MAO-A通过激活ROS/JNK通路加重心肌细胞脂质沉积

目的观察单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)对与3T3-L1脂肪细胞共培养的原代新生大鼠心肌细胞(neonatal rat cardiomyocyte,NRCM)脂质沉积的影响及机制。方法选取40只出生1~3天的SD大鼠心肌细胞与3T3-L1脂肪细胞构建NRCM/3T3-L1共培养体系,并加入棕榈酸(palmitic acid,PA),模拟肥胖时心肌细胞所处的内环境。将细胞分为对照组、PA组、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)组、过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)组、NE+CLG组、氯吉兰(clorgyline,CLG)组。采用α横纹肌肌动蛋白评估心肌细胞的纯度和面积,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定心肌细胞内心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)的mRNA水平,免疫荧光染色测定心肌细胞内活性氧簇水平(reactive oxygen species,ROS),油红O染色评估心肌细胞内脂质沉积,Western blot法测定心肌细胞内MAO-A、JNK的蛋白及磷酸化水平。结果与对照组比较,PA组心肌细胞面积(14.681±0.481μm^(2) vs 19.932±0.220μm^(2),P<0.01)增大,ANP的相对mRNA水平(1.006±0.017 vs 1.914±0.152,P<0.01)、MAO-A的相对蛋白水平(0.117±0.022 vs 0.430±0.092,P<0.01)、ROS水平(0.001±0.001 vs 0.004±0.002,P<0.01)、脂滴面积比(0.001±0.001 vs 0.054±0.002,P<0.01)及p-JNK的相对蛋白水平(0.032±0.007 vs 0.263±0.119,P<0.05)均增加。与PA组比较,NE明显增加心肌细胞内MAO-A的相对蛋白水平(0.430±0.092 vs 1.114±0.091,P<0.01)和ROS水平(0.004±0.002 vs 0.013±0.001,P<0.01)。另外,NE和H 2O 2均能增加心肌细胞脂滴面积比(0.054±0.002 vs 0.106±0.005,P<0.05;0.054±0.002 vs 0.092±0.002,P<0.01)和p-JNK的相对蛋白水平(0.263±0.119 vs 0.969±0.082,P<0.05;0.263±0.119 vs 0.640±0.101,P<0.05)。CLG可明显改善NE诱导的异常。结论MAO-A相对蛋白水平增加会加重与3T3-L1脂肪细胞共培养的心肌细胞内的氧化应激和脂质沉积,其机制可能与ROS/JNK信号级联反应激活有关。

头穴透刺对运动性疲劳大鼠下丘脑TPH、MAO-A的影响

目的:探讨头穴透刺对运动性疲劳大鼠下丘脑TPH、MAO-A表达的影响。方法:取8周龄健康Wis-tar大鼠48只,雌雄各半,除12只作空白对照组外,其他大鼠造疲劳力竭模型,随机分为模型组、头穴透刺组和传统针刺组,每组12只。共进行游泳大鼠模型训练4周后,观察各组大鼠力竭游泳后力竭时间;采用westernblot方法比较各组大鼠下丘脑组织TPH、MAO-A表达。结果:与模型组相比,针刺治疗组小鼠的力竭运动时间显著延长(P<0.05);传统针刺组和头穴透刺组均能显著降低TPHmRNA的表达,增强MAO-AmRNA的表达,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.01);头穴透刺组在降低TPHmRNA表达、增强MAO-AmRNA表达方面优于传统针刺组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:头穴透刺能降低大鼠下丘脑组织中TPHmRNA表达,增强MAO-AmRNA表达。

电针预处理对PTSD模型大鼠焦虑样行为及海马Sirt1/MAO-A基因表达的影响

目的:探讨电针预处理对创伤后应激障碍大鼠(PTSD)焦虑样行为的改善作用及对海马去乙酰化酶Sirt1及单胺氧化酶MAO-A基因表达的影响。方法:将32只SD大鼠随机分为对照组(Sham),模型组(PTSD),电针刺激组(EA),电针预处理+模型(EA+PTSD),每组8只。电针刺激组(EA)和电针预处理+模型(EA+PTSD)组大鼠每天给予百会穴电针刺激(2/15 Hz,1 m A)30 min,连续刺激7 d。然后对模型组(PTSD)组和电针预处理+模型(EA+PTSD)组大鼠进行ESPS造模处理。造模结束14天后,通过旷场和高架十字测试其焦虑样行为,随后处死大鼠,通过实时定量PCR(RT-PCR)检测海马Sirt1和MAO-A的m RNA表达情况。结果:(1)PTSD大鼠具有明显的焦虑样行为,包括旷场中心的探索减少(44.94±13.66,16.86±7.12,P<0.05)和高架十字开臂运动时间减少(55.90±26.39,23.36±12.23,P<0.01),PTSD组大鼠海马Sirt1和MAO-A的m RNA表达增加(1.00±0.07,1.90±0.05;1.01±0.10,1.54±0.15,P<0.01)。(2)电针预处理可以缓解PTSD大鼠的焦虑样行为,PTSD与EA+PTSD组之间存在显著性差异(16.86±7.12,36.24±13.28,P<0.05;23.36±12.23,50.14±20.77,P<0.05)。(3)电针预处理可以抑制PTSD大鼠海马的Sirt1和MAO-A m RNA表达,PTSD与EA+PTSD组之间的Sirt1和MAO-A的m RNA水平存在显著性差异(1.90±0.05,1.30±0.08,P<0.05;1.54±0.15,1.23±0.15,P<0.05)。结论:电针预处理可以调节PTSD大鼠海马的Sirt1和MAO-A的m RNA水平,缓解PTSD大鼠的焦虑样行为。

子宫内膜单胺氧化酶A(MAO-A)在反复IVF-ET失败患者种植窗口期的表达及其意义

目的:探讨子宫内膜单胺氧化酶A(MAO-A)在评估子宫内膜容受性中的作用。方法:应用实时荧光定量PCR和免疫组织化学技术,检测3次IVF-ET失败患者(A组,n=39)、2次IVF-ET失败,第3次获得临床妊娠患者(B组,n=8)、首次IVF-ET获得临床妊娠患者(C组,n=21)在子宫内膜种植窗口期子宫内膜MAO-A mRNA的表达和MAO-A蛋白的表达及定位,同时扫描电子显微镜观察子宫内膜的胞饮突数量及发育情况,探讨子宫内膜MAO-A在评估子宫内膜容受性中的作用。结果:反复IVF-ET失败患者在子宫内膜种植窗口期子宫内膜MAO-A的表达低于首次IVF-ET获得临床妊娠的患者(P<0.05)。结论:子宫内膜MAO-A可以作为子宫内膜容受性的预测指标。

单胺氧化酶A基因启动子区30bp可变重复序列多态性与汉族少年劳教人员反社会人格障碍的关联分析

目的:探讨单胺氧化酶A基因启动子区可变数目串联重复多态性与反社会人格障碍遗传易感性的关系。方法:于2003-07/2004-06对江苏省少年劳教所的16～25岁的劳教人员进行人格诊断问卷筛查,将人格诊断问卷分值≥42分的189例患者列入可疑人格障碍范围。按照美国精神病学会诊断与统计手册第4版关于反社会人格障碍的诊断标准,符合反社会人格障碍诊断标准者共90例,设为反社会人格障碍组。同时,在南京医科大学第二附属医院门诊正常体检人群中,随机选取年龄18～25岁男性健康体检者,设为对照组。全部对象取血液标本提取DNA,用PCR方法扩增MAO-A基因启动子区VNTR序列片断,部分PCR产物行测序验证。对等位基因分布频率进行对比分析。结果:共纳入反社会人格障碍者90例,健康者140例,均进入结果分析。①PCR产物的电泳结果:PCR产物电泳及测序比对,共获得4种30-bp重复序列的等位基因:3R,4R,5R,6R,最常见的等位基因是3R和4R。②病例组与对照组等位基因频率的比较:反社会人格障碍组3R,4R和5R等位基因频率与对照组比较相接近(52.22%,46.04%;45.56%,53.24%;2.22%,0.72%,P>0.05)。结论:3R等位基因频率与中国汉族男性反社会人格障碍人群的遗传易感性没有显著相关性。扩大样本量、以家系为基础的关联分析、亲属配对对照的方法可能有助于进一步阐清MAO-A基因启动子区多态性在反社会人格障碍形成中所扮演的角色。

头穴透刺对运动性疲劳大鼠下丘脑色氨酸羟化酶、单胺氧化酶A的影响

目的:探讨头穴透刺对运动性疲劳大鼠下丘脑色氨酸羟化酶(TPH)、单胺氧化酶A(MAO-A)表达的影响。方法:取8周龄健康Wistar大鼠48只,雌雄各半,除12只作空白对照组外,其他大鼠造疲劳力竭模型,随机分为模型组、头穴透刺组和传统针刺组,每组12只。共进行游泳大鼠模型训练4周后,观察各组大鼠力竭游泳后力竭时间;采用Western blot方法比较各组大鼠下丘脑组织TPH、MAO-A表达。结果:与模型组相比,针刺治疗组小鼠的力竭运动时间显著延长(P<0.05)。传统针刺组和头穴透刺组均能显著降低TPHmRNA的表达,增强MAO-AmRNA的表达,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.01);头穴透刺组在降低TPHmRNA表达,增强MAO-AmRNA表达方面优于传统针刺组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:头穴透刺能降低大鼠下丘脑组织中的TPHmRNA表达,增强MAO-AmRNA表达。

N-[2-(4-吗啉基)乙基]苯甲酰胺类单胺氧化酶抑制剂的合成及其生物活性研究

以取代苯甲酸为原料,经缩合反应制得N-(2-溴乙基)苯甲酰胺类化合物(4a^4i);4a^4i经N-烷基化反应合成N-[2-(4-吗啉基)乙基]苯甲酰胺类化合物(1a^1i),其结构经~1H NMR,^(13)C NMR,MS和元素分析表征。并对其生物活性进行了初步实验。实验结果表明:1a^1i对单胺氧化酶(MAO-A)有良好的抑制作用,其中1a最好,当IC50=3.652μmol·L^(-1)时,SI=42.32。

基于分子对接技术天然药物挥发油抗抑郁研究

单胺氧化酶(MAO)主要分布在脊椎动物的大脑和肝脏中,单胺氧化酶有两种亚型,分别为MAO-A和MAO-B,其中MAO-A是抗抑郁药物研发的靶点之一。本论文选取文献报道具有抗抑郁作用的天然药物挥发油,通过应用Discovery Studio(简称DS)分子模拟软件,模拟挥发油组分与靶点MAO-A的结合,分析其作用亲和力与结合方式,为天然药物挥发油抗抑郁成分作用机制提供参考,为发现新型抗抑郁药物提供研究方向。

EFFECTS OF ISATIN ON ROTATIONAL BEHAVIOR AND DA LEVELS IN CAUDATE PUTAMEN IN PARKINSONIAN RATS

Isatin was a potent endogenous monoamine oxidase (MAO) inhibitor that is more active against MAO-B than MAO-A. The acute effects of isatin on apomorphine (APO)-induced rotations were evaluated in Parkinsonian rats induced by 6-hydroxydopamine (6-OHDA) lesion. Furthermore, the effects of isatin on DA release in caudate putamen (CPu) of model and normal rats were monitored using fast cyclic vohammetry (FCV).