MALDI Sepsityper^(TM) Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术直接鉴定阳性血培养病原菌的应用评估

目的比较MALDI Sepsityper^(TM) Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术直接鉴定血培养阳性病原菌的有效性。方法收集上海交通大学医学院附属仁济医院2016年4-6月血培养仪报警的非重复血培养瓶138个,以传统培养鉴定的方法为金标准,同时采用以上两种前处理方法处理阳性标本,再进行MALDI-TOF MS鉴定。结果本次共收集非重复的血培养阳性标本138份,排除6个假阳性血瓶,鉴定出的病原菌包括革兰阴性菌70株(53.03%)、革兰阳性菌57株(43.18%)、真菌3株和2例复数菌。MALDI Sepsityper^(TM)Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法的血培养快速鉴定病原菌准确率分别为91.67%和84.09%,种鉴定准确率分别为83.33%和61.36%。两种前处理方法处理后,革兰阴性菌的准确率分别为98.57%和95.71%,革兰阳性菌的准确率分别为87.72%和78.59%,两者鉴定所需时间为40 min/样本和25 min/样本。结论虽然MALDI Sepsityper^(TM)Kit比血清分离胶促凝管法鉴定准确率稍高但两者差异无统计学意义(91.67%对84.09%,P>0.05),与MALDI Sepsityper^(TM) Kit相比,血清分离胶促凝管法是一种快速、易获得、低廉的MALDI-TOF MS直接鉴定血培养病原菌的前处理方法。

Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法联合MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性病原菌

目的 评估应用Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）直接鉴定血培养阳性标本中病原菌的符合率.方法 收集临床血培养阳性标本153例,应用Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法分别处理后,联合MALDI-TOF MS对菌种进行快速鉴定,快速鉴定结果与培养后结果进行比较.结果 经培养后确认,153例血培养阳性标本包括143例单数菌感染和10例复数菌感染标本.Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法均可在1 h内联合MALDI-TOF MS对血培养阳性标本进行快速鉴定.应用Sepsityper Kit试剂盒法联合MALDI-TOF MS 直接鉴定标本中病原体的种、属水平的符合率为76. 2% （109/153）和7. 8% （12/153）.应用血清分离胶法联合MALDI-TOF MS直接鉴定标本中病原体的种、属水平的符合率为75.1%（101/153）和8.5%（13/153）.单数菌感染中,Sepsityper Kit试剂盒法联合MALDI-TOF MS对革兰阴性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为95.2%（79/83）和0%（0/83）,对革兰阳性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为57.5%（27/47）和23.4%（11/47）,对念珠菌的种、属水平的鉴定符合率分别为33.3%（3/9）和11.1%（1/9）.血清分离胶法联合MALDI-TOF MS在单数菌感染血培养瓶中对革兰阴性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为90.4%（75/83）和4.8%（4/83）,对革兰阳性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为55.3%（26/47）和14.9%（7/47）,对念珠菌的种、属水平的鉴定符合率分别为0%（0/9）和22.2%（2/9）.对复数菌感染中,只有Sepsityper Kit试剂盒法有1例与培养鉴定结果一致,其他标本均都不能准确鉴定出多种细菌,但均都可以正确鉴定出其中一种细菌.结论Sepsityper Kit试剂盒或血清分离胶联合MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血标本中的病原菌,可以1 h内得到鉴定结果,且与培养结果比较具有较高的鉴定符合率.相对于传统的血培养阳性标本的分离培养鉴定流程,Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法联合MALDI-TOF MS方法具有快速、操作简便等优点,可以满足临床对快速诊断和及时有效合理抗菌治疗的需求,具有重要的临床应用价值.

应用MSK试剂盒-质谱法直接鉴定阳性血培养标本

目的评估应用MALDI Sepsityper^(TM)Kit与MicroflexTMLT型基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MSK试剂盒-质谱法)直接鉴定阳性血培养标本中微生物的可行性与临床价值。方法 2014年3—8月,应用MSK试剂盒-质谱法和传统血培养鉴定法对上海交通大学医学院附属新华医院临床阳性血培养标本中微生物进行鉴定。若两者鉴定结果不符,则用基因测序法予以确认。结果 491例阳性血培养标本中,462例为单种菌,29例为复数菌,共包括30个属和64个种。应用MSK试剂盒-质谱法直接鉴定血培养标本中单种菌的种、属水平符合率分别为72.5%(335/462)、76.0%(351/462)。其中革兰阴性菌的种、属水平符合率分别为75.4%(132/175)、77.7%(136/175);革兰阳性菌的种、属水平符合率分别为70.9%(178/251)、74.9%(188/251);念珠菌的种、属水平符合率均为75.0%(27/36)。复数菌血培养标本中鉴定出1种、2种细菌的种水平符合率分别为55.2%(16/29)、20.7%(6/29)。应用MSK试剂盒-质谱法直接鉴定血流感染中临床常见菌的属水平符合率达74.2%~96.9%,鉴定时间仅需40 min/样本。结论应用MSK试剂盒-质谱法能准确和快速地鉴定血流感染常见菌,从而缩短血流感染诊断时间,为临床上快速、合理选用抗生素提供依据。

复发性卵巢癌血清差异表达蛋白分析

目的探讨血清差异表达蛋白对提高复发性卵巢癌的诊断意义。方法采用弱阳离子(WCX)磁珠纯化试剂盒和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,对21例复发性卵巢癌和18例完全临床缓解期卵巢癌患者(对照组)的血清标本进行检测,筛选出复发性卵巢癌患者与对照组血清中的差异表达质谱峰,并建立诊断模型。结果在Mr1000～12000区段,发现复发性卵巢癌与对照组间差异表达蛋白峰10个(P<0.05)。其中Mr1944、1980、2080、2661、2993、4450、4659、5359的蛋白峰显著上调,Mr1897、7868则显著下调。结论 MALDI-TOF-MS结合磁珠技术能直接检测出复发性卵巢癌患者血清差异表达蛋白,对提高复发性卵巢癌诊断的敏感性和特异性具有一定的临床意义。

卵巢癌血清差异表达蛋白分析

目的:探讨卵巢癌血清差异表达蛋白对提高卵巢癌的诊断的意义。方法:采用弱阳离子(WCX)磁珠纯化试剂盒和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,对41例晚期卵巢癌(FIGOⅢ、Ⅵ期)、40例良性卵巢肿瘤患者及40例健康人群对照血清标本进行检测,筛选出卵巢癌患者与对照组血清中的差异表达质谱峰,并建立诊断模型;再用此模型对8例早期卵巢癌(FIGOⅠ、Ⅱ期)进行测试,检测其用于早期卵巢癌诊断的可行性。结果:在Mr1000-12000区段,发现卵巢癌与对照组间差异表达蛋白峰8个(P<0.01或P<0.05),其中低表达的4个,Mr分别为1457,1857,2202,7761,高表达的4个,Mr分别为:2946,5333,5859,5901。用它们建立成卵巢癌的诊断模型,对8例早期卵巢癌患者进行预测,7例预测准确,准确率为87.5%。结论:MALDI-TOF-MS结合磁珠技术能直接检测出晚期卵巢癌患者血清差异表达蛋白,并且适用于早期卵巢癌患者的诊断,对提高卵巢癌诊断的敏感性和特异性具有一定的临床意义。

一种联合MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养瓶方法改进及与Sepsityper Kit试剂盒法、SELTERS法和血清分离胶法的比较

目的评价直接使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联合Sepsityper Kit试剂盒法(简称试剂盒法)、SELTERS法和血清分离胶法(简称分离胶法)鉴定阳性血培养瓶血中细菌的符合率,并对SELTERS方法进行改进,以缩短样本处理时间。方法对656例临床血培养阳性标本,应用试剂盒法、SELTERS方法或分离胶法处理后,直接使用质谱仪快速鉴定菌株,同时进行传统培养,比较分析二者之间的差异。结果656例血培养阳性标本共分离出626株单种菌感染和30株多种菌感染标本。MALDI-TOF MS联合试剂盒法、SELTERS法或分离胶法可在1 h内快速鉴定血培养阳性标本。在单种细菌感染中,MALDI-TOF MS联合试剂盒法直接鉴定革兰阳性菌的种、属符合率分别是66.8%(141/211)、21.3%(45/211),革兰阴性菌的种、属符合率分别是97.1%(367/378)、0.8%(3/378),真菌的种、属符合率分别是32.4%(12/37)、0.0%(0/37);MALDI-TOF MS联合SELTERS法直接鉴定革兰阳性菌的种、属符合率分别是66.8%(141/211)、21.3%(45/211),革兰阴性菌的种、属符合率分别是96.3%(364/378)、2.4%(9/378),真菌的种、属符合率分别是32.4%(12/37)、2.7%(1/37);MALDI-TOF MS联合分离胶法直接鉴定革兰阳性菌的种、属符合率分别是51.2%(108/211)、20.9%(44/211),革兰阴性菌的种、属符合率分别是93.4%(353/378)、1.6%(6/378),真菌的种、属符合率分别是13.5%(5/37)、2.7%(1/37);MALDI-TOF MS联合改良SELTERS法直接鉴定革兰阳性菌的种、属符合率分别是59.1%(13/22)、18.2%(4/22),革兰阴性菌的种、属符合率分别是88.5%(23/26)、3.8%(1/26),真菌的种、属符合率分别是0.0%(0/2)、50.0%(1/2)。而对于多种菌感染的血培养瓶,3种方法鉴定率均较低。结论MALDI-TOF MS联合试剂盒法、SELTERS法或分离胶直接鉴定阳性血标本中的病原菌,其结果可在1 h内获得,并与传统培养结果相比具有较高的符合率。但是这些方法检测更快速、操作更简便,同时改良SELTERS法样本处理时间缩短,成本降低,且符合率与前3种方法没有区别。这4种方法均能满足临床快速诊断和及时有效抗菌治疗的需求,临床可根据自身情况选择。

Analysis of diferentially expressed protein from primary and recurrent ovarian cancer serum

Objective:To study the value of the differentially expressed proteins from primary and recurrent ovarian cancer serum for early diagnosis of primary and recurrent ovarian cancer.Methods: WCX kit(Bruker Daltonics GraBH) and matrix-assisted laser desorption/ionization time-offlight mass spectrometry(MALDI-TOF-MS]technology were used to detect serum samples from 49 patients with primary ovarian cancer and 21 patients with recurrent disease.Results:In the mass range(Mr) from 1 000 to 12 000 Da,eight differentially expressed protein peaks were screened from primary ovarian cancer serum.Among them,four protein peaks with Mr 1 457,1 857,2 202, 7 761 were lowly expressed and the others with Mr 2 946,5 333,5 859,5 901 were highly expressed. Ten differentially expressed protein peaks were screened from recurrent ovarian cancer serum. Among them.1 944,1 980,2 080,2 661,2 993,4 450,4 659,5 359 Da protein expressions were increased significantly,and 1897,7868 Da protein expressions were decreased significantly.The pattern of primary ovarian cancer was applied to 8 early-stage ovarian cancer serum samples, and 7 serum samples were successfully predicted with the accuracy of 87.5%.The pattern of recurrent ovarian cancer was applied to 9 without pelvic:or abdominal mass recurrent ovarian cancer serum samples,and 8 serum samples were successfully predicled with the accuracy of 88.9%.Conclusions:Combination of MALDI-TOF-MS and WCX kit technology can directly screen the diferrential expressed protein from primary and recurrent ovarian cancer serum.They have clinical significance for enhancement of sensitivity and specificity of ovarian cancer diagnosis.