX-2蛋白水平;qPCR分析M1、M2型巨噬细胞标志基因mRNA水平;ELISA测定IL-1β、IL-10分泌量;Griess法检测NO含量;Docking分析泽泻、白术活性成分与PI3K蛋白的结合情况。结果:与WD组相比,ZXT组CD11c表达显著减少,CD206表达量显著上调;ZXT逆转了LPS诱导的CD80表达升高,下调M1型巨噬细胞标志基因iNOS等mRNA水平,降低COX-2蛋白表达,抑制IL-1β分泌;ZXT促进IL-4诱导的CD206表达,上调M2型巨噬细胞标志基因Arg-1等mRNA水平及IL-10的分泌;ZXT逆转了LPS引起的NO释放增加;ZXT给药后体内外p-AKT/AKT蛋白水平均上升;Docking结果显示泽泻、白术中多个活性成分可与PI3K蛋白形成氢键稳定结合。结论:泽泻汤调节巨噬细胞M1/M2极化平衡,其作用机制可能与调控PI3K/AKT通路有关。

罗汉果苷V调控高糖状态巨噬细胞M1极化促进骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:糖尿病微环境会造成巨噬细胞过度M1极化,这种高糖炎症状态会抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而影响糖尿病骨缺损的愈合。研究表明罗汉果苷Ⅴ具有抗炎、抗氧化、降血糖的作用,但其能否调节高糖炎症状态下巨噬细胞M1极化及骨髓间充质干细胞的成骨分化尚不清楚。目的:探讨罗汉果苷Ⅴ在高糖炎症状态下调节巨噬细胞M1型极化对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:构建糖尿病C57BL/6小鼠模型,从正常和糖尿病小鼠分离骨髓来源巨噬细胞,分别培养于低糖和高糖培养基。使用脂多糖和干扰素γ作为炎症刺激诱导骨髓来源巨噬细胞的M1型极化,同时以160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,用流式细胞术检测F4/80^(+)CD86^(+)细胞比例,qRT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素1β、白细胞介素6的mRNA表达水平,ELISA检测骨髓来源巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α水平。分离C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,分别使用低糖或高糖成骨诱导液诱导成骨分化,添加M1型巨噬细胞条件培养基作为炎症刺激,以及320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,成骨诱导14 d后采用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关因子2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达水平,成骨诱导21 d后进行茜素红染色及定量分析。结果与结论:①流式细胞术结果显示320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的F4/80^(+)CD86^(+)细胞比例明显低于高糖炎症对照组(P<0.05);②qRT-PCR结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素6的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05),320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组白细胞介素1β的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);③ELISA结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的肿瘤坏死因子α分泌水平较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);④320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预后,高糖炎症状态下骨髓间充质干细胞的钙盐沉积增加(P<0.05),且碱性磷酸酶、Runt相关因子2和骨桥蛋白的mRNA相对表达量增加(P<0.05)。结果表明,罗汉果苷Ⅴ可通过抑制高糖炎症状态下骨髓来源巨噬细胞的M1型极化及炎症因子表达,促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

AFM1劈裂适配体的识别能力研究

本研究以黄曲霉毒素M1为研究对象,采用劈裂适配体的方式,克服适配体构象不稳定造成的灵敏度不高的问题,利用电化学方法研究劈裂适配体的识别能力及特异性,并通过圆二色谱初步探究结合机制。结果表明,将适配体核苷酸链按照1:1进行劈裂得到的识别效果最佳,并且对黄曲霉毒素M1具有较高的特异性。劈裂适配体后单独两个片段与AFM1作用后圆二色谱图没有改变,正峰强度明显增大,负峰移动并且强度增大,证明适配体构象发生改变。基于劈裂适配体可以改善方法的灵敏度,通过对完整适配体进行劈裂,得到了构建传感器的更佳识别元件。本研究为提高适配体快速检测方法的灵敏度提供了一种新思路。

老年心力衰竭并发肺炎患者血清FOXM1和IGF2表达水平及与预后价值研究

目的探究血清叉头盒蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)和胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)表达对老年心力衰竭合并肺炎患者预后的预测价值。方法将邯郸市中心医院2021年3月~2022年6月收治的126例老年心力衰竭并发肺炎患者设为病例组,并根据随访情况将122例患者分为预后不良组(n=33)和预后良好组(n=89),另选取该院同期126例健康体检者为对照组。检测两组(病例组和对照组)血清FOXM1和IGF2水平,检测病例组用力肺活量(forced vital capacity,FVC)和第一秒用力呼容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)。采用Spearman分析法分析老年心力衰竭并发肺炎患者血清FOXM1和IGF2水平与心功能分级的相关性;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清FOXM1和IGF2水平对老年心力衰竭并发肺炎患者预后的预测价值。结果与对照组比较,病例组血清FOXM1(2.39±0.55 vs 1.06±0.21)和IGF2(71.33±7.96pg/ml vs 47.82±5.14pg/ml)水平明显较高,差异有统计学意义(t=25.358,27.581,均P<0.05);与预后良好组比较,预后不良组血清FOXM1(3.87±1.06 vs 1.95±0.51)和IGF2水平(85.88±9.54pg/ml vs 69.14±8.73pg/ml)明显较高,差异具有统计学意义(t=13.453,9.174,均P<0.05);预后良好组和预后不良组心功能分级比较差异有统计学意义(χ^(2)=7.120,P<0.05),且与预后不良组比较,预后良好组FEV1(1.24±0.32L vs 1.08±0.25L)和FEV1/FVC(55.46%±5.77%vs 52.30%±5.38%)明显较高,差异有统计学意义(t=2.592,2.735,均P<0.05);老年心力衰竭并发肺炎患者血清FOXM1水平和IGF2水平与心功能分级呈显著正相关(r=0.496,0.517,均P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清FOXM1单独预测老年心力衰竭并发肺炎患者预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.854(95CI%:0.779~0.912),其敏感度、特异度分别为75.76%,86.52%,最佳截断值为2.75;IGF2单独预测老年心力衰竭并发肺炎患者预后的AUC为0.874(95CI%:0.802~0.927),其敏感度、特异度分别为72.73%,85.39%,最佳截断值为78.30 pg/ml;二者联合预测老年心力衰竭并发肺炎患者预后的AUC显著大于血清FOXM1和IGF2单独诊断的AUC(Z=2.413,2.737,P=0.006,0.016)。结论血清FOXM1和IGF2水平在老年心力衰竭并发肺炎患者中升高,且二者联合检测对患者预后具有较高的预测价值。

乙型肝炎病毒抑制M1巨噬细胞TLR4、NLRP3及下游因子促进免疫逃逸

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)抑制M1巨噬细胞促进免疫逃逸的机制,为抗病毒治疗提供靶点和策略。方法:人单核细胞系THP-1以PMA+LPS+IFN-γ诱导为M1巨噬细胞。通过细胞形态,流式细胞术及RT-qPCR检测CD68、CD86、HLA-DR及M1巨噬细胞功能性分子IL-1β、IL-6、TNF-α表达,以鉴定M1巨噬细胞。HBV稳定复制细胞系HepG2.2.15与M1巨噬细胞共培养,qPCR检测HBV-DNA的表达;流式细胞术检测CD68、CD86与HLA-DR表达;RT-qPCR与Western blot测定M1巨噬细胞功能相关分子TLR4、NLRP3、Caspase-1、pro-caspase-1、caspase-1 p20、IL-1β、IL-18的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot测定凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3的表达。结果:成功诱导THP-1分化为M1巨噬细胞;M1巨噬细胞抑制HBV复制(P<0.05);HBV抑制M1巨噬细胞的CD68、CD86与HLA-DR的表达(P<0.01);HBV抑制M1巨噬细胞的TLR4、NLRP3,Cas-pase-1,caspase-1 p20、IL-1β、IL-18的表达(P<0.01);HBV诱导M1巨噬细胞凋亡(P<0.05)。结论:HBV通过抑制M1巨噬细胞及其功能分子TLR4、NLRP3及下游因子,减少炎症因子合成及分泌,诱导凋亡,进而促进免疫逃逸,造成HBV在体内持续存在并复制。

抗黄曲霉毒素M1纳米抗体的筛选与初步鉴定

黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)对人类和动物具有致癌性、诱变性、致畸性等,广泛存在于哺乳动物乳汁及其乳制品中。因此,制备特异性强、灵敏度高的抗体来检测AFM1至关重要。该研究以AFM1-BSA为抗原免疫双峰驼,采血分离淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,通过巢式PCR获得重链可变区(variable domain of heavy chain,VHH),与pComb3XSS载体连接电击转化至Escherichia coli TG1,构建AFM1特异性噬菌体展示文库。以AFM1-OVA为靶向抗原,使用4轮酸洗脱和竞争洗脱相结合的策略对文库进行淘选,并对抗AFM1纳米抗体进行初步鉴定,最后预测了精准的三维模型结构。结果显示,抗AFM1纳米抗体文库库容量为2.27×10^(9)CFU,多样性丰富,插入率为100%。经淘选共获得6条独特序列的纳米抗体。其中VHH-M4和VHH-M6具有较高的灵敏度,初步测定半抑制浓度分别为0.415 ng/mL和1.877 ng/mL,线性范围分别为0.141~1.652 ng/mL和0.800~3.811 ng/mL。一级和二级结构结果显示VHH-M4和VHH-M6均为亲水性蛋白,框架区(framework region,FR)和互补决定区(complementarity determining region,CDR)区符合典型纳米抗体的结构特征。该研究为AFM1免疫学检测提供核心元件,并为探究AFM1与VHH的分子结合机制奠定基础。

基于纳米抗体建立icELISA检测乳制品中黄曲霉毒素M1

纳米抗体(nanobody,Nb)具有稳定性高、特异性强、易于表达等优势,已经成为小分子免疫分析的重要工具。为了监测乳制品中黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的污染情况,以先前从双峰驼AFM1免疫文库中淘选得到的抗AFM1型纳米抗体M6为研究对象,评估其理化性质并建立间接竞争酶联免疫吸附测定法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。优化反应体系中封闭方法、甲醇溶液、pH值和离子强度等参数后,建立竞争抑制标准曲线,并进行方法学验证特异性和准确性。结果表明,Nb-M6具有良好的亲和力和热稳定性;Nb-icELISA的检测限(limit of detection,LOD)为0.111 ng/mL,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为1.498 ng/mL,乳制品加标回收率为89.8%~104.1%,与高效液相色谱法的检测结果趋于一致。该方法操作简单、便捷,可应用于乳制品中AFM1的初步批量筛查。

FOXM1靶向HMMR对骨肉瘤细胞凋亡和自噬影响

目的探讨叉头盒M1(FOXM1)转录因子通过靶向透明质酸介导的运动受体(HMMR)对骨肉瘤(OS)细胞凋亡和自噬的影响。方法使用慢病毒载体构建敲低FOXM1和过表达HMMR的OS细胞系,将转染空载慢病毒的细胞作为对照组,转染sh-FOXM1慢病毒的细胞作为敲低FOXM1组,转染sh-FOXM1慢病毒和OE-HMMR慢病毒的细胞作为过表达HMMR组。采用Western blot方法检测正常成骨细胞(hFOB1.19)和OS细胞(U-2OS)中FOXM1蛋白的表达;通过流式细胞术检测对照组、敲低FOXM1组和过表达HMMR组U-2OS细胞的凋亡率;采用Western blot方法检测对照组和敲低FOXM1组OS细胞中HMMR蛋白、自噬蛋白(LC3Ⅰ/Ⅱ)、凋亡相关蛋白(Cleaved-Caspase3、Bax)的表达以及过表达HMMR组OS细胞中自噬蛋白(LC3Ⅰ/Ⅱ)的表达。结果FOXM1在U-2OS细胞中的表达明显高于hFOB1.19细胞(t=38.780,P<0.005)。与对照组相比,敲低FOXM1组U-2OS细胞凋亡率显著增加(t=3.517,P<0.05),Cleaved-Caspase3、Bax、LC3Ⅰ/Ⅱ和HMMR蛋白表达显著下降(t=3.155~6.334,P<0.05),而过表达HMMR恢复了敲低FOXM1导致的凋亡率增加和自噬抑制(F=31.00、160.20,P<0.05)。结论FOXM1敲低通过降低HMMR蛋白的表达促进OS细胞凋亡和抑制OS细胞自噬。