MAP2K1基因突变所致心-面-皮肤综合征3一例

心-面-皮肤综合征3(CFC3)属于常染色体遗传病,临床表现为特殊面容、毛发稀疏、心血管系统疾病、喂养困难、全面发育迟缓等多发异常。本文报道1例CFC3病例,患者为9个月大男性婴儿,系巨大胎儿、贯通掌,存在明显的行为异常,患儿出生3个月内生长速度正常,出生3.5个月后骤然下降并出现停滞。本课题组采用全外显子组测序、和基因组拷贝数变异(CNV)分析先证者及其父母外周血DNA发现,先证者MAP2K1(NM_002755)基因的3号外显子存在新发突变c.389A>G(p.Tyr130Cys),并采用Sanger测序对该突变进行验证。根据美国医学遗传学会基因组协会(ACMG)致病性评级该突变为致病性变异。该病例的发现丰富了由MAP2K1基因突变所致CFC3综合征表型特征。

大肠腺癌中SNCG、MAP2和CXCR4表达及临床意义

目的探讨SNCG、MAP2和CXCR4蛋白在大肠腺癌、非肿瘤性大肠黏膜组织中的表达及与大肠腺癌发生、发展、浸润、转移的关系。方法采用免疫组化SP两步法检测大肠腺癌、非肿瘤性大肠黏膜组织中SNCG、MAP2和CXCR4蛋白的表达。结果大肠腺癌组织中SNCG、MAP2和CXCR4蛋白阳性率分别为72.22%、86.67%、76.67%,三者在大肠腺癌组织中的表达显著高于非肿瘤性大肠黏膜组织,差异均有统计学意义(P均<0.01);大肠腺癌组织中SNCG、MAP2和CXCR4的阳性表达均与癌组织浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。SNCG与MAP2、CXCR4在大肠腺癌组织中的表达均呈正相关(rs=0.341,rs=0.244,rs=0.247;P均<0.05)。结论 SNCG、MAP2和CXCR4在大肠腺癌组织中高表达,可能与大肠腺癌的发生、浸润、转移密切相关。

MicroRNA-25通过调控MAP2K4抑制糖尿病肾病纤维化的研究

目的检测microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及不同条件培养下的人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达,探讨其对糖尿病肾病纤维化的调节作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应检测microRNA-25的表达。生物信息学预测、细胞瞬时转染和Western blot验证microRNA-25的下游靶蛋白。结果 microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及高糖培养下的HK-2中表达降低(P<0.01)。MAP2K4可能是microRNA-25的下游靶蛋白。过表达microRNA-25可以从蛋白水平上抑制MAP2K4、α-SMA的表达(P<0.01)。结论 microRNA-25可以通过调控MAP2K4从而抑制糖尿病肾病纤维化的进展。

基于Map2Shp的MapGIS数据到ArcGIS数据的转换

由于长期以来我国国土及地矿行业所采用GIS软件主要是MapGIS 6.x,为了面向其他领域提供GIS空间数据共享,需要将大量MapGIS格式数据向ArcGIS格式数据转换。通过对MapGIS与ArcGIS两种数据格式的分析,提出了基于Map2Shp的转换方式。通过这种转换方式可以完整的保存MapGIS数据中的地理信息、属性以及要素特征。再通过匹配两种数据的颜色库和符号库,经过在ArcGIS中的渲染,从而实现从MapGIS到ArcGIS完整的制图表达。

SASH1通过MAP2K2和MAP4K4与ERK信号通路交互作用

目的探讨新候选抑癌基因SASH1与细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的两个关键分子MAP2K2和MAP4K4的蛋白-蛋白相互作用关系。方法用XhoⅠ和HpaⅠ构建SBP-Flag-SASH1-p BABE-puro反转录病毒载体,转染HEK-293T细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定表达外源性SASH1基因的细胞系。Western blot检测外源性Flag-SASH1蛋白表达,利用pull-down实验、质谱技术、免疫沉淀鉴定和分析与SASH1结合的并可能调节细胞增殖、转移和凋亡等的关键蛋白。用SASH1-siRNA1和SASH1-siRNA2分别转染MDA-MB-231细胞系,以空白组和Negative-siRNA组为对照。72 h后Western blot检测SASH1的干扰效果和P-ERK1/2水平。结果成功构建稳定表达SBP-Flag-SASH1-p BABE-puro重组质粒的HEK-293T细胞系,SASH1与MAP2K2和MAP4K4结合并发生相互作用。SASH1-siRNA有效抑制MDA-MB-231细胞SASH1蛋白表达(P<0.05),且P-ERK1/2在SASH1抑制组表达增加。结论 MAP2K2和MAP4K4是SASH1的重要的候选结合蛋白,SASH1可能通过与其直接或间接结合串话ERK信号传导通路,进而调节细胞增殖和迁移等细胞生物学功能。

大鼠局灶性脑缺血MAP2表达及毛冬青黄酮的保护作用

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血神经细胞MAP2表达,研究毛冬青黄酮对脑缺血的保护作用. 方法:选用颈外动脉插入线栓法制备大鼠大脑中动脉梗塞模型,40只雄性Wistar大鼠,随机分成正常对照组、假手术组、盐水-缺血3 h、6 h、24h组,毛冬青黄酮-缺血3 h、6 h、24h组.本研究以MAP2染色为指标,评价大鼠局灶性脑缺血损伤情况以及毛冬青黄酮对大鼠局灶性脑缺血MAP2表达的影响.MAP2在大鼠神经元中表达丰富,对兴奋性氨基酸、生长因子等反应敏感,是细胞内信号传导的重要环节,参与经元的生长和损伤后修复过程.MAP2对缺血敏感,可显示缺血时神经元损伤情况.

电针损伤大鼠中脑MAP2免疫组织化学研究

目的 :应用免疫组织化学方法观察电针损伤大鼠中脑后神经元 MAP2免疫反应变化。方法 :电针损伤大鼠中脑后不同时间取材 ,行 MAP2免疫组织化学染色。结果 :正常大鼠脑组织MAP2免疫反应发生在神经元的树突和胞体。电针损伤后可见 MAP2免疫反应不同的神经元 :固缩神经元 ,轻度受损神经元 ,正常神经元。结论 :在中枢神经系统损伤实验性研究中 ,MAP2免疫反应是观察神经元功能状态的敏感指标之一。

miR-125b通过靶向MAP2K7抑制三阴性乳腺癌的上皮间充质转化机制研究

目的探讨miR-125b在三阴性乳腺癌患者中的表达情况并且探讨该条件下miR-125b对MAP2K7的表达影响进而对肿瘤发生上皮间充质转化的发生产生的影响。方法利用乳腺癌患者活检的组织芯片通过原位杂交检测miR-125b的mRNA表达水平;利用划痕实验和基质胶侵袭实验检测过表达miR-125b对乳腺癌细胞的恶性表型的影响,利用RT-PCR和Western blot实验检测miR-125b对其靶基因MAP2K7和上皮间充质转化发生的分子标志物钙粘附蛋白E(E-cadherin)和钙粘附蛋白N(N-cadherin)的表达影响;利用裸鼠成瘤实验检测在体内过表达miR-125b对MAP2K7表达产生的影响。结果 miR-125b在的三阴性乳腺癌患者中显著降低,过表达miR-125b能够逆转乳腺癌细胞的侵袭迁移能力并且促进E-cadherin的表达,抑制N-cadherin的表达,能够负向调控MAP2K7的表达水平;抑制裸鼠的成瘤能力。结论 miR-125b在三阴性乳腺癌患者体内低表达并且miR-125b能够通过靶向MAP2K7抑制三阴性乳腺癌的上皮间充质转化的发生,从而抑制三阴性乳腺癌的发生发展进程。

miR-200b靶向MAP2对缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响

目的研究miR-200b对缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响及潜在机制。方法将大鼠皮质神经细胞分为正常对照组(不做处理),缺氧缺糖模型组(含0.5 mmol/L连二亚硫酸钠的无糖Earle.s液培养48 h),anti-miR-NC组、anti-miR-200b组、miR-NC组和miR-200b组,qRT-PCR检测细胞中miR-200b、calpain1 m RNA和MAP2 mRNA的含量,Western blot测定MAP2、calpain1、凋亡相关蛋白pro-caspase3和cl-caspase3的水平,CCK8法和流式细胞术分别检测细胞存活率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-200b与MAP2的靶向关系。结果与对照组相比,缺氧缺糖模型组大鼠皮质神经元细胞中miR-200b和calpain1 mRNA水平均升高(P<0.05),MAP2 mRNA水平降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);在缺氧缺糖模型组大鼠皮质神经元细胞中抑制miR-200b可提高细胞存活率(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),提高pro-caspase3、MAP2mRNA和蛋白含量(P<0.05),降低cl-caspase3、calpain1 mRNA和蛋白含量(P<0.05),过表达miR-200b则结果相反;双荧光素酶报告实验结果表明,MAP2是miR-200b的靶点。结论miR-200b可能靶向MAP2调控缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤和凋亡。

丝裂原活化蛋白激酶MAP2K5-rs4776970多态性与异常代谢相关性研究

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶MAP2K5-rs4776970单核苷酸多态性(SNP)与异常代谢的相关性。方法:纳入体检人群1224例,根据胆固醇修订标准(ATPⅢ*),分为代谢综合征(MS)组和非MS组,其中MS组520例;非MS组704例。运用实时荧光定量PCR结合TaqMan-MGB探针进行SNP的检测。高敏C反应蛋白(hs-CRP)为免疫比浊法。结果:MS组中MAP2K5-rs4776970的AA型(7.5%vs 4.0%)分布频率显著升高(P<0.05),TT型(56.2%vs 59.5%)、TA型(36.3%vs36.5%)分布频率在两组间未见明显差别(P=0.954);A等位基因发生的频率在MS组中显著高于非MS组(25.7%vs.22.2%,P=0.048)。校正了年龄和性别,Logistic回归分析提示,MS的发病与MAP2K5-rs4776970基因型无显著相关性(OR=0.851,95%CI:0.7~1.035,P=0.106)。相关性分析提示MAP2K5-rs4776970基因型与腰围(WC)、身体质量指数(BMI)及Hs-CRP相关(P=0.015;P=0.011;P=0.049),与MAP2K5-rs4776970TT、TA基因型相比,AA基因型中WC、BMI及Hs-CRP水平显著升高(P<0.01)。结论:MAP2K5-rs4776970基因多态性可能与肥胖及血管慢性炎症有关,但不是MS的独立危险因素。

miRNA-141通过抑制MAP2K4促进大肠癌增殖的研究

目的:探究miRNA-141通过抑制MAP2K4对促进大肠癌增殖的效果。方法:本文共选取2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI检查被诊断为大肠癌的患者24例,提取总RNA,RNA浓度测量使用紫外分光光度法,取5μL RNA样品,运用RNase对离子水进行稀释,在对OD值进行测量时需使用紫外分光光度计进行测量。RT-PCR扩增,cDNA模版的合成主要是应用PCR逆转录反应来实现,RT-PCR扩增主要是应用ALL-in-One试剂盒,具体的步骤及方法应严格按照试剂盒上的说明书开展。结果:大肠癌及肠黏膜的提取方法主要是应用Trizol方法。在对miR-141的相对表达量进行检测时,主要是采用荧光实时定量PCR法。在对细胞转染WT FL质粒进行检验时,主要是使用荧光仪来检测荧光酶的活性,会发现FL活性下降,突变质粒的FL活性未发生明显的变化。结论:在大肠癌诊断中MRI发挥了重要作用,miR-141的表达水平会随着大肠癌TNM分期而增高,miR-141表达上调,说明大肠癌与miR-141之间的发展有直接关系,有助于抑制癌细胞的快速生长。

朗格汉斯细胞组织细胞增生症中BRAF V600E和MAP2K1基因突变的分析及其临床意义

目的:探讨我国朗格汉斯细胞组织细胞增生症(Langerhans cell histiocytosis,LCH)中BRAF V600E和MAP2K1基因突变发生状况及其临床意义。方法:随机选取35例LCH组织标本,采用桑格测序法检测其中BRAF V600E和MAP2K1基因突变状况,免疫组化法检测BRAF V600E蛋白的表达。分析BRAF V600E、MAP2K1基因突变与LCH临床基本资料(年龄、性别、单/多系统)的关系。结果:在35例LCH患者中,男女比例为1.7∶1,82.9%侵及骨组织,97.1%是单系统LCH(single system LCH,SS-LCH),2.9%是多系统LCH(multi-system LCH,MS-LCH)。桑格测序法检测BRAF V600E基因突变率为17.1%,MAP2K1基因突变率为14.3%,MAP2K1与BRAF V600E基因突变有互异性;免疫组化法检测BRAF V600E阳性表达率为28.6%,涵盖了桑格测序法测得的突变病例。BRAF V600E和MAP2 K1基因突变更多出现在未成年组(35.7%和28.6%),其中BRAF V600E突变在未成年人组与成人组间有显著性差异(P=0.028);BRAF V600E和MAP2K1基因突变对生存的影响无统计学差异(P>0.05)。结论:我国LCH患者大部分都是SS-LCH,主要侵及的部位是骨组织,且预后良好,5年生存率为97.1%。桑格法所测的BRAF V600E和MAP2K1基因突变率均低于西方报道,两者存在互异性,分别为17.1%和14.3%。所有MAP2K1基因突变都是点突变,没有框内缺失突变,发现一个新的突变位点:c.112 G>A p.E38K;BRAF V600E和MAP2K1基因突变主要发生于未成年组中,提示各年龄层中LCH的发病机理可能不同,可能RAS/RAF/MEK/ERK通路在未成年人LCH中发挥更重要的作用;另外这两种突变对LCH的生存无影响。

NGF诱导PC12细胞转化为神经样细胞微管相关蛋白2(MAP2)的表达

目的探讨神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化为神经元样细胞时MAP2的表达变化情况.方法细胞培养6 d后应用共聚焦显微镜观察MAP2表达情况;Western Blot法检测诱导不同时间点MAP2的表达情况.结果免疫组化结果显示:MAP2表达呈阳性;免疫印迹结果显示:MAP2蛋白表达在不同时间点呈动态变化,即随诱导时间延长呈递增趋势.结论 NGF成功诱导PC12细胞分化为神经样细胞,为缺血性脑卒中的体外细胞研究提供细胞参考.

海马注射Aβ25-35对大鼠CA1区tau蛋白和MAP2影响的研究

目的采用β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)25-35注射法建立Alzheimer病(Alzheimer disease,AD)大鼠模型,观察该AD模型中tau蛋白和微管相关蛋白2(microtubule-associated protein-2,MAP2)表达情况。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分成健康对照组、假手术组及AD模型组,以凝聚状态的Aβ25-35经大鼠右侧海马注射制作AD模型,造模2周后应用HE染色和免疫组化方法,观察AD模型鼠脑中海马CA1区病理形态以及tau蛋白和MAP2的表达。结果AD模型组大鼠海马CA1区锥体细胞层紊乱、变稀、中断、数量减少,同时可见许多细胞体积缩小,胞核固缩且染色加深。AD模型鼠海马CA1区AD模型组tau蛋白阳性细胞(62.13±4.1 2)个/HP,较健康对照组[(26.78±3.46)个/HP]与假手术组[(26.36±3.13)个/HP]明显增高(均P<0.01);MAP2阳性细胞吸光度值AD模型组为5.13±4.12,较健康对照组(28.78±3.46)与假手术组(29.36±3.13)明显减少,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论在Aβ诱导的AD模型中tau蛋白表达增高,MAP2表达减低。

DOS下map2exe的实现技术

本文介绍了将内存中的映象文件转换成可执行文件的方法，并给出转换程序．可广泛用于各种ｅｘｅ文件的脱壳。

三角帆蚌MAP2K1基因的分子特征和表达

为研究MAP2K1(MEK1)基因在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)性别决定中的作用,采用cDNA末端快速克隆技术(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)克隆了MAP2K1基因序列,利用实时荧光定量分析比较MAP2K1基因在三角帆蚌6个组织(性腺、闭壳肌、肝胰腺、鳃、外套膜、斧足)、早期发育阶段(1—8月龄)性腺和1—3龄雌雄性腺中的表达水平,利用原位杂交确定MAP2K1基因在2龄三角帆蚌性腺中的定位。结果显示,MAP2K1基因开放阅读框(ORF)长度为1194 bp,编码397个氨基酸。MAP2K1基因在卵巢中高表达;早期发育阶段在2月龄表达量最高;1—3龄的表达结果显示,MAP2K1基因在卵巢中的表达量均高于同期精巢中的表达量(P<0.05)。原位杂交结果显示,MAP2K1基因在雌性三角帆蚌的卵母细胞及卵子上有明显的杂交信号。RNAi结果显示,干扰MAP2K1基因的上游基因C-MOS后,下游基因MAP2K1在雌性中的表达下降了82.31%,在雄性中的表达下降了73.60%。推测MAP2K1基因可能参与三角帆蚌的卵巢发育过程,在三角帆蚌中属于偏雌性基因,其表达受C-MOS基因的影响。

猪MAP2K6基因多态性及其与经济性状的关联分析

本实验旨在探究猪丝裂原活化蛋白激酶激酶6(Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase 6,MAP2K6)多态性与猪重要经济性状的关系,为猪育种提供新的标记资源。实验选用法系大白猪为研究对象,采用质谱技术对猪MAP2K6基因的SNPs位点进行基因分型,同时利用线性混合模型分析单个标记位点与猪重要经济性状的相关性,共检测出4个SNPs,通过与生长育肥和乳头数性状的关联分析表明,rs345304630(SNP1)、rs325278117(SNP2)和rs332017877(SNP3)与达100 kg体重日龄和右乳头数显著相关,rs325752048(SNP4)与眼肌面积显著相关;连锁不平衡结果表明,MAP2K6基因SNP1、SNP2和SNP3处于强连锁不平衡状态。结果提示,在育种进程中,通过对优质基因型的选择来缩短母猪达100 kg体重日龄,增加母猪的泌乳和带仔能力,对提高哺乳仔猪的存活率和断奶重具有重要意义,也可为猪生长育肥和乳头数性状的分子标记的挖掘和利用提供一定的理论依据。

干扰MAP2基因表达对胶质瘤细胞生物学特性的影响

目的:通过RNA干扰降低胶质瘤细胞中MAP2表达后观察其对胶质瘤细胞生物学特性的影响。方法:RT-qPCR和Western blot测定胶质瘤细胞Hs683、U251中MAP2的基因和蛋白表达。构建shRNA MAP2质粒,转染胶质瘤细胞,筛选出MAP2低表达的胶质瘤细胞,并经Western blot验证。对转染后胶质瘤细胞行MTT检测细胞活性、PI-FACS检测细胞周期、Annexin V-APC单染法行细胞周期检测、Transwell实验检测细胞的迁移能力,并使用Western blot测定转染后胶质瘤细胞中α-管蛋白和乙酰化α-管蛋白的含量。结果:转染shRNA MAP2后胶质瘤细胞中MAP2的蛋白表达显著降低。分子生物学实验显示转染shRNA MAP2后胶质瘤细胞的活性降低、凋亡增加、细胞迁移能力下降、细胞周期有所变化但无特异性,代表微管稳固性的乙酰化α-管蛋白含量基本不变。结论:RNA干扰降低胶质瘤细胞Hs683、U251中MAP2表达后,能降低细胞活性、增加凋亡、降低细胞迁移能力,但这些变化似与微管的稳固性无关。

狮头鹅MAP2K1基因SNP位点筛查及生物信息学分析

MAP2K1基因属于GnRH信号通路且与哺乳动物的卵泡发育紧密相关。为研究MAP2K1基因在狮头鹅上的基因多态性,以200羽狮头鹅为试验对象,利用DNA池结合PCR产物直接测序法,筛选出SNP位点并进行生物信息学分析。检测结果表明,在狮头鹅群体中发现1个SNP位点,为E3-63 A>G,存在3种基因型。生物信息学预测显示,MAP2K1基因突变前后编码氨基酸并未发生改变,属于不稳定不跨膜酸性亲水性蛋白,存在卷曲螺旋结构,无信号肽存在。亚细胞定位于细胞核、细胞质、细胞支架的概率分别为60.9%、30.4%、8.7%,主要在细胞核发挥生物学作用;有34个磷酸化位点,有1个N-糖基化位点,1个保守结构S_TKc,蛋白二级结构主要由α螺旋和无规则卷曲组成。MAP2K1基因突变前后mRNA的最小自由能,质心发生二级结构,含有假结的mRNA二级结构、折叠结构、MaxExpect结果、点-括号结果、最小自由能、mRNA结构的热力学集合、质心结构所形成的山地图发生改变,且自由能上升,结构稳定性变弱。从狮头鹅MAP2K1基因的11个外显子上检测出1个SNP位点,MAP2K1基因突变前后改变mRNA二级结构,为进一步研究MAP2K1基因对狮头鹅产蛋数量提供参考。

浅谈MAP2DR2安全模型在等级保护下的应用

文章提出了一种新的安全模型——MAP2DR2安全模型,并尝试从另一个角度解读等级保护标准,从而更有效地评价组织的安全防护水平。