微生物培养体系预处理在MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性病原菌的应用价值

目的分析微生物培养仪(HB&L)微生物培养体系预处理在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)快速鉴定血培养阳性样本病原菌的临床应用价值。方法收集2022年1月至2022年12月安阳市人民医院实验室常规方法鉴定的120份血培养报警后单一细菌感染的阳性样本,所有样本均接受HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法预处理,将传统方法的鉴定结果作为“金标准”对照,运用MALDI-TOF MS鉴定。对比HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定的鉴定率;另外对比HB&L微生物培养体系预处理、分离胶促凝管法在不同分值下MALDI-TOF MS样本细菌菌属快速鉴定结果。结果HB&L微生物培养体系预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定例数为116例,鉴定率为96.67%;分离胶促凝管法预处理下MALDI-TOF MS快速鉴定例数为92例,鉴定率为76.67%,两种预处理方法鉴定率对比差异有统计学意义(P<0.05);在3.000~2.300分值下HB&L微生物培养体系MALDI-TOF MS样本细菌菌属快速鉴定率均高于分离胶促凝管法,差异有统计学意义(P<0.05);在2.299~2.000、1.999~1.700、<1.700分值下两种预处理方法菌属鉴定率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论HB&L微生物培养体系是MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性样本病原菌优质的预处理方法,可大幅提升鉴定率,值得应用。

MALDI-TOF MS在鲍曼不动杆菌同源性分析中的临床应用评估

目的评估基质辅助激光解析电离飞行质谱(MALDI-TOF MS)分析鲍曼不动杆菌(AB)同源性的临床应用价值。方法剔除同一患者或环境多次送检标本中的重复菌株,收集某三甲综合医院2020年5月—2021年2月神经内科重症监护病房(ICU)住院患者痰标本及环境标本分离的46株AB,使用VITEK-MS质谱仪检测菌株,应用SARAMIS Premium软件进行聚类分析,并采用多位点序列分型(MLST)的方法进行验证。结果通过MALDI-TOF MS和MLST聚类分析和比较,46株AB中,39株为MALDI-TOF MS的MS-a型,其中,22株为MLST的MT-A簇,包括ST208型3株,ST540型3株,ST195型8株,ST369型5株,以及ST136、ST436、ST1893型各1株;16株为MT-B簇,包括ST381型4株、ST469型11株和ST938型1株;1株为MT-C簇(ST1821);MS-b型1株为ST381;MS-c型2株为ST369;MS-d型1株为ST195;MS-e型2株分别为ST540、ST369;MS-f型1株为STN1。结论作为AB同源性分析工具,MALDI-TOF MS具有一定的局限性,其菌株同源性分析结果与MLST结果一致性低,分辨特异性低,不可取代MLST技术。

MALDI-TOF MS法快速鉴定散装即食食品中3种食源性致病菌

本研究旨在利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)快速检测并鉴定散装即食食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种食源性致病菌。通过对点样方式、前处理方式、不同培养基及培养时间等各项实验条件的优化筛选确定最佳方法,并考察其检测限和稳定性,同时用所建立的方法与多重PCR法、VITEK 2等生化鉴定法进行结果比对,比较三者鉴定结果的一致性,最后进行批量食品样本检测来探寻MALDI-TOF MS鉴定法在散装即食食品中的适用性。结果表明,三种目标菌同一批次及不同传代次数的鉴定得分均大于95%,变异系数均小于2%,所建立的方法重复性和稳定性良好,且检测限为10^(5)CFU/mL,MALDI-TOF MS菌株鉴定结果与多重PCR法、生化鉴定法结果高度一致,且比二者检测用时更短,更加特异高效;在点样方式上,相较于夹心法与混合干滴法,三种覆盖法点样平均鉴定得分更高,均为99.9%,其中1μL+1μL覆盖法点样可获得的平均峰数目更多,特征峰更复杂且强度更高;而在前处理方式上,甲酸乙腈法与其他两种菌体处理方法相比可获得更多的出峰量和更高的峰强度,平均鉴定得分均在98%以上,且与数据库中图谱匹配度更高。综上所述,MALDI-TOF MS法在致病菌鉴定方面不仅灵敏特异、准确快速,且操作简便、结果直观,作为国标法的有力补充,为食源性致病菌的分析鉴定与分型溯源提供了新思路。

关于在MALDI-TOF MS技术背景下提高临床微生物检验实习教学能力的探讨

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)技术是临床微生物诊断中的一项革命性创新技术,给临床微生物诊断带来了极大的便利,同时也给临床微生物实习带教带来了新的挑战。本文阐述了MALDI-TOF MS技术在临床微生物检验实习带教中的应用探讨,旨在充分运用MALDI-TOF MS技术结合传统鉴定技术,提高临床微生物检验实习的教学能力。

MALDI-TOF MS在NTM临床分离株快速鉴定中的应用研究

目的 建立临床非结核分枝杆菌(NTM)分离株的快速鉴定方法,为临床NTM病的诊断和治疗提供参考。方法 收集2018-2020年泉州某三甲医院的临床疑似NTM感染患者的痰液、肺泡灌洗液、胸部穿刺液和脑脊液等标本,借助基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,通过改良前处理方法(甲酸提取法),摸索上机检测条件,建立临床NTM分离株的快速鉴定方法,并以16S rRNA测序为金标准,验证鉴定的准确性。结果 收集的50株临床NTM菌株,采用传统(常规)处理方法进行质谱鉴定,仅鉴定出4株,检出率为8.0%,而采用甲酸提取法共鉴定出24株,检出率为48.0%,两种方法检出率比较,差异有统计学意义(P<0.01),且改良处理后鉴定出的24株鉴定结果与PCR测序结果完全一致,符合率为100.0%。结论 初步建立的NTM甲酸提取前处理的质谱鉴定方法检出率明显提高,具有一定的临床应用价值。

基于MALDI-TOF-MS技术筛选及鉴定大曲中芽孢杆菌

该研究对基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱(MALDI-TOF-MS)技术体系进行改进与优化,创新性地引入浓香型大曲中芽孢杆菌(Bacillus)的筛选及鉴定,并结合分子生物学技术对该技术鉴定结果进行验证。结果表明,采用传统微生物培养分离法从大曲中分离得到126株菌株,其中125株通过MALDI-TOF-MS技术筛选鉴定获得9.0以上可信度分值,其中目标菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)及地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的鉴定结果与分子生物学鉴定结果一致,说明该技术历经5~6 d可以准确地完成大曲样品中目标菌株的筛选鉴定,比传统微生物筛选鉴定方法至少节约1~2周时间。因此,基于MALDI-TOF-MS技术参与复杂样品中目标菌株的筛选与鉴定是一条高效的、可行的路径。

MALDI-TOF-MS鉴定成人颅内感染人型支原体1例

人型支原体是一类没有细胞壁、具有多形性、可通过滤菌器的已知最小原核型微生物。在人体中,其主要引起泌尿生殖系统感染,而在成人颅内感染中极为少见,且引起的颅内感染在诊断、治疗、预后管理等方面尚缺乏统一的共识。本文报告1例成人因车祸伤行神经外科手术后出现人型支原体颅内感染的病例,旨在为临床此类疾病诊治提供参考。

MALDI-TOF-MS高灵敏度分析EGFR基因多位点突变方法的建立与应用

目的以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)为分析平台,建立表皮生长因子受体(EGFR)基因多位点突变的高灵敏度同步检测方法,用于辅助临床伴随诊断。方法使用MALDI-TOF-MS推荐的网站设计引物和单碱基延伸引物(UEP),设计添加针对野生型基因组的blocker,以减少野生型模板对突变位点检测的干扰。用数字PCR定量标准品,使用定量后的标准品验证检测体系的灵敏度。收集228例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的血液标本,比较MALDI-TOF-MS平台与微滴式数字PCR(ddPCR)平台检测结果的特异度、灵敏度。结果MALDI-TOF-MS检测E746_A750del位点、T790M位点突变灵敏度达0.1%,最小突变检出拷贝数达2.8;L858R位点突变灵敏度达0.5%,最小突变检出拷贝数达12。与ddPCR检测相比,MALDI-TOF-MS检测E746_A750del、L858R和T790M位点的灵敏度、特异度、Kappa值分别为94.4%(34/36)、99.5%(191/192)、0.95,94.6%(35/37)、100.0%(191/191)、0.97,83.3%(15/18)、99.5%(209/210)、0.87。结论MALDI-TOF-MS建立的检测方法具有很高的灵敏度,与ddPCR检测具有非常高的一致性,有广阔的临床应用前景。

氮掺杂芦丁基碳点作为MALDI-TOF-MS基质对氨基酸的检测

以芦丁为碳源、乙二胺为氮源,采用水热法制备氮掺杂芦丁基碳点(N-CD)。通过优化温度、时间、碳源质量等反应条件得到N-CD荧光最大值。将N-CD作为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)基质对氨基酸进行检测。结果显示:氮原子在N-CD中主要以吡啶氮形式存在,氮原子的孤电子对与碳点的sP2芳香体系以垂直形式构成的共轭结构,增大了共结晶电子解吸/电离效率。使用N-CD对谷氨酸、组氨酸、苯丙氨酸和天冬氨酸进行检测。检测结果表明氨基酸离子信号强度最高可达30382。N-CD溶液作为基质最佳质量浓度为0.5 mg/mL,最大耐盐度为1 mol/L,初步实现对人体血清中氨基酸进行高通量检测。N-CD作为MALDI-TOF-MS新型基质材料在分析化学检测、环境检测以及生物小分子检测中具有良好的应用潜力,也为多元素掺杂生物质碳点材料作为MALDI-TOF-MS基质提供了参考。

MALDI-TOF MS快速鉴定联合直接药敏试验在尿路感染诊断中的应用评估

目的评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速鉴定联合直接药敏试验在尿路感染(urinary tract infection,UTI)诊断中的临床应用价值。方法收集2022年5月至12月首都医科大学附属世纪坛医院清洁中段尿培养样本共2610份。全部通过MUS9600全自动尿液分析系统筛选后,经差速离心浓缩纯化后使用MALDI-TOF MS直接鉴定,使用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定和药敏系统,K-B法及ATB FUNGUS3进行直接药敏试验,并根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)发布的药敏试验标准进行结果判读。将其结果与清洁中段尿培养鉴定药敏结果进行比较。结果2610例清洁中段尿培养样本中经常规鉴定后共有阳性483例(483/2610,18.51%),阴性或疑似污染2127例(2127/2610,81.49%)。与MUS9600计数结果相比,阳性样本符合率为97.92%(472/483):其中杆菌97.90%(280/286),球菌98.48%(130/132),真菌92.31%(60/65)。阴性及污染样符合率为98.92%(2104/2127)。在这483个样本中,质谱快速鉴定符合率为90.48%(437/483),其中,革兰氏阴性菌92.86%(260/280),革兰氏阳性菌89.13%(123/138),真菌83.10%(54/65)。对部分阳性样本进行了直接药敏试验。革兰阴性杆菌数据显示,直接药敏试验与传统药敏试验的符合率为94.42%(5552/5880),微小错误率、严重错误率和非常严重错误率分别为4.42%(260/5880)、0.95%(56/5880)和0.20%(12/5880)。革兰氏阳性球菌数据显示,直接药敏试验与传常规药敏试验的符合率为91.91%(1340/1458),微小错误率、严重错误率和非常严重错误率分别为5.69%(83/1458)、1.65%(24/1458)和0.75%(11/1458)。假丝酵母菌药敏数据显示,直接药敏试验与传统药敏试验的符合率为77.69%(101/130),微小错误率、严重错误率和非常严重错误率分别为16.15%(21/130)、4.62%(6/130)和1.54%(1/130)。结论我们的发现表明,以MUS9600筛选,MALDI-TOF MS直接鉴定和Vitek 2 Compact、K-B法及ATB FUNGUS3直接药敏试验的组合为清洁中段尿培养提供了较直接、快速和可靠的鉴定和药敏结果,在尿路感染的早期诊断和合理治疗中具有显著的临床价值。

MALDI-TOF MS在不同禽肉动物源性成分检测中的研究

[目的]建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术检测不同禽肉动物源性成分的方法,构建不同禽肉蛋白质分子指纹图谱标准数据库,对不同禽肉进行鉴别。[方法]样品用磷酸盐缓冲液提取,净化后用MALDI-TOF MS法测定。采用ChemPattern软件对不同禽肉蛋白图谱进行化学计量学分析,建立识别模型。[结果]鸡、鸭、鹅3种不同禽肉之间具有明显差异。首次建立不同禽肉蛋白质分子指纹图谱标准数据库,可一次性对每个样品中鸡、鸭、鹅等肉源性成分进行同时分析。[结论]建立的基于蛋白质组学的鸡、鸭、鹅源性成分鉴定系统具有简便、稳定、准确、重现性好的优点,适用于不同禽肉中鸡鸭鹅动物源性成分的鉴别。

MALDI-TOF MS在临床微生物鉴定中的应用进展

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种新型的软电离生物质谱技术,是鉴定微生物的快速、可靠和高通量诊断工具。该技术可在几分钟内确定微生物的分离物,与传统鉴定方法相比,每个样本的快速周转时间和耗材成本最低,导致MALDI-TOF MS越来越多地用于世界各地的临床实验室[1]。在过去十几年中,MALDI-TOF MS已被广泛用作鉴定微生物的快速可靠方法,MALDI-TOF MS可将常规工作流程中用于微生物鉴定的时间缩短约1天。改进了微生物菌落的样品制备,提高了鉴定的准确性和速度[2]。MALDI-TOF MS也用于检测血液、脑脊液和尿液,因为它可以直接识别这些液体样品中的微生物,而无需事先培养或继代培养[3-4]。此外,MALDI-TOF MS目前正与流式细胞术等其他技术相结合,以扩大临床应用范围[5]。本文拟对MALDI-TOF MS的原理及在临床微生物鉴定中的应用进行概述,同时探讨该技术仍存在的局限性和未来前景。

MALDI-TOF MS技术在微生物检验中的应用效果

目的探讨MALDI-TOF MS技术在微生物检验中的应用效果。方法选取2021年7月至2022年7月进行检验的540例血培养阳性样本为研究对象,每份样本分为2份,1份540例直接应用MALDI-TOF MS技术实施微生物检验,另1份540例进行标本接种后细菌鉴定,前者设为微生物检验组,后者设为细菌鉴定组,比较两组病原菌检出情况与感染检出情况。结果540份样本共分离出540株病原菌,革兰阳性菌分布如下,凝固酶阴性葡萄球菌有183例,金黄色葡萄球菌有37例,肠球菌有36例,链球菌有32例,革兰阳性杆菌9例,其他17例;革兰阴性菌分布如下,肠杆菌科细菌160株,革兰阴性非发酵菌44株,其他8株;酵母样真菌分布如下,白念9株,其他5株。细菌鉴定组的革兰阳性菌、革兰阴性菌、酵母样真菌检出率高于微生物检验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在微生物检验中应用MALDI-TOF MS技术可检出病原菌与感染性疾病,但检出价值低于细菌鉴定,如有必要可联合应用细菌鉴定,进一步明确患者的病原菌类型。

基于MALDI-TOF MS快速鉴定脑脊液中病原菌的方法建立及识别能力评价

目的研究基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定脑脊液中病原菌的方法建立及识别能力。方法本研究为前瞻性研究,选择2019年5月至2021年5月来河南省儿童医院进行治疗的中枢神经系统感染患者的脑脊液样本90例作为研究对象,分别对以上样本进行基于MALDI-TOF MS快速鉴定以及常规细菌培养,分别对以上样品进行病原菌鉴定以及药敏试验结果分析。结果本研究中共计鉴定革兰氏阴性菌38例,革兰氏阳性菌42例,真菌10例。本研究中利用短期培养物MALDI-TOF MS鉴定的总体正确率为92.22%。其中革兰氏阴性菌的鉴定正确率为82.33%,革兰氏阳性菌的鉴定正确率为95.23%,真菌的鉴定正确率为90.00%;通过对革兰氏阴性菌对阿米卡星、苄卡西林、氨苄西林、氨曲南、头孢唑林、头孢吡肟、头孢他啶、头孢呋辛、环丙沙星、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南、呋喃妥因、哌拉西林、妥布霉素、复方新诺明等抗生素的耐药情况进行短期培养以及常规药敏实验分析显示,两种方法的诊断一致性较强,通过对革兰氏阳性菌对氨苄西林、青霉素、环丙沙星、克林霉素、红霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、利奈唑胺、莫西沙星、呋喃妥因、苯唑西林、利福平、美罗培南、四环素、替加环素、复方新诺明、万古霉素等抗生素的耐药情况进行短期培养以及常规药敏实验分析显示,两种方法的诊断一致性较强。结论基于MALDI-TOF MS快速鉴定脑脊液中病原菌的结果与常规培养检测方法一致,可作为临床治疗的重要依据。

MALDI-TOF-MS法对重组人内皮抑素蛋白分子质量测定

肿瘤的生长依赖于血管的生成,新生血管不仅为肿瘤生长提供必需的营养物质,而且为肿瘤细胞扩散提供了重要的途径[1].1997年哈佛大学的O'Reilly等[2]发现了一种内源性新血管生成抑制因子内皮抑素(Endostatin),显示出特异抑制激活的血管内皮细胞增殖和肿瘤新血管生成的生物学活性,其抗肿瘤作用具有高效、低毒、无耐药性的优点.……

克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库的建立及应用

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionisation time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术建立了克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库,用于该菌属内种和亚种的高通量鉴定及菌株分型。在优化培养条件、样品处理方法及确定MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱采集参数的基础上,将采集的8种参考菌株蛋白质质谱数据通过Biotyper软件构建克罗诺杆菌的MALDI-TOF-MS数据库,再用相近肠杆菌及该属分离株验证数据库的准确性。结果表明:应用建立的克罗诺杆菌的MALDI-TOF-MS数据库对135株克罗诺杆菌分离株进行分析,鉴定分值均不小于2.0,达到了种水平鉴定要求,通过聚类分析,可进一步分型。构建的MALDI-TOF-MS数据库为克罗诺杆菌高通量鉴定与分型提供了一种新的手段。

MALDI-TOFMS测定高聚合度葡聚糖及不同基体在测定中的作用比较

应用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOFMS)直接对未经分级的高聚合度 (n>1 0 0 )葡聚糖样品进行了测定 ,检测到的葡聚糖最大分子量达 1 80 0 0以上 .对 2 ,5 -二羟基苯甲酸 (DHB)、 1 -羟基异喹啉 (1 -HIQ)及 3,4 -二羟基肉桂酸 (咖啡酸 ,CA) 3种一元基体以及 DHB与 1 -HIQ,DHB与 CA两种二元基体在测定中的作用进行了比较 .结果表明 ,DHB基体测定的质量范围较大 ;DHB+ 1 -HIQ和 DHB+ CA二元混合基体对样品的解吸电离效果及谱图重现性好 ;DHB+ 1 -HIQ基体获得的谱图分辨率高 .

沙门氏菌MALDI-TOF-MS检测方法的建立

建立利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对食品中沙门氏菌的快速检测方法。从食品中分离出可疑沙门氏菌,利用不同培养基分离纯化,通过MALDI-TOF-MS法进行鉴定,并与其他检测方法比较。MALDI-TOF-MS对野生沙门氏菌株的鉴定结果与传统鉴定结果一致,说明本试验建立的方法对于沙门氏菌的鉴定准确性较高。MALDI-TOF-MS方法检测食品中沙门氏菌快速准确且操作简单,可发展成为食品检验沙门氏菌的重要辅助工具。

沙门氏菌MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱分析方法的研究

以沙门氏菌标准菌株(Salmonella enterica DSM 17058 T)为研究对象,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行蛋白质指纹图谱分析,进而得到正确的鉴定结果。为了获得重现性良好的质谱图,对沙门氏菌的最佳培养基、最适培养时间以及样品前处理方法进行了优化,从而确立沙门氏菌MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱标准分析方法。结果表明:乙醇/甲酸处理法所得图谱中的特征峰多,包含更多的蛋白标志物,所得图谱基线平滑,噪音少,信噪比高,是最佳的样品处理方法。以营养丰富的哥伦比亚琼脂为培养基,在24 h时即可达到强峰值信号,质谱图重现性良好,鉴定结果准确,并且相比于其它3种培养基所需培养时间短。

金黄色葡萄球菌及其甲氧苯青霉素耐药性的MALDI-TOF MS鉴定

用MALDI_TOFMS细菌指纹图谱鉴定细菌 ,建立区分金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株的MALDI_TOFMS分析方法,检测了76株从临床标本中分离得到的金黄色葡萄球菌 ,用软件进行聚类分析,以nuc(耐热核酸酶)基因和mecA(耐药)基因聚合酶链反应(PCR)检测结果为参照 ,74 %的菌株经MALDI_TOFMS给出了正确的鉴定结果;金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株的质谱图有很大差别 ,各自有其特征峰;经过软件聚类分析 ,76株实验菌株划分为敏感群和耐药群;与PCR检测结果对照 ,有7株菌PCR检测mecA基因为阴性 ,而经MALDI_TOFMS鉴定为耐药株 ,表型鉴定表明其中有5株为敏感株;利用细菌指纹图谱和数据库检索对大多数菌株实现了正确鉴定;MALDI_TOFMS分辨率高 ,甚至可以区分株间的差异 ,实现了区分金黄色葡萄球菌甲氧苯青霉素耐药株和敏感株;