人工合成家蝇抗真菌肽MAF-1A对白色念珠菌致病性的影响

目的观察和研究人工合成家蝇抗真菌肽MAF-1A对白色念珠菌致病性的影响。方法以白色念珠菌ATCC10231为效应菌,检测MAF-1A在MIC浓度下不同时间白色念珠菌的孢子萌发率及芽管形成率,瑞氏染色后显微镜计数,观察MAF-1A预处理后及干预下,酵母相和菌丝相白色念珠菌定植人口腔黏膜上皮细胞能力变化;分别设立氟康唑(fluconazole,FLC)和PBS为阳性对照和阴性对照。结果 MAF-1A作用白色念珠菌后,孢子萌发率及芽管形成率小于阳性对照和阴性对照组(P<0.05);MAF-1A可减少白色念珠菌酵母相细胞或菌丝相细胞对人口腔黏膜上皮细胞的粘附数,且减少酵母相细胞粘附作用强于菌丝相细胞(P<0.05);MAF-1A预处理白色念珠菌后,对人口腔黏膜上皮细胞粘附数少于MAF-1A干预组的细胞粘附数(P<0.05)。结论 MAF-1A可通过抑制白色念珠菌孢子萌发和芽管的形成以及有效降低白色念珠菌对人口腔黏膜上皮细胞粘附能力,从而影响白色念珠菌的致病能力。

家蝇幼虫血淋巴抗真菌肽MAF-1的分子特性分析及其抗真菌作用

制备家蝇Musca domestica幼虫血淋巴中的抗真菌肽,对其分子特性及抗真菌机制进行研究。通过C18柱固相萃取、反相高效液相色谱相结合的方法,成功制备到家蝇幼虫血淋巴抗真菌肽MAF-1。SDS-PAGE分析结果表明,MAF-1的分子量为17.136kDa。通过圆二色谱测出水溶液中MAF-1主要以α螺旋及β折叠为主。扫描电镜观察结果显示,MAF-1作用白假丝酵母菌Candida albicans1h后,部分真菌出现表面凸凹不平,细胞结构模糊;随着作用时间的延长,表面形成很明显的凹陷,皱缩,个别菌体破裂,内容物外泄,病变真菌发生率高于对照组。单细胞凝胶电泳(single-cell gel electrophoresis,SCGE)结果显示,正常对照组的真菌呈现典型的圆形,而实验组则出现明显的拖尾现象即形成"彗星"样细胞特征,细胞迁移距离明显高于对照组。SDS-PAGE图谱显示,MAF-1作用后的白假丝酵母菌菌体蛋白谱带一些条带明显变浅,条带数下降,甚至消失。结果提示MAF-1可能具有独特的抗真菌机制。

人工合成家蝇抗真菌肽MAF-1A体外抗真菌效果及扫描电镜观察

目的探讨人工合成家蝇抗真菌肽MAF-1A结构特点及其抗真菌效果。方法运用生物信息学软件分析人工合成MAF-1A的结构特征;采用液体微量稀释法、MTT法和沙氏琼脂平板培养计数法分别检测MAF-1A对白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌和新生隐球菌的抗菌活性及最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并绘制时间-杀菌曲线;采用扫描电镜观察在MIC浓度下对白色念珠菌超微结构的影响。结果生物信息学软件分析结果显示MAF-1A为一阳离子多肽,分子量3022.5Da,pI值9.23,碱性氨基酸含量26.9%,带2个正电荷,结构较为稳定,脂肪指数71.54,其总平均疏水性数-1.081,预测为一非跨膜多肽,二级结构以α螺旋结构为主的线状肽结构。MAF-1A对白色念珠菌敏感株及耐药株均显示出抗菌活性,对检测酵母菌的MIC值在0.1~0.8mg/ml、MBC值在0.2~0.9mg/ml;杀菌曲线显示,MIC浓度MAF-1A作用真菌2h至14h逐渐发挥杀菌活性。扫描电镜显示MAF-1A作用白色念珠菌后形态发生改变,菌体表面粗糙,可见细胞穿孔样变,严重病变细胞表面呈碎片状,刺状突起,胞质流失至细胞皱缩死亡。结论 MAF-1A为阳离子α-螺旋结构线性多肽,对常见的致病性念珠菌包括耐药性菌株具有抗菌活性,可通过破坏真菌细胞表面结构发挥杀菌作用。

抗真菌肽MAF-1A体外对近平滑念珠菌生物膜形成能力的影响、与生物膜结合及抑菌情况观察

目的观察不同浓度抗真菌肽MAF-1A处理的近平滑念珠菌F1356生物膜形成能力及生物膜细胞活性。方法取F1356菌体适量分5份,其中4份分别加入终浓度为0.3、0.6、0.9、1.2 mg/mL的MAF-1A,等量无菌水处理为空白对照,另取适量F1356分5份,其中4份分别加入0.3、0.6、0.9、1.2 mg/mL的氟康唑(FLC),设置无菌水处理为空白对照,经培养24 h时观察F1356生物膜形成能力(OD490nm值),倒置显微镜下观察F1356生物膜中的菌体密度及膜致密结构。体外培养F1356使其形成生物膜结构,加入0.6 mg/mL的FITC-MAF-1A培养,分别于培养1、3、6、12、24 h采用荧光标记技术观察MAF-1A与F1356生物膜结合情况。将F1356菌体分为5份,其中4份分别加入终浓度分别为0.3、0.6、0.9、1.2 mg/mL的MAF-1A,加入无菌水者为空白对照,培养24 h后通过XTT细胞活性检测技术检测F1356生物膜细胞活性(OD450nm值)。结果与空白对照比较,0.6、0.9、1.2 mg/mL的MAF-1A处理的F1356生物膜形成能力降低(P≤0.05),镜下可见F1356生物膜中菌体密度减少,膜致密结构被破坏;与空白对照比较,0.6、0.9、1.2 mg/mL的FLC处理后F1356生物膜形成能力降低(P≤0.05),镜下可见0.6、0.9、1.2 mg/mL的FLC处理的F1356生物膜中菌体密度减少,膜致密结构被破坏。随培养时间延长,镜下可见黄绿色荧光信号逐渐增多,培养24 h时可观察到生物膜内细胞存在大量黄绿色荧光信号。随MAF-1A浓度增加,F1356生物膜细胞活性逐渐降低(P均≤0.05)。与对照组比较,0.3、0.6、0.9、1.2 mg/mL FLC处理的F1356生物膜活性降低(P均≤0.05),与0.3 mg/mL FLC比较,0.9、1.2 mg/mL FLC处理的F1356生物膜活性升高(P均≤0.05)。结论MAF-1A可抑制F1356的生物膜形成,且MAF-1A可与F1356生物膜结合进入生物膜细胞内聚集,2MIC浓度(0.6 mg/mL)即可抑制F1356生物膜的细胞活性。

家蝇抗菌肽MAF-1A体外抗甲型流感病毒活性及机制研究

目的探讨家蝇抗菌肽MAF-1A体外抗甲型流感病毒(IAV)活性及其潜在机制。方法通过观察CPE、MTT法及qRT-PCR评价MAF-1A体外抗IAV活性,采用MTT法测定MAF-1A对MDCK细胞的毒性;利用透射电镜(TEM)技术、血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验进一步分析MAF-1A抗IAV的作用机制。结果MAF-1A对IAV的半数有效浓度(EC50)为(89.8±2.97)μg/mL,而对MDCK细胞的毒性较小;MAF-1A可直接破坏IAV形态结构的完整性;浓度为1.56μg/mL的MAF-1A即可抑制IAV引起的红细胞凝集;对神经氨酸酶具有抑制作用,IC50为(134.7±10.31)μg/mL。结论抗菌肽MAF-1A具有体外抗IAV活性,除能直接破坏IAV的结构外,还可能通过与血凝素HA1亚基结合、抑制神经氨酸酶的活性而阻止IAV的感染,提示MAF-1A具有多靶点抗IAV的作用。

家蝇抗菌肽MAF-1A的串联表达与抗白念珠菌体外活性检测

目的构建家蝇抗菌肽MAF-1A基因原核串联表达体系,在大肠杆菌中表达具有抗菌活性的MAF-1A。方法根据大肠杆菌密码子的偏嗜性进行密码子优化,设计并合成含有5个拷贝的MAF-1A串联基因序列;将合成的串联基因序列克隆到表达载体pET28a并转化大肠杆菌Roseeta(DE3),应用IPTG诱导表达5×MAF-1A串联重组蛋白;通过SDS-PAGE电泳、Western Blot对表达产物进行分析;用肠激酶专一性切割经Ni-NTA纯化后的5×MAF-1A重组串联蛋白,得到MAF-1A单体;采用微量稀释法检测MAF-1A单体对白念珠菌的体外抗菌活性。结果 5×MAF-1A蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达,28℃、0.8mmol/L IPTG诱导12h可达最大表达量;酶切后的抗菌肽MAF-1A单体对白念珠菌的MIC和MBC分别为0.5mg/mL、1.0mg/mL。结论成功构建MAF-1A原核串联表达系统,重组表达的MAF-1A对白念珠菌具有较高的抑杀活性。

家蝇抗真菌肽MAF-1原核表达条件优化及活性验证

目的优化家蝇抗真菌肽(MAF-1)原核表达条件及重组蛋白的活性验证。方法利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Quantity One凝胶电泳图像分析系统研究不同的诱导温度、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度和诱导时间对融合蛋白表达的影响;融合蛋白用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行蛋白纯化,切除His标签后进行活性验证。结果在加入浓度为25μmol/L的IPTG,34℃诱导18 h,融合蛋白的表达量最高;融合蛋白纯化后浓度为0.706 mg/m L,其最低抑杀白色念珠菌的浓度为70μg/m L。结论成功获得重组融合蛋白的最佳表达条件,并纯化目的蛋白,切除His标签后的目的蛋白具有抗真菌活性。

家蝇抗菌肽基因MAF-1的表达模式及响应微生物刺激分析

Musca domestica antifungal peptide-1(MAF-1)是家蝇体(Musca domestica)内组成型表达的一种独特且具有良好抑菌效果的抗真菌肽。本研究利用实时荧光定量PCR技术分析MAF-1在家蝇不同发育时期、不同组织器官及家蝇3龄幼虫经微生物(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌)刺激后的表达特征。结果显示,MAF-1在家蝇各个发育时期的相对表达量依次为:2龄幼虫>1龄幼虫>3龄幼虫>雄蝇成虫>卵>雌蝇成虫>蛹;MAF-1在家蝇3龄幼虫各组织器官的相对表达量依次为:脂肪体>唾液腺>气管>肠道>体壁。通过超微量显微注射法向家蝇3龄幼虫体内注入病原微生物,其中金黄色葡萄球菌刺激后MAF-1的表达量呈下降趋势;大肠杆菌刺激后MAF-1的表达量先降低后升高再降低;白色念珠菌刺激后MAF-1的表达量先升高然后逐渐下降。本研究从RNA水平上说明了MAF-1的表达随着家蝇幼虫的生长发育阶段变化,对不同微生物刺激的响应具有不同的特征。同时MAF-1还是家蝇抵抗病原微生物感染的重要天然免疫分子,这为进一步研究其参与家蝇天然免疫防御过程提供了基础。

Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞移植治疗1型糖尿病大鼠的效果

目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染BMSCs诱导为IPCs,链脲佐菌素(STZ)制备45只1型糖尿病SD大鼠模型,BMSCs组(15只)肾被膜下移植2×10^(6) BMSCs,IPCs组(15只)大鼠肾被膜下移植2×10^(6) IPCs,sham-operation组(15只)大鼠肾被膜下注入等量生理盐水,另取15只健康SD大鼠肾被膜下注入等量生理盐水作为normal组。监测各组大鼠移植第0、7、14、21、28 d空腹血糖及体重;第21天对各组大鼠均行葡萄糖耐量试验;第28天取各组大鼠肾脏组织进行免疫组化。结果BMSCs和IPCs组大鼠血糖随时间下降,移植第21天两组大鼠空腹血糖低于移植第0天,且均低于同期sham-operation组(P<0.05),移植第28天IPCs组大鼠空腹血糖低于BMSCs组(P<0.05)。糖尿病大鼠中IPCs组和BMSCs组腹腔葡萄糖耐量实验曲线下面积小于sham-operation组,且IPCs组曲线下面积最小(P<0.05)。BMSCs组和IPCs组大鼠肾脏组织可见棕色荧光的胰岛素表达,且IPCs组胰岛素荧光光密度高于BMSCs组(P<0.05)。结论Pdx-1-Ngn3联合MafA诱导BMSCs形成的IPCs移植后在糖尿病大鼠体内可降低糖尿病大鼠的空腹血糖。

激活蛋白-1家族成员JunB、c-Maf、c-Fos、c-Jun在初诊多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的探讨激活蛋白-1(AP-1)家族成员JunB、c-Maf、c-Fos、c-Jun在初诊多发性骨髓瘤(MM)中的表达及临床意义。方法选取40例初诊MM患者,应用实时荧光定量PCR检测患者骨髓中JunB、c-Maf、c-Fos、c-Jun mRNA表达水平,比较不同性别、国际分期系统(ISS)分期的MM患者上述各项指标水平;分析MM患者JunB、c-Maf、c-Fos、c-Jun mRNA表达水平与临床指标[年龄、血清β_(2)-微球蛋白、血红蛋白、清蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、血肌酐、血钙、骨髓浆细胞比例]水平间的相关性。结果不同性别、不同ISS分期MM患者JunB、c-Maf、c-Fos、c-Jun mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MM患者JunB mRNA表达水平与GLO水平呈正相关(r=0.320,P=0.044);c-Maf mRNA表达水平与GLO水平呈正相关(r=0.350,P=0.027),与ALB水平呈负相关(r=-0.316,P=0.047);c-Fos mRNA表达水平与血钙水平呈正相关(r=0.317,P=0.046);c-Jun mRNA表达水平与各项临床指标水平均无相关性(P>0.05)。结论AP-1家族成员JunB、c-Maf、c-Fos、c-Jun mRNA表达水平与MM患者性别、ISS分期无明显关系;而JunB、c-Maf mRNA表达水平与MM患者蛋白合成能力相关,c-Fos mRNA表达水平与MM患者溶骨程度相关,JunB、c-Fos、c-Maf在MM的发生及发展中可能发挥了一定作用。

胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达变化及其临床意义

目的观察胃癌组织长链非编码RNA(lncRNA)碱性亮氨酸拉链家族转录因子V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G-反义核糖核酸1(MAFG-AS1)、微小RNA-143-3p(miR-143-3p)表达变化,并探讨二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择胃癌患者105例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR技术检测lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达。收集胃癌患者临床病理资料和术后随访资料,分析胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果胃癌组织lncRNA MAFG-AS1相对表达量高于癌旁正常组织,miR-143-3p相对表达量低于癌旁正常组织(P均<0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与肿瘤组织分化程度、浸润深度、pTNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达与miR-143-3p表达呈负相关关系(r=-0.699,P<0.05)。以lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p相对表达量的均数为临界值,将患者分为lncRNA MAFG-AS1高表达者55例与lncRNA MAFG-AS1低表达者50例、miR-143-3p高表达者48例与miR-143-3p低表达者57例。lncRNA MAFG-AS1高表达者3年总生存率低于lncRNA MAFG-AS1低表达者,miR-143-3p高表达者3年总生存率高于miR-143-3p低表达者(χ^(2)分别为4.783、5.383,P均<0.05)。结论胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达上调、miR-143-3p表达下调,二者表达变化与胃癌恶性生物学行为和患者预后不良有关。

采用理想吸附溶液理论和维里方程对MAF stu-1(Zn/Cd)吸附CO_(2)的计算研究

新型双金属MAF stu-1(Zn/Cd))吸附剂具有较好的CO_(2)吸附性能及循环稳定性,其CO_(2)吸附容量最大可达93 cm^(3)/g,但缺乏该吸附剂对于非纯CO_(2)二元混合气的分离性能和再生性能的研究.采用理想吸附溶液理论和维里方程对金属Cd改性后吸附剂MAF stu-1的混合气体分离性能和脱附再生性能进行拟合计算,结果表明,MAF stu-1(w(Cd)=5%)吸附剂的CO_(2)吸附热约为36 kJ/mol,远小于工业上CO_(2)吸附剂;且当V(CO_(2))∶V(N_(2))=15∶85时,该吸附剂对CO_(2)/N_(2)的吸附选择性达134,较未改性前MAF stu-1(MOF)吸附剂的吸附选择性提高14.5%.通过理想吸附溶液理论和维里方程对金属Cd改性吸附剂MAF stu-1的分离性能和脱附再生性能进行拟合计算,可为吸附剂MAF stu-1(w(Cd)=5%)的高吸附性能研究提供理论依据.

MafA真核表达载体的构建及在人肝癌细胞中的表达

目的:构建肌腱膜纤维肉瘤肿瘤基因同系物A(MafA)真核表达载体pEGFP-N2/MafA,pEGFP-C1/MafA,观察MafA在人肝癌细胞HepG-2细胞内的表达。为研究Mafa基因功能和作用机制奠定基础。方法:提取胰腺总RNA,经RT-PCR获得MafA基因片段,在两端分别引入Hind Ⅲ和Sal Ⅰ的酶切位点,重组至有增强绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N2,pEGFP-C1中,用脂质体方法转染至人肝癌细胞HepG-2细胞中,通过荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,通过RT-PCR检测MafA基因和insulin Ⅱ基因的表达。结果:通过RT-PCR获取了MafA基因并成功克隆入载体,转染的细胞有绿色荧光蛋白表达及MafA基因表达,但没检测到insulin Ⅱ基因表达。结论:成功构建质粒pEGFP-N2/MafA和pEGFP-C1/MafA,并成功表达MafA基因,但没有insulin Ⅱ基因的表达。

Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞

目的探讨胰十二指肠同源盒1（pancreaticandduodenalhomeobox1，Pdx．1）、神经元素3（neurogenin3，Ngn3）联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A（v—marmuscu—loaponeuroticfibrosarcomaoncogenehomologA，MafA）诱导大鼠骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSC）分化为胰岛样细胞（insulin．producingcells，IPC）的机制。方法通过贴壁培养法纯化BMSC，分为4组（A：未感染组；B：MafA感染组；C：Pdx-1-Nsn3感染组；D：联合感染组），高糖条件下培养7d，荧光显微镜观察其感染效率。Western印迹检测各组细胞Pdx．1、NgIl3和MafA表达情况，RT-PCR检测各组胰岛素2、葡萄糖激酶、巢蛋白、胰升糖素及Pdx．1表达水平，ELISA法检测各组胰岛素分泌情况。结果分离的细胞表面高表达CD44、CDl05，而低表达CD34。诱导过程中各感染组BMSC逐渐聚集并形成细胞团块，双硫棕染色呈红棕色；各组在感染第0、3、5、7、9天胰岛素分泌水平逐渐提高，且联合感染组升高最为明显（P〈0．05）；与A组相比，B、C和D组Pdx-1、胰岛素2、胰升糖素及葡萄糖激酶基因表达明显上调（P〈O．05）；与B组相比，C组Pdx-1表达上调，D组Pdx-1和胰岛素2表达上调，胰升糖素表达下调（P〈0．05）；与C组相比，D组胰升糖素表达上调（P〈0．05）。结论Pdx-1、Ngn3联合MafA共同感染BMSC可分化为IPC。

胰腺十二指肠同源异型盒-1、神经源性分化因子-1及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A三基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的 观察胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源异型盒-1（PDX-1）、神经源性分化因子-1（NeuroD1）及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A（MafA）对小鼠诱导多潜能干细胞（iPS）分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法 重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-绿色荧光蛋白（GFP）、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合转染小鼠iPS细胞,体外培养后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测胰岛β细胞功能基因表达,免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同糖浓度下胰岛素的分泌量。将胰岛素分泌细胞移植到糖尿病小鼠肝脏,免疫组织化学检测其在体内胰岛素的表达,葡萄糖耐量试验及空腹血糖监测评估移植细胞在糖尿病小鼠体内的功能发挥。结果 三基因转染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛素分泌细胞,RT-PCR结果显示其胰岛β细胞功能基因的表达与小鼠胰岛β细胞株MIN6相似,免疫荧光检测见细胞内有胰岛素合成,ELISA检测结果显示细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。当葡萄糖浓度为30 mmol/L,胰岛素释放量最高为（0.309 3±0.017 9）ng。免疫组织化学染色显示移植细胞注射区域的肝实质内可见相对集中的棕黄色染色,表明移植细胞有胰岛素分泌。糖耐量试验及空腹血糖监测显示移植细胞能够控制糖尿病小鼠的血糖水平,在体内发挥良好的治疗作用。结论 胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三基因能使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞,在体内发挥一定的治疗作用。

激活蛋白-1家族JunB、c-Jun、c-Maf、c-Fos在多发性骨髓瘤中的表达

目的观察转录因子激活蛋白-1(AP-1)家族成员JunB、c-Jun、c-Maf、c-Fos在初诊多发性骨髓瘤(MM)中的表达情况。方法选取我院2019年11月-2020年12月收治的初诊MM患者26例作为MM组,另选同期14例骨髓无恶性细胞的患者作为对照组,应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测两组骨髓JunB、c-Jun、c-Maf、c-Fos mRNA的表达水平,比较其差异。结果MM组JunB mRNA表达水平高于对照组[(0.0845±0.0416)vs(0.0538±0.0181)],差异有统计学意义(P<0.05);MM组c-Jun mRNA表达水平高于对照组[(0.0018±0.0011)vs(0.0005±0.0002)],差异有统计学意义(P<0.05);两组c-Maf mRNA、c-Fos mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论JunB、c-Jun在多发性骨髓瘤患者中表达上调,可能在其发病中起到一定作用,有望成为新的治疗靶点。

家蝇幼虫抗真菌肽在不同条件下的结构与活性分析

目的制备家蝇幼虫血淋巴中的抗真菌肽-1(Musca domestica antifungal peptide-1,MAF-1),对分离出的MAF-1进行结构与功能分析。方法通过C18柱固相萃取、反相高效液相色谱相(RP-HPLC)相结合的方法制备MAF-1,通过圆二色谱和微量液体菌落计数法检测MAF-1在100℃30min、100℃1h、2%SDS溶液及5%SDS溶液作用条件下结构及活性变化的情况,进而探索MAF-1结构与功能的关系。结果通过C18柱固相萃取和反相高效液相色谱相结合的方法成功分离制备出MAF-1;通过圆二色谱测出水溶液中MAF-1主要以α螺旋及β折叠为主,无规卷曲的构象也存在;随着物理方法煮沸和化学变性剂SDS的加入,对MAF-1β折叠结构影响较大,其抑菌活性也相应降低。结论物理煮沸和化学变性剂SDS对MAF-1的二级结构和功能有一定的影响,具体机制有待进一步探索。