电针治疗对MCAO大鼠运动功能及梗死对侧大脑皮层GAP-43、MAP-2表达的影响

目的观察局灶性脑梗死大鼠梗死对侧皮层不同时期生长相关蛋白GAP-43(growth associated protein-43)及微管相关蛋白MAP-2(microtubule associated protein-2)表达的动态变化,探讨电针调节GAP-43和MAP-2表达与神经可塑性及大鼠运动功能改善的可能关系。方法 60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、模型组和电针组,模型组和电针组再随机分为3d、7d、14d、28d等4个亚组(剔除耗损或死亡,n=6)。运用Longa改良线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型,电针组取双侧"曲池""足三里"针灸治疗,余两组同一时间捆绑,不做治疗。采用Bederson法评定大鼠神经功能缺损情况、免疫组化法检测梗死对侧皮层GAP-43、MAP-2的表达变化。结果与模型组比较,电针组术后第3天神经功能缺损评分差异无统计学意义(P>0.05),随着治疗时间的延长,术后第7、14、28天神经功能评分逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,电针组术后第3天GAP-43、MAP-2阳性细胞表达量与模型组比较差异无统计学意义(均P>0.05);术后第7、14天GAP-43、MAP-2阳性细胞表达量明显高于模型组(均P<0.05),术后第28天GAP-43阳性细胞表达量明显高于模型组(P<0.05)。结论电针治疗增加梗死对侧皮层MAP-2、GAP-43的表达,改善了大鼠的运动功能,促进神经功能重塑,可能与加快启动梗死对侧皮层的保护机制、减少病灶对侧的远隔继发性损害有关。

当归对大鼠局灶性缺血脑组织细胞凋亡和MAP-2作用

采用大鼠局灶性脑缺血再灌流实验动物模型 ,观察当归对于脑缺血损伤的保护作用。采用线栓法制作单侧大鼠大脑中动脉栓塞模型 ,缺血 2h ,再灌 4 8h。当归治疗组缺血再灌后静脉滴注 5 0 %当归注射液 3 5～ 4ml。原位末端标记法观察细胞凋亡并计算凋亡指数 ,免疫组化观察微管相关蛋白 (MAP 2 )的表达。结果显示 ,当归治疗组较缺血再灌组脑缺血组织细胞凋亡明显减少 ,凋亡率下降 ,当归治疗组MAP 2的表达明显恢复 ,接近对照组。结论 ,当归能减少脑缺血损伤后缺血区细胞凋亡的发生 ,促进微管相关蛋白 (MAP 2 )表达 ,这是当归对大鼠局灶性脑缺血损伤保护作用的可能机制之一。

黄连解毒汤有效部位对脑缺血大鼠神经元MAP-2、PGP9.5表达及星形胶质细胞活化的影响

目的:观察黄连解毒汤有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)对局灶性脑缺血大鼠神经元MAP-2、PGP9.5表达及星形胶质细胞活化的影响,探讨其对神经元-胶质细胞网络的调控作用。方法:中动脉栓塞法建立局灶性脑缺血大鼠模型,SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、黄连解毒汤水提物组(800mg/kg)、总生物碱组(44mg/kg)、总黄酮组(50mg/kg)、总环烯醚萜组(80mg/kg),每天灌胃给药1次,连续给药7天。免疫荧光染色结合图像分析技术检测脑缺血大鼠梗死灶周围皮层MAP-2、PGP9.5及星形胶质细胞活化标志蛋白GFAP的表达。结果:脑缺血7天大鼠PGP9.5表达下调,GFAP表达增强,差异较假手术组明显(P<0.01);与模型组相比,黄连解毒汤水提取物组大鼠梗死灶周围神经元MAP-2表达明显上调,GFAP表达下调(P<0.01或P<0.05);总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜均可明显上调缺血大鼠梗死灶周围皮层MAP-2、PGP9.5表达,较模型组有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。总生物碱还可明显下调GFAP表达,较模型组具有显著性差异(P<0.01)。结论:黄连解毒汤有效部位总生物碱可减轻神经元轴突损伤,促进神经元树突重塑,抑制星形胶质细胞异常活化。

运动训练对大鼠脑梗死后肢体功能和GAP-43、MAP-2表达水平的影响

目的:研究运动训练能否促进大鼠局部脑缺血再灌注后的功能恢复并从神经可塑性角度探讨其机理。方法:线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO)模型,随机分为运动组、对照组、假手术组及正常组,运动组术后24h起每天游泳10min,采用行为测试试验评分观察肢体功能恢复情况,免疫组化法观察脑缺血周边区生长相关蛋白-43(GAP-43)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的免疫活性强度。结果:大鼠局部脑缺血再灌注后,运动组前肢放置试验和平衡试验评分优于对照组,前肢放置试验在第9、11、13、15、17、19、21、23、25天差异具有显著性(P均<0.01),平衡试验在第7、9、11、13、17、19天差异具有显著性(P<0.01—0.05)。运动组皮层缺血周边区GAP-43和MAP-2表达水平高于对照组,前者在第7天、14天、28天差异有显著性(P<0.05),后者在第14天、28天差异有显著性(P<0.05)。结论:运动训练能促进大鼠MCAO后的肢体功能恢复,其机制可能与缺血周边区GAP-43和MAP-2的表达上调有关。

益气活血法对脑缺血再灌注大鼠MAP-2及NOGO-A蛋白表达的影响

目的:探讨益气活血法对缺血再灌注大鼠的神经保护作用。方法:动物随机分为假手术组、模型组、益气组、活血组、益气活血组,以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注3、7、14 d,用免疫组织化学染色SABC法分别检测MAP-2及NOGO-A蛋白的表达。结果:脑缺血再灌注损伤后,模型组MAP-2表达下降,与假手术相比有显著性差异(P<0.05),而益气法、活血法和益气活血法三组治疗组均能显著促进MAP-2的表达(P<0.01)。脑缺血再灌注损伤7 d时,模型组NOGO-A表达与假手术相比有显著性差异(P<0.05)。而益气法、活血法和益气活血法三组治疗组NOGO-A的表达与模型组无显著性差异(P>0.05)。结论:益气活血法能显著促进MAP-2表达,有利于脑缺血后突触重塑和神经细胞轴突的再生,促进脑卒中后神经功能恢复。

补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中β-APP和MAP-2表达的影响

目的观察补肾益髓(BSYS)方及其拆方补肾(BS)和化痰活血(HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑和脊髓中β-淀粉样前体蛋白(β-APP)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的作用。方法 56只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(NC)、模型组(MO)、醋酸泼尼松组(PA)、梓醇组(CA)、补肾益髓组(BSYS)、补肾组(BS)和化痰活血组(HTHX),每组8只。对照药给予PA(6 mg/kg),CA(40 mg/kg);BSYS、BS和HTHX组分别以3.02 g,1.44 g和1.57 g生药/kg给药。NC及MO组以等量蒸馏水代替。每日1次,连续灌胃40 d。小鼠发病第25日(急性期)和第40日(缓解期)取脑和脊髓,采用免疫荧光(IF)法检测β-APP表达,免疫组化(IHC)法检测MAP-2的表达。结果发病第25日和第40日,MO组小鼠脑β-APP表达较NC组显著上调(P<0.001),而MAP-2表达则较NC组明显下调(P<0.01或P<0.001),与MO组比较,各治疗组(PA、CA、BSYS、BS和HTHX组)均可明显下调β-APP蛋白表达(P<0.05或P<0.01),上调MAP-2表达(P<0.05或P<0.01)。其中发病第25日小鼠脑β-APP表达PA组效果优于CA、BS及HTHX组(P<0.05)。各组小鼠脊髓内β-APP、MAP-2表达变化趋势与脑相似。结论 BSYS方及其拆方均能减轻轴突损伤及促进其修复,尤以BSYS全方更为显著。

树舌多糖对小鼠HepA瘤细胞的caspase-8、TNF-α及MAP-2的表达的影响

目的研究树舌多糖抑制肿瘤的作用机制。方法通过随机分组实验,测定树舌多糖对小鼠HepA瘤的抑瘤率,经Western blot检测caspase-8与TNF-α的表达,免疫荧光法检测MAP-2的表达,并通过电镜观察树舌多糖作用后细胞结构的变化。结果树舌多糖的抑瘤率为51.82%,经其作用后,Western blot显示caspase-8、TNF-α表达均显著增加,免疫荧光法检测MAP-2的表达也显著增加。电镜下观察到树舌多糖作用后细胞结构发生改变并形成凋亡细胞。结论树舌多糖通过促进caspase-8的表达,刺激TNF-α表达增加,进一步影响细胞骨架的重排从而促进细胞凋亡抑制小鼠HepA瘤的生长。

推拿对大鼠坐骨神经损伤后MAP-2和NF-M表达的影响

目的:研究推拿对坐骨神经损伤大鼠运动功能及MAP-2、NF-M表达的影响。方法:将40只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,建立坐骨神经损伤模型,通过按摩推拿手法模拟仪进行手法干预;观察各组大鼠斜板实验评分变化及L3-L5脊髓内MAP-2、NF-M表达情况。结果:模型组和模型对照组大鼠斜板实验评分低于正常组,NF-M、MAP-2积分光密度高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);推拿组大鼠斜板实验评分、NF-M、MAP-2积分光密度均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);推拿组大鼠斜板实验评分与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与正常组比较,推拿组NF-M、MAP-2积分光密度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:推拿可提高坐骨神经损伤大鼠MAP-2、NF-M表达,改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能。

TOCP诱发OPIDN后鸡神经组织MAP-2的变化

目的 探讨微管相关蛋白 2 (MAP -2 )在三邻甲苯磷酸酯 (TOCP)诱发的迟发性神经毒性 (OPIDN)中的含量变化及OPIDN的发病机制。方法 成年罗曼母鸡 18只 ,经口 1次给予TOCP 3 75和 75 0mg kg ,第 2 2天处死动物 ,冷环境下取出大脑、脊髓和坐骨神经 ,匀浆后WesternBlot方法测定MAP 2的含量。结果 TOCP使鸡大脑沉淀中MAP -2在 3 75和 75 0mg/kg组分别升高 2 82 %和 3 60 % ,上清中分别升高 160 %和 2 0 4% ,与对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0. 0 1) ;MAP -2在脊髓沉淀中分别降低 5 0 %和 43 % ,脊髓上清中分别降低 2 8%和 5 5 % (P <0 .0 1) ;坐骨神经上清中分别升高 85 %和 3 2 9% (P <0 .0 1) ,坐骨神经沉淀中未检出。结论 TOCP中毒性可引起鸡神经组织中的MAP 2含量发生不同程度改变 ,这种改变可能与TOCP引起的迟发性神经毒性有关。

头针电刺激百会与大椎穴对脑梗死大鼠MAP-2及Survivin的影响

目的:探讨头针电刺激对不同时间窗的脑梗死大鼠MAP-2及Survivin的影响。方法:将Wister雌性大鼠随机分为3组,给予相应造模方法,即头针电刺激组、模型对照组、假手术组,每组又分为7天组(15只大鼠)、14天组(15只大鼠)两个亚组。其中,头针电刺激组在造模术后24 h,针刺百会穴与大椎穴,将电针仪以密波参数为100 Hz进行电刺激,1次/日,30 min/次,余2组大鼠在每天相应时间固定于针刺平台,但不予任何处置。治疗7天与14天后,断头取脑。用Western blot技术检测梗死7天与14天脑组织中MAP-2及Survivin蛋白表达,测出蛋白表达相对值。结果:与同时段模型组比较,头针电刺激组7天、14天的MAP-2与Survivin蛋白表达明显增高,其中以14天时增高显著,差异具有统计学意义(P<0.05);与同时段假手术组比较,头针电刺激组14天的MAP-2与Survivin蛋白表达增高,模型组7天、14天的MAP-2与Survivin蛋白表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:头针电刺激能提高MAP-2及Survivin蛋白表达,保护受损神经细胞并促进受损细胞修护,抑制缺血区神经元的凋亡,促进血管再生,达到保护脑组织、恢复肢体功能作用,其中以头针电刺激组14天时疗效最佳。

电针对脊髓损伤后MAP-2 mRNA表达影响的实验研究

目的 :探讨电针治疗大鼠脊髓损伤 (SCI)对损伤神经系统神经元的修复再生过程中的有关因素MAP 2 (微管结合蛋白 )mRNA表达的影响。方法 :应用改良ALLEN氏致伤法制成大鼠胸12 不完全损伤模型 ,然后进行电针治疗 ,严格设立正常组、造模组、西药激素组作为实验对照 ;应用半定量RT PCR法观察MAP 2的不同时间点 (1周、2周、4周 )的mRNA表达。结果 :电针组的MAP 2mRNA从 1周起就开始表达 ,2周、4周水平呈逐渐升高的趋势 ,并且较其他非电针组表达明显。结论 :电针可使MAP 2的mRNA表达较非电针组较早且较明显上调而提高微管的聚合能力 ,从而对神经细胞的胞体和突起的生长产生积极的影响 。

慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠不同脑区MAP-2的经时变化研究

目的研究微管结合蛋白-2(MAP-2)在慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠额、颞叶皮质和海马区的经时变化。方法采用双侧颈总动脉永久结扎方法制备慢性前脑缺血致VD大鼠动物模型;采用免疫组织化学方法检测痴呆鼠不同脑区MAP-2的经时变化情况;采用同济大学研制的HPIAS-1000高清晰彩色病理图文分析系统对不同脑区MAP-2阳性信号的面积密度进行分析。结果实验发现痴呆大鼠不同脑区MAP-2的表达随时间变化。缺血1个月、2个月、4个月后MAP-2的表达阳性面积逐渐减少,与对照组相比有统计学意义。从形态学变化角度来说,1个月时MAP-2轻度变化,提示为可逆性损伤。随着缺血时间的延长,MAP-2免疫组化染色越来越淡。至4个月时,MAP-2免疫组化染色基本消失,提示为不可逆损伤。结论慢性持续性脑血流量下降致MAP-2的改变在VD的病理生理过程中起重要作用。

经颅重复性低频磁刺激后大鼠苍白球及黑质HMW MAP-2表达的变化

观察经颅重复性低频磁刺激 (rTMS)对大鼠基底节输出结构高分子量微管相关蛋白 (HMWMAP 2 )阳性标记变化的影响。采用磁刺激器给予大鼠头部 1Hz,10 0mT的重复性刺激 ,然后用免疫组织化学ABC法检测苍白球外侧部 (GPe)、腹侧苍白球 (VGP)及黑质 (SN)等部位HMWMAP 2的免疫阳性产物。较之对照组动物 ,rTMS后苍白球外侧部和腹侧苍白球HMWMAP 2免疫反应物未见减少 ,且染色明显增强 ,阳性标记的纤维增粗 ;黑质特别是黑质网状部 (SNR)亦可见到染色明显增强的HMWMAP 2免疫标记出现。rTMS能够使基底节输出结构中HMWMAP 2的表达发生变化 ,推测可能通过树突重塑而致突触传递的变化等而发挥其临床治疗作用。

母源性丙烯酰胺暴露对子代鼠皮质神经元MAP-2与氧化应激的影响

目的:探讨母源性丙烯酰胺(acrylamide,ACR)暴露对子代鼠大脑皮质神经元MAP-2与氧化应激的影响。方法:SD孕鼠随机分为4组,自怀孕第6 d至怀孕第19 d起对照组和实验组分别灌胃给药给予双蒸水和每日8,16和24 mg/kg ACR溶液。HE和尼氏染色观察子代鼠皮质神经元形态学改变,免疫组织化学和Western Blot检测子代鼠皮质神经元MAP-2的表达,应用试剂盒检测大脑皮质组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、还原谷胱甘肽(GSH)。结果:(1)MAP-2表达:与对照组相比,实验组中、高剂量组MAP-2表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),而低剂量组则差异不显著(P>0.05)。(2)氧化应激指标变化:与对照组相比,实验组中、高剂量组子代鼠大脑皮质组织中MDA含量显著升高,而T-SOD活力和GSH含量显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:丙烯酰胺致子代鼠神经元损伤的机制可能与其诱导氧化应激损伤有关。

宫内感染对新生仔鼠脑内蛋白GAP-43和MAP-2影响的实验研究

目的:通过观察神经生长相关蛋白(GAP-43)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的变化,以研究宫内感染对新生儿脑发育的影响。方法:取孕17d的大鼠36只,随机取30只腹腔注射脂多糖(LPS)450μg/kg,连续注射2d,造成宫内感染模型,22d后出生的仔鼠22只作为I组;另6只注射等剂量生理盐水,将其所生仔鼠作为对照组(N组)。2组均于生后即刻(0日龄)、14和28日龄3个时间点观察仔鼠脑内GAP-43和MAP-2的表达情况。结果:0日龄I组仔鼠脑皮层、海马及内囊GAP-43、MAP-2免疫阳性面积比(AF)较对照组明显减少(P<0.05)。结论:GAP-43和MAP-2是神经生长发育和损伤修复的重要标记物之一,宫内感染可干扰仔鼠脑组织GAP-43和MAP-2的表达。

SHH的激活对永久性脑缺血大鼠细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2表达的影响

目的探讨应用purmorphamine激活SHH信号通路后对大鼠脑缺血区细胞骨架蛋白α-tubulin、MAP-2的影响。方法采用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉脑缺血模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组和给药组,其中给药组给予purmorphamine腹腔注射。于术后1d、3d、7d、14d用免疫组化法测定脑缺血后不同时相α-tubulin、MAP-2的表达,用RT-PCR测定Gli-1的表达。结果假手术组各时间点α-tubulin、MAP-2、Gli-1的表达差异无统计学意义;与之相比,模型组α-tubulin、MAP-2各时间点含量明显低于假手术组(P<0.05);给药组与模型组比较在1d、3d、7d各时间点α-tubulin、MAP-2的表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.05),第14天时趋于稳定;而给药组Gli-1各时间点的表达明显高于假手术组和模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论激活SHH信号通路可促进缺血区α-tubulin、MAP-2表达增加,这可能是其减轻脑缺血后神经损伤的机制之一。

脑梗死后细胞骨架MAP-2、NF200与Bcl-2的相关性研究

目的 探讨人脑梗死后神经元和轴突的细胞骨架与细胞凋亡的相关性。方法 应用 10例脑梗死后的尸检标本 ,常规HE染色和免疫组织化学染色 (SP)检测微管相关蛋白 (MAP 2 )、分子量为 2 0万的神经纤维中间丝(NF2 0 0 )、凋亡相关基因 (Bcl 2 ) ,进行定性和定量分析。结果 脑梗死后以梗死灶为中心 ,按照组织损伤程度由内到外分 4个区 (0～ 3区 ) ;MAP 2在 0区表达消失 ,在 1区和 2区表达增强并形态异常 ,在 3区未见明显改变 ;NF2 0 0在 0区表达消失 ,在 1区可见表达 ,在 2区表达明显并变形 ,在 3区无变化 ;Bcl 2在 0区和 1区表达很少 ,在 2区和3区表达最显著。结论 人脑梗死后涉及细胞骨架改变和细胞凋亡的发生 ,两者呈正相关。对此过程中涉及到的因素进行干预 ,可能改变卒中的进程和预后。

rhG-CSF联合bFGF对缺血性脑卒中鼠神经功能及CD34,MAP-2表达的影响

目的:研究bFGF和rhG-CSF单独和联合应用对缺血性脑卒中模型鼠神经功能和神经分化特异性抗体CD34,MAP-2表达的影响。方法:线栓法造模,bFGF组脑区注射bFGF,动员剂组rhG-CSF,联合组同做。分别于干预不同时段神经功能评价及脑区切片免疫荧光检测CD34,MAP-2表达。结果:处理早期,联用组及rhG-CSF组神经功能改善,CD34阳性细胞数较多;处理10d后,bFGF组神经功能改善明显,MAP-2阳性细胞数增多;联用组的CD34及MAP-2阳性细胞数均多于其他组。结论:rhG-CSF在使用10d内明显促进神经功能改善及CD34阳性细胞数量增加;bFGF作用15d达高峰,明显促进神经功能改善及MAP-2抗体的表达,显示出病灶区形成突触的有功能神经元的数量的增加;联合组对病灶区神经结构及功能都显示两因素的协同作用。

细胞外ATP对大鼠脊髓损伤后MAP-2表达及运动功能恢复的影响

目的研究细胞外三磷酸腺苷（ATP）对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2（MAP-2）表达及运动功能恢复的影响。方法选择健康成年Wistar大鼠110只，随机取10只作为正常对照组，其余100只制作成脊髓打击伤动物模型，然后分为A组（ATP组）和B组（阳性对照组），每组50只。伤后1、3、7、14、28d取材，应用免疫组织化学方法观察MAP-2的表达；并用改良的Tarlov评分观察大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复情况。结果脊髓损伤后14d和28d。A组大鼠MAP-2表达明显强于B组（P〈0．05）；伤后14d和28d，A组大鼠改良Tarlov评分明显优于B组（P〈0．05）。结论细胞外ATP能促进大鼠脊髓损伤表达MAP-2，并能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复。

长期大脑中动脉闭塞后远隔部位MAP-2和GFAP变化的实验研究

目的 探讨长期大脑中动脉闭塞 (MCAO)后丘脑、黑质网状部 (SNr)MAP - 2及GFAP的变化。方法 35只SD大鼠分为正常组、伪手术后 2周组和 1个月组、MCAO后 2周组、1个月组、3个月组和 6个月组等 7组 ,每组 5只。Tamura法制作动物模型。脑切片分别用鼠脑MAP - 2、GFAP抗体 ,ABC法染色。观察丘脑的面积改变 ,SNr的面积和长度的改变 ;SNr神经细胞和胶质细胞数的变化。结果 丘脑面积逐渐缩小 ;SNr面积、长度及神经细胞减少 ,GFAP增加 ,6个月后丝极消失。