MAGE-A3在食管癌发生发展中作用的研究进展

食管癌(EC)是临床常见的恶性肿瘤之一,近年来免疫治疗的应用使EC患者的预后得到了改善,但患者对免疫治疗的应答有着明显的异质性,且欠缺有效的疗效预测生物标志物,无法精准筛选获益人群,存在原发性耐药,因此需要寻找新型免疫治疗靶点使更多患者获益。黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)是一种癌-睾丸抗原,在正常组织中几乎不表达,而在多种恶性肿瘤组织中呈现高表达,参与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等多种生物学过程。MAGE-A3基因具有限制性表达和良好的免疫原性,是良好的EC免疫治疗靶点,对EC的诊断、治疗和预后判断等具有良好的应用价值。由于MAGE-A3基因在EC组织中高表达,并与不良预后相关。目前针对MAGE-A3基因靶点的肿瘤疫苗和过继性细胞免疫治疗等疗法均展现出良好的应用前景。

MAGE-A3抗原肽负载树突状细胞诱导乳腺癌患者免疫应答的研究

目的研究MAGE-A3抗原肽负载对乳腺癌患者树突状细胞(DC)的功能的影响,探讨其是否可以在体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。方法体外培养HLA-A2乳腺癌患者外周血来源的DC,并经孵育携带MAGE-A3抗原肽,用以刺激CTL,用3H-TdR渗入法检测抗原肽负载前后DC刺激同种淋巴细胞增殖能力(MLR),并用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CTL对靶细胞的杀伤效应。结果DC:T为1:10时,单纯DC组刺激能力显著高于抗原肽负载组DC(DC-P)(P<0.05),但当DC:T低于1:20时后DC-P组刺激能力显著强于单纯DC组(P<0.05)。DC-P组和单纯DC组所激发的CTL对细胞株MCF-7,Sk-Br-3,MDA-MB-435s的杀伤活性有显著性差异,而对细胞株Raji无显著性差异,DC-P组对细胞株MCF-7,Sk-Br-3,MDA-MB-435s的杀伤活性明显高于对细胞株Raji的杀伤活性。结论负载MAGE-A3抗原肽的DC在体外可以诱导乳腺癌患者特异性的CTL免疫应答,为临床以DC为基础的过继免疫治疗的应用提供理论基础。

肿瘤抗原MAGE-A3新的HLA-A2限制性CTL表位的发现与鉴定

目的:鉴定肿瘤抗原MAGE－A3新的HLA-A2限制性CTL表位。方法:采用CTL表位预测的基序法与二级锚点相结合预测 MAGE-A3的 HLA-A2限制性CTL表位;用计算机分子模拟进行表位的初步筛选;以标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果:在所筛选的4个候选CTL表位中,MAGE-A3201-209可在体外有效诱导特异性CTLs的产生,杀伤靶细胞。结论:MAGE-A3201-209为肿瘤抗原MAGE-A3的新的HLA-A2限制性CTL表位。为基于MAGE-A3的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计、研究奠定了基础。

NY-ESO-1和MAGE-A3抗原肽诱导肝癌患者的免疫应答研究

目的利用合成的HLA-A02限制性NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽,体外通过抗原递呈细胞诱导HCC患者外周血T淋巴细胞,从而成功诱导出特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答。方法通过SSP方法筛选20例HLA-A*02的HCC患者的HLA亚型;通过逆转录多聚酶链反应和测序分析NY-ESO-1和MAGE-A3在肝癌组织中的表达以及多肽表位密集区的核苷酸变异状况;体外用细胞因子培养HCC患者外周血来源的树突状细胞(DC);人工合成HLA-A*02限制性NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279多肽,直接或用去除CD8+T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外同T淋巴细胞孵育16d后,利用Elispot、细胞内细胞因子染色和四聚体实验检测T细胞免疫应答。结果20例HLA-A*02患者中,NY-ESO-1mRNA阳性患者为11例,MAGE-A3mRNA阳性患者12例。中国HCC患者表达的NY-ESO-1和MAGE-A3序列高度保守。经多肽直接或用去除CD8+T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外活化外周血T淋巴细胞,4例(36.4%)NY-ESO-1阳性HCC患者以及4例(33.3%)MAGE-A3患者产生针对多肽特异性的CD8+T细胞免疫应答。不同HLA-A*02亚型HCC患者可产生针对NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽的免疫应答。结论NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽可以诱导出针对抗原肽的特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答。提示HLA-A*02限制性的NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3p271-279抗原肽可以作为有潜力的肝癌免疫治疗疫苗。

非小细胞肺癌组织中MAGE-A3和MAGE-C2 mRNA的表达

目的:检测肿瘤相关抗原恶性黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A3、MAGE-C2在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,并探讨其临床意义。方法:收集206例NSCLC手术患者肿瘤组织,应用real-time PCR技术检测组织中MAGE-A3、MAGE-C2 mRNA的表达,并分析其与NSCLC患者临床病理特征(性别、年龄、组织学分级、病理类型、淋巴结转移和临床分期)之间的关系。用基因沉默的方法将肺癌A549细胞MAGE-A3下调,观察处理前后MAGE-A3mRNA表达水平的改变,并分析其对细胞生物学功能(凋亡率、成球率、穿膜细胞数)的影响。结果:MAGE-A3、MAGE-C2 mRNA在NSCLC组织中的表达率分别是73.3%(151/206)和52.9%(109/206);MAGE-A3 mRNA的表达与疾病分期和淋巴结转移有关(P<0.05);不同病理特征的NSCLC组织中MAGE-C2 mRNA的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);MAGE-A3、MAGE-C2 mRNA共表达与年龄和临床分期有关(P<0.05)。MAGE-A3表达降低后肺癌A549细胞的成球能力和侵袭转移能力降低(P<0.001)。结论:MAGE-A3、MAGE-C2在NSCLC组织中有较高的表达率,两者有望成为肺癌免疫治疗的潜在靶点。

肿瘤相关抗原MAGE-A3的研究进展

肿瘤相关抗原MAGE-A3广泛表达于多种恶性肿瘤,而在正常组织中(除睾丸和胎盘外)不表达。该抗原经抗原递呈细胞加工后能被HLA I类或II类分子递呈,引起针对MAGE-A3表达阳性的肿瘤细胞的特异性免疫。近年来,MAGE-A3抗原已被广泛应用于肿瘤的诊断和免疫治疗,本文就MAGE-A3抗原在肿瘤中应用做一综述。

Mage-A3抗原肽负载DC过继免疫治疗乳腺癌的实验研究

目的研究Mage-A3抗原肽负载DC对小鼠乳腺癌的治疗作用。方法体外培养小鼠骨髓来源的DC,并经孵育携带Mage-A3抗原肽,在乳腺癌小鼠模型中进行试验性治疗。结果治疗组与对照组肿瘤体积差异显著(P<0.05),冻融上清负载组和Mage-A3抗原肽负载组没有显著性差异。结论负载Mage-A3抗原肽的DC可以诱导特异性的CTL免疫应答,对小鼠乳腺癌有良好的免疫治疗作用。

肿瘤抗原MAGE-A3研究进展

肿瘤抗原MAGE A3为肿瘤共同抗原 ,广泛表达于多种组织类型的肿瘤细胞 ,而在正常组织细胞 (除睾丸和胎盘外 )却不表达。该抗原不仅能被HLAⅠ类分子呈递 ,而且能被HLAⅡ类分子呈递。MAGE A3抗原已被广泛应用于肿瘤治疗性疫苗的研究。

急性白血病MAGE-A3基因表达的临床意义

【目的】探讨MAGE-A3基因在急性白血病(AL)的表达及临床意义。【方法】初发AL93例,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)27例、急性髓细胞白血病(AML)66例,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MAGE-A3基因的表达,观察该基因表达与初治患者治疗效果关系。【结果】93例AL中MAGE-A3基因阳性表达45例,总阳性率48.4%,其中在ALL、AML的阳性率分别为51.9%和47.0%,两组比较无统计学差异。在非M3型AML患者中,MAGE-A3表达阳性与阴性的完全缓解(CR)率分别为64.0%和92.3%,两者比较有统计学差异(P<0.05)。对表达阳性的21例AL治疗后MAGE-A3基因表达动态观察,当获得CR时,MAGE-A3表达可转阴性,持续阳性者可早期复发;未获CR者可持续表达阳性。【结论】MAGE-A3基因在AL中有一定的表达,在AML和ALL的表达率相仿。MAGE-A3基因阳性非M3型AML治疗CR率较低,MAGE-A3基因阳性表达可作为AML患者预后不良的一项指标。监测MAGE-A3基因表达变化可作为检测微小残留病的有效手段。

CAGE MAGE-A1和MAGE-A3去甲基化在胃癌发生发展中的作用

目的:探讨肿瘤相关抗原基因(CAGE)、黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)和黑色素瘤抗原基因-A3(MAGE-A3)启动子区去甲基化状态改变在胃癌早期发生、发展中的作用及意义。方法:87例内镜活检标本分为胃癌组、癌前病变组和正常对照组,应用甲基化特异性PCR方法分别检测各组中3种基因启动子区的去甲基化状态。结果:胃癌组、癌前病变组和正常对照组中,各基因启动子区的去甲基化阳性率分别为:CAGE:80.0%(24/30)、37.5%(12/32)和4.0%(1/25);MAGE-A1:60.0%(18/30)、21.9%(7/32)和0(0/25);MAGE-A3:46.7%(14/30)、12.5%(4/32)和8.0%(2/25),呈下降趋势。3种基因启动子区去甲基化阳性率在3组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。30例胃癌至少发生1种基因启动子区去甲基化的有27例;至少发生2种基因启动子区去甲基化23例;7例同时发生了3种基因启动子区的去甲基化。结论:这3种基因启动子区去甲基化改变可能发生于胃癌发病早期,且贯穿于胃癌发生、发展的全过程并起到一定的作用,联合检测可能有助于提高胃癌去甲基化诊断的阳性率。

MAGE-A3免疫治疗对非小细胞肺癌患者术后辅助治疗的疗效研究

1文献来源Vansteenkiste JF,Cho BC,Vanakesa T,et al.Efficacy of the MAGE-A3 cancer immunotherapeutic as adjuvant therapy in patients with resected MAGE-A3-positive non-small-cell lung cancer(MAGRIT):A randomised,double-blind,placebo-controlled,phase 3 trial[J].Lancet Oncol,2016,17(6):822-835.2证据水平1b。3背景?在完全切除的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中,只有不到一半的患者被治愈,而其他患者的癌症复发通常是致命的。在过去的几十年里,已研究了几种辅助治疗方法来改善这些患者的预后。?目前发现MAGE-A3是肿瘤组织表达最多的肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)之一,被认为是真正的肿瘤特异性抗原,在许多肿瘤中表达,例如恶性黑色素瘤、肺癌、头颈部肿瘤、肝细胞癌等。30%~50%的NSCLC存在MAGE-A3表达,其中鳞癌(48%)比非鳞癌(24%)比例更高。而对于可切除的NSCLC,只有不到一半的患者达到临床治愈,更多的患者会出现肿瘤复发。传统的辅助化疗无法提供更多的临床获益,针对MAGE-A3抗原的肺癌疫苗对术后患者体内残存的癌细胞可能具有一定的治疗潜力。

MAGE-A3抗原在肺癌患者癌及癌旁组织的表达

目的 检测MAGE- A3抗原在肺癌组织中的表达情况以及HLA- I类基因在肺癌患者中的分布水平 ,以预测能够应用以MAGE- A3抗原蛋白为基础的肿瘤疫苗进行肿瘤免疫治疗的肺癌患者的比例。方法 用SDS- PAGE和Westernblot方法检测 63例肺癌及其癌旁组织MAGE -A3抗原的表达情况。结果 63例肺癌患者中有 3 1例为MAGE- A3抗原表达阳性 ,其中 5例癌旁组织MAGE A3抗原也为阳性。结论 肺癌患者中大约有 49%的个体为MAGE- A3肿瘤特异性抗原阳性表达 ,且MAGE- A3抗原阳性可能是肿瘤发生过程中的早期事件。

RNA干扰MAGE-A3基因抑制白血病细胞的增殖

目的:探讨RNA干扰MAGE-A3基因对白血病细胞增殖的影响。方法:构建MAGE-A3干扰基因重组质粒载体,转染K562白血病细胞系,观察各组白血病细胞MAGE-A3基因表达及白血病细胞增殖情况。结果:对照组及空白质粒组白血病细胞MAGE-A3基因表达明显增高,而重组质粒组MAGE-A3基因表达显著降低;重组质粒组白血病细胞在24 h、48 h及72 h的增殖活性逐渐减弱,且重组质粒组白血病细胞的增殖活性明显低于对照组及空白质粒组白血病细胞。结论:RNA干扰能显著抑制MAGE-A3基因表达并进一步抑制白血病细胞的增殖活性。

沉默SOCS1及负载MAGE-A3抗原的脐血树突状细胞杀伤肾癌细胞的研究

目的:研究SOCS1沉默并负载MAGEA3抗原的树突状细胞(DC)特异性抗肿瘤效应中的作用。方法:采用基因克隆技术构建细胞因子信号抑制因子(SOCS1)基因RNA干扰和慢病毒载体,转染人脐血来源的DC,采用Western-Blot鉴定SOCS1的沉默情况,再负载MAGE-A3抗原肽,应用MTT法评估沉默SOCS1并负载MAGE-A3抗原的DC刺激T细胞增殖的能力及杀伤靶细胞的效应。结果:沉默SOCS1及负载MAGE-A3抗原的脐血树突状细胞组杀伤肾癌细胞能力显著高于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SOCS1沉默并负载MAGE-A3抗原的DC疫苗可以产生高效而特异性的抗肾癌免疫应答。

外周血中MAGE-A3mRNA的检测与肝癌早期转移的相关性研究

目的分析外周血中MAGE-A3mRNA的检测与肝癌早期转移的相关性研究。方法选入我院收治的肝癌患者40例,入组患者组,此外,选入同期于我院完成体检的正常人40例,入组对照组,分别对其MAGE-A3、A1mRNA表达情况进行检测,并完成对比分析。结果患者组MAGE-A3mRNA阳性率及MAGE-A1mRNA表达阳性率显著高于正常人(P<0.05)。结论肝癌早期转移患者的MAGEA3mRNA、MAGE-A1mRNA表达阳性率与正常人存显著差异,且外周血中MAGE-A3mRNA检测与肝癌早期转移存相关性,可作为临床肝癌患者主要观察指标之一。

MAGE-A1、MAGE-A3基因在人舌鳞癌中的表达及其临床意义

目的从mRNA水平观察肿瘤特异性抗原MAGE(黑色素瘤抗原基因)-A1及MAGE-A3基因在人舌鳞癌组织中的表达情况,以评价MAGE-A1、MAGE-A3基因作为舌鳞癌的免疫学检测、免疫和基因治疗的分子标志物的可行性。方法提取38例舌鳞癌、10例牙龈瘤病变组织和10例癌旁口腔正常组织标本中的总RNA,逆转录合成cDNA,而后应用RT-PCR法扩增其中的MAGE-A1,MAGE-A3目的基因片段,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(G3PDH)基因作为内对照,经琼脂糖电泳确认。分别采用Mann-WhitneyTest检验和Fisher'sExactTest检验对舌鳞癌不同病理分型、淋巴结转移与否的MAGE-A1,MAGE-A3的表达差异进行统计学分析。结果在38例舌鳞癌中MAGE-A1基因表达23例(60.5%);MAGE-A3基因表达26例(68.4%);两者均有表达13例(34.2%)。MAGE-A1和或MAGE-A3基因表达共36例(94.7%),MAGE-A1、MAGE-A3基因均不表达2例(5.3%)。低分化鳞癌患者两种基因同时表达的阳性率(53.3%)明显高于高分化者(9.1%)。在10例牙龈瘤和10例癌旁正常组织中未见MAGE-A1、MAGE-A3基因表达。结论舌鳞癌组织中MAGE-A1,MAGE-A3基因均有较高表达。提示MAGE基因可以作为检测舌鳞癌的分子标志物,且具有免疫、基因治疗特异性靶位的潜在价值。

NY-ESO-1和MAGE-A3在进展期胃印戒细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨纽约食管鳞状上皮癌抗原-1(NY-ESO-1)和黑色素瘤抗原基因-A3(MAGE-A3)在进展期胃印戒细胞癌组织中的表达和临床意义。方法收集2004年4月至2014年7月进展期胃印戒细胞癌组织81例,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中NY-ESO-1和MAGE-A3的蛋白表达水平。统计分析两者表达与临床病理特征和预后的关系。结果81例胃印戒细胞癌组织中NY-ESO-1的阳性表达率为9.9%(8/81),MAGE-A3的阳性表达率为28.4%(23/81)。NY-ESO-1和MAGE-A3的表达呈正相关(r=0.25,P=0.024)。NY-ESO-1表达与TNM分期和神经侵犯有关(P<0.05),与年龄、性别、病理类型、Lauren分型、肿瘤位置和脉管侵犯无关(P>0.05)。MAGE-A3表达与年龄有关(P=0.020),而与性别、TNM分期、病理类型、Lauren分型、肿瘤位置、神经侵犯和脉管侵犯无关(P>0.05)。NY-ESO-1阳性表达患者的中位总生存时间(OS)为13.0个月(95%CI:0~40.7个月),阴性表达者为20.5个月(95%CI:16.6~24.4个月),差异无统计学意义(P=0.605)。MAGE-A3阳性表达患者的中位OS为20.5个月(95%CI:8.0~33.0个月),阴性表达者为20.0个月(95%CI:15.1~24.9个月),差异无统计学意义(P=0.922)。结论NY-ESO-1和MAGE-A3在进展期胃印戒细胞癌组织中均有一定程度的表达,两者作为靶点的免疫治疗在胃印戒细胞癌中的潜在价值值得进一步探索。

MAGE-A3在非小细胞肺癌中的临床研究进展

人体正常的组织细胞在进行新陈代谢同时,在内外环境刺激和影响下,某些组织会出现过度增生或异常分化,失去自身调节的控制,而发生肿瘤。根据WHO的预测,肺恶性肿瘤发病率及病死率逐年上升,至2025年我国每年新增将〉100例[1]。非小细胞肺癌为肺癌的主要病理类型,非小细胞肺癌患者出现临床症状就诊时,Ⅰ和Ⅱ期患者占20%~30%,Ⅲ期占40%~50%,Ⅳ期占30%。

MAGE-A1和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取2006年1月至2010年1月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78例脑胶质瘤组织标本和15例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR法检测胶质瘤组织中MAGE-A1和MAGE-A3的表达,分析其表达水平与患者预后的关系;用MSP-PCR术检测MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的甲基化状态,分析两者表达与甲基化之间的关系;用RT-PCR法检测胶质瘤U251和U87细胞中MAGE-A1和MAGE-A3表达以及经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)联合作用后两者的表达水平。结果:78例胶质瘤组织中MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA阳性表达率分别为65.34%和38.46%,而在15例正常脑组织中未发现2种m RNA表达。MAGE-A1阳性组患者5年生存率较阴性组低(P<0.05)。MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性(均P<0.01)。未经5-Aza-CdR和TSA处理的U87细胞未见MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA的表达,U251细胞则有少量表达。单独给予TSA不能引起MAGE-A1和MAGE-A3基因的表达激活,单独给予5-Aza-CdR或与TSA合用可以引起该2个基因的表达激活,且两者合用的作用优于单独给药。结论:脑胶质瘤组织中有不同程度的MAGE-A1和MAGE-A3基因表达,MAGE-A1基因表达与患者的预后不良相关。DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是MAGE-A1和MAGE-A3基因表达激活的重要机制。

CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体的构建及体外表达的研究

目的构建钙网织蛋白/黑素瘤抗原基因-A3(CRT/MAGE-A3)双基因重组腺病毒载体,并进行体外表达研究。方法从表达质粒pcDNA3/CRT中切取目的片段CRT,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV。根据Genbank中提供的黑素瘤基因序列,设计并合成引物,以人肺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人黑素瘤抗原基因-A3基因片段,测序后将黑素瘤抗原基因-A3基因片段定向克隆至穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至PacⅠ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi。结果目的片段CRT转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle(-ΔGFP)-CRT正确。人肺癌组织经RT-PCR扩增出大小约950 bp的基因片段,测序证实为MAGE-A3 DNA后,克隆至穿梭载体pShuttle(-ΔGFP)-CRT构建穿梭载体pShuttle-CRT-MAGE-A3,酶切鉴定证实构建正确。酶切穿梭载体将双基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT/MAGE-A3病毒载体,酶切鉴定证实构建成功。转染293LP细胞并用Western blot检测到其体外表达。结论成功构建CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达CRT蛋白及MAGE-A3蛋白。