肿节风总黄酮调节MAPK/JNK信号通路促进巨核细胞分化成熟

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/c-Jun N-末端激酶(JNK)信号通路探讨肿节风总黄酮对体外巨核细胞分化成熟障碍模型的影响及作用机制。方法 利用终浓度为5 ng·mL^(-1)的佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)和体积分数为1%的抗血小板血清(APS)联合作用于Dami细胞,构建体外巨核细胞分化成熟障碍模型。将细胞分为空白对照组、PMA诱导组(5 ng·mL^(-1))、APS模型组(5 ng·mL^(-1)PMA+1%APS)以及肿节风总黄酮高、中、低剂量组(15.6、7.8、3.9μg·mL^(-1)肿节风总黄酮+5 ng·mL^(-1)PMA+1%APS)。分别于培养48、72、96 h后,采用化学发光法检测细胞增殖活力。培养96 h后,采用流式细胞术检测各组Dami细胞的巨核细胞表面标志物CD41a、CD42b和CD61表达情况;采用Western Blot法检测Dami细胞MAPK/JNK信号通路关键蛋白p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun的表达情况。结果 (1)与空白对照组相比,PMA诱导组不同时间点的细胞活力均显著降低(P<0.01);与PMA诱导组相比,APS模型组48 h的细胞活力明显下降(P<0.05),但随时间延长抑制作用减弱,72、96 h的差异无统计学意义(P>0.05);与APS模型组比较,肿节风总黄酮中、高剂量组48、72 h的细胞活力均受到明显抑制(P<0.05,P<0.01),肿节风总黄酮高剂量组96 h的细胞活力受到显著抑制(P<0.01)。(2)与空白对照组比较,PMA诱导组Dami细胞表面的CD41a、CD42b和CD61表达水平均显著升高(P<0.01)。与PMA诱导组比较,APS模型组Dami细胞表面的CD41a、CD42b和CD61表达水平均显著降低(P<0.01);p-JNK/JNK及p-c-Jun/c-Jun蛋白表达显著上调(P<0.01)。与APS模型组比较,肿节风总黄酮高、中剂量组Dami细胞表面的CD41a、CD42b和CD61表达水平均显著升高(P<0.01),细胞p-JNK/JNK蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01);肿节风总黄酮低、中、高剂量组Dami细胞p-c-Jun/c-Jun蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论 肿节风总黄酮可能通过调节MAPK/JNK信号通路来改善巨核细胞分化成熟障碍。

散结片对肝癌大鼠巨噬细胞极化及MAPK/JNK信号通路的作用机制

目的 :探究散结片对肝癌大鼠巨噬细胞极化及MAPK/JNK信号通路的作用机制。方法 :选取SPF级SD雄性裸鼠,随机分为正常组、模型组、索拉非尼组、散结片组,记录大鼠死亡数量并绘制生存曲线,H-E染色检测肝组织病理形态,免疫组织化学显色检测肝组织巨噬细细胞特异型标志物的蛋白表达,免疫印迹法检测肝组织MAPK/JNK信号通路相关蛋白表达。结果 :与正常组比较,模型组大鼠死亡数量、肝组织CD163、p38MAPK、JNK蛋白表达明显增多,生存曲线、肝组织中CD11c蛋白表达明显降低;与模型组比较,索拉非尼组、散结片组死亡数量、肿瘤质量及体积、肝组织CD163、p38MAPK、JNK蛋白表达显著减少,生存曲线、肝组织中CD11c蛋白表达显著升高,且散结片组比索拉非尼组变化显著;而抑制剂组与散结片组肝织中p38MAPK、JNK蛋白表达相比差异无统计学意义,联合组比抑制剂组明显降低。结论 :散结片可能是通过抑制MAPK/JNK信号通路,抑制巨噬细胞向M2型极化,促进其向M1型极化,进而抑制肝癌大鼠肿瘤生长。

右美托咪定对人乳腺癌SKBR-3细胞株MAPK/JNK/Bcl-2信号通路及癌细胞转移、侵袭的影响

目的探讨右美托咪定对人乳腺癌SKBR-3细胞株MAPK/JNK/Bcl-2信号通路及癌细胞转移、侵袭的影响。方法人乳腺癌SKBR-3细胞株细胞设SKBR-3细胞组、顺铂组(100.0 μg/mL)、右美托咪定低剂量组(100.0 μg/mL)、右美托咪定高削量组(200.0 μg/mL),各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后,使用MTT测定法测定细胞活力,Giemsa溶液染色计算克隆形成教目,伤口愈合测试细胞侵袭能力,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,RT-PCR法及western-blot法测细胞MAPK、JNK、Bcl-2基因和蛋白水平。结果与SKBR-3细胞组比较,顺柏组、右美托咪定低/高剂量组的OD值、存活率、克隆形成数目、侵袭距离、MAPK、JNK、Bcl-2 mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05)。与顺铂组比较,右美托咪定低/高剂量组的OD值、存活率、克隆形成数目、侵袭距离、MAPK、JNK、Bcl-2 mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)。与右美托咪定低剂量组比较,右美托咪定高剂量组的OD值、存活率、克隆形成数目、侵袭距离、MAPK、JNK、Bcl-2 mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05)。结论右美托咪定能明显抑制SKBR-3乳腺癌细胞增殖、转移、侵袭,促进其凋亡,与剂量呈正性相关,其作用机制可能与明显抑制SKBR-3细胞MAPK、JNK、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达进而抑制MAPK/JNK/Bcl-2信号通路的激活有关。

叶酸通过JNK/p38 MAPK信号通路调节小鼠C2C12成肌细胞分化

目的:观察叶酸(folic acid,FA)对小鼠C2C12成肌细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:(1)在小鼠C2C12成肌细胞增殖阶段,采用不同浓度(0、2.5、5、10和20μmol/L)的FA处理C2C12细胞,显微镜下观察各组细胞的状态,MTT法检测细胞活力,EdU法检测细胞增殖情况。(2)在小鼠C2C12成肌细胞分化阶段,将细胞分为对照(control,Ctrl)组(0μmol/L FA)和FA组(10μmol/L FA),于分化的第2天和第4天,采用免疫荧光染色和Western blot检测成肌细胞分化相关蛋白成肌细胞决定蛋白1(myoblast determination protein 1,MyoD)、成肌蛋白(myogenin,MyoG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的表达水平,并统计各组细胞肌管形成情况。(3)在小鼠C2C12成肌细胞分化第4天时,加入FA处理0、1、3和6 h,采用Western blot检测各时点c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白水平。(4)将分化4 d的小鼠C2C12成肌细胞分为Ctrl组、FA组、SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SB2035805(p38 MAPK特异性抑制剂)组、FA+SP600125组和FA+SB203580组。C2C12成肌细胞先接受10μmol/L的SP600125或SB203580处理1 h,再经10μmol/L的FA处理24 h,FA组经10μmol/L FA处理24 h,Ctrl组不作处理。采用Western blot检测p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK和MyHC蛋白水平。结果:(1)与0μmol/L FA组相比,其余各浓度组的细胞数量明显增多,细胞活力显著提高(P<0.05),EdU阳性细胞率均显著增加(P<0.05)。(2)与Ctrl组相比,FA组MyoD、MyoG和MyHC的表达水平均显著提高(P<0.05),肌管融合指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与0 h组相比,FA处理1、3和6 h后p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),且随着处理时间的延长,p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值呈现逐渐升高的趋势。(4)与Ctrl组相比,FA组p-JNK、p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著升高(P<0.01);与FA组相比,FA+SP600125组p-JNK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05),FA+SB203580组p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FA可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路促进小鼠C2C12成肌细胞分化。

肉苁蓉苷A通过JNK/MAPK通路抑制破骨细胞活性

背景:研究证实肉苁蓉苷A具有抗炎、抗氧化和抗骨质疏松的作用,但其对破骨细胞分化和功能的影响及潜在的机制尚缺少研究。目的:探讨肉苁蓉苷A对核因子κB受体活化因子配体诱导的体外破骨细胞分化和骨吸收功能的影响及作用机制。方法:提取与培养4-6周龄C57BL/6小鼠股骨和胫骨中的骨髓巨噬细胞,采用CCK-8毒性实验检验不同浓度的肉苁蓉苷A(5,10,20,40,80,160μmol/L)对骨髓巨噬细胞的毒性,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察不同浓度的肉苁蓉苷A干预破骨细胞的分化情况,确定药物的有效干预浓度。将实验分为阳性对照组、肉苁蓉苷A低、中、高剂量组(40,80,160μmol/L),细胞贴壁后各组均加入50 ng/mL的核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞分化,肉苁蓉苷A低、中、高剂量组分别加入相应剂量的肉苁蓉苷A进行干预。采用肌动蛋白环鬼笔环肽染色和DAPI染色检测肉苁蓉苷A对破骨细胞形成的影响;骨磨片甲苯胺蓝染色观察肉苁蓉苷A对破骨细胞骨吸收功能的影响;Western blot检测JNK/MAPK通路上下游蛋白的表达情况;RT-qPCR检测抗酒石酸酸性磷酸酶、DC-STAMP、Nfatc-1、Ctsk和c-Fos等破骨细胞分化和骨吸收功能相关基因的表达情况。结果与结论:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色、肌动蛋白环染色和骨陷窝甲苯胺蓝染色结果表明,与阳性对照组相比,肉苁蓉苷A对核因子κB受体活化因子配体诱导的体外破骨细胞的分化和骨吸收功能具有呈剂量依赖性的显著抑制作用;②RT-qPCR结果表明,与阳性对照组相比,肉苁蓉苷A高剂量组和低剂量组的抗酒石酸酸性磷酸酶、DC-STAMP、Nfatc-1、Ctsk和c-Fos等的mRNA表达量均显著降低,且肉苁蓉苷A高剂量组的降低效果更加显著;③Western blot结果显示,高剂量肉苁蓉苷A干预10,20,30和60 min时显著抑制p-JNK蛋白的表达;与阳性对照组相比,肉苁蓉苷A低、中、高剂量组显著抑制Nfatc1和c-Fos蛋白的表达,且呈剂量依赖性;④结果说明,肉苁蓉苷A能够通过降低p-JNK蛋白水平,抑制MAPK通路的激活和破骨细胞关键基因的表达,进而抑制破骨细胞的形成和骨吸收功能。

基于JNK/p38 MAPK信号通路探讨黄芪对阿尔茨海默病大鼠认知功能的影响

目的:基于JNK/p38 MAPK信号通路探讨黄芪对阿尔茨海默病大鼠认知功能的影响。方法:将60只Wistar大鼠作为本研究对象,以其中的15只列为对照组,剩余大鼠分为模型组(15只)、西药治疗组(15只)、黄芪治疗组(15只),各予以0.9%NaCl用药处理、盐酸多奈哌齐治疗、黄芪甲苷治疗。对比四组大鼠各方面的变化情况。结果:对照组JNK、p38 MAPK表达量均低于其余三组,且黄芪治疗组JNK、p38 MAPK表达量均低于模型组和西药治疗组,差异具有显著性(P<0.05);对照组各炎性因子水平均低于其余三组,且黄芪治疗组各炎性因子水平均低于模型组和西药治疗组(P<0.05);对照组Morris水迷宫实验第2、3、4d的结果均优于其他三组,且黄芪治疗组Morris水迷宫实验第2、3、4d的结果均优于模型组和西药治疗组,差异具有显著性(P<0.05);对照组新物体识别(NOR)实验中的测试期总探索时间均短于其他三组,新物体偏爱指数均高于其他三组;且黄芪治疗组新物体识别(NOR)实验中的测试期总探索实践均短于模型组和西药治疗组,新物体偏爱指数均高于模型组和西药治疗组,差异具有显著性(P<0.05)。结论:黄芪治疗对于改善阿尔茨海默大鼠的认知功能具有优势,其药物作用机制与JNK/p38 MAPK信号通路存在一定联系。

槐定碱通过JNK/MAPK信号通路介导前列腺癌PC3细胞的凋亡

目的:探究槐定碱对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响,及其促进细胞凋亡可能的作用机制。方法:采用MTT法分析槐定碱对前列腺癌PC3细胞增殖的抑制作用;台盼蓝染色实验检测槐定碱对前列腺癌PC3细胞生长增殖的影响;Hoechst 33342染色法和流式细胞术检测槐定碱对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响;Western blot检测槐定碱对前列腺癌PC3细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2及凋亡信号通路蛋白p-JNK、p-p38、p-ERK表达的影响。结果:随着槐定碱浓度的升高,PC3细胞抑制率逐渐升高,作用呈剂量依赖性,细胞增殖受到明显抑制作用(P<0.05);槐定碱组的细胞凋亡率显著升高,Caspase-3、Bax促凋亡蛋白表达显著增高,而Bcl-2抑凋亡蛋白表达则显著降低(P<0.05);MAPK信号通路蛋白p-JNK表达显著升高(P<0.05),p-p38、p-ERK表达无显著性差异(P>0.05);JNK抑制剂SP600125逆转槐定碱对前列腺癌PC3细胞凋亡的促进作用(P<0.05);槐定碱能下调裸鼠瘤体体积、瘤体质量(P<0.05)。结论:槐定碱能抑制前列腺癌PC3细胞增殖,促进其凋亡,具有良好的抗肿瘤活性;其可能通过JNK/MAPK信号通路介导前列腺癌PC3细胞的凋亡。

槲皮素对口腔鳞癌细胞增殖凋亡等细胞生物学行为及p38/JNK MAPK信号通路的影响

目的:探讨槲皮素对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p38/JNK MAPK信号通路的影响。方法:以体外培养的口腔鳞癌Tac8113细胞为研究对象,分别设置空白对照组,槲皮素低剂量组(25μmoL/L)、高剂量组(50μmoL/L)及阳性对照组(顺铂4μg/mL)。CCK-8法检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞增殖的影响;流式细胞仪检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞凋亡的影响;Transwell实验检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞迁移、侵袭的影响;WB法检测p38/JNK MAPK信号通路相关蛋白表达。结果:与空白对照组相比,槲皮素低、高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数及侵袭数均下降,凋亡率增加(P<0.05);与槲皮素低剂量组相比,槲皮素高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数及侵袭数均下降,凋亡率增加(P<0.05),呈现剂量依赖性;槲皮素高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数、侵袭数及凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,槲皮素低、高剂量组p-p38、p-JNK及Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05);与槲皮素低剂量组相比,槲皮素高剂量组p-p38、p-JNK及Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05),呈现剂量依赖性;空白对照组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组、阳性对照组p38、JNK蛋白表达差异不显著(P>0.05)。结论:槲皮素可以降低口腔鳞癌Tac8113细胞的增殖活力、迁移和侵袭数,诱导Tac8113细胞凋亡,这可能是通过激活p38/JNK MAPK信号通路实现的。

比索洛尔通过ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路改善缺血再灌注诱导的H9C2心肌细胞损伤的研究

目的:探讨比索洛尔对缺血再灌注(I/R)诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法:体外培养H9C2心肌细胞,将H9C2心肌细胞分为对照组(Control组)、缺氧/复氧(H/R)模型组(Model组)、比索洛尔组(Bisoprolol组)、比索洛尔+凋亡信号调节激酶1(ASK1)重组蛋白组(Bisoprolol+ASK1组)。除Control组外,其余各组H9C2心肌细胞均进行H/R损伤处理。采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测细胞活力;采用流失细胞术检测细胞凋亡;采用酶联免疫吸附试验检测细胞中心肌损伤标志物[乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)]和炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平;采用激光共聚焦检测细胞中钙离子浓度;采用蛋白质印迹法检测细胞中ASK1-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝分裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Model组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Model组比较,Bisoprolol组和Bisoprolol+ASK1组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均升高,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Bisoprolol组比较,Bisoprolol+ASK1组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:比索洛尔能够通过抑制炎症反应和钙超载,改善I/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,其作用机制可能与抑制ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路激活有关。

黄芩苷通过激活JNK/p38 MAPK通路诱导ALL Reh细胞凋亡

目的 探究黄芩苷对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株Reh增殖和凋亡的影响及c-Jun氨基蛋白激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在其机制中的作用。方法 黄芩苷处理或联合活性氧(ROS)清除剂NAC共处理Reh细胞;流式细胞术检测细胞凋亡、胞内ROS水平和线粒体膜功能(MMP);免疫荧光实验观察凋亡细胞的数目及其形态变化。Western blotting免疫印迹检测Reh细胞内凋亡蛋白和信号通路蛋白的表达水平。结果 与对照组比较,黄芩苷组Reh细胞增殖被抑制,细胞凋亡率、促凋亡蛋白、ROS、JNK和p38磷酸化水平显著上升,抗凋亡蛋白表达下调,MMP明显受损(P<0.01)。NAC清除ROS后明显恢复细胞增殖,JNK和p38磷酸化水平明显下降,Survivin表达恢复(P<0.01)。结论 黄芩苷经激活JNK/p38 MAPK通路活化Caspase3/7,诱导Reh细胞凋亡。

miR-149-3p调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎性反应的影响

目的探讨miR-149-3p通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎症反应的影响。方法体外分离大鼠髓核细胞,用IL-1β浓度为10 ng/ml建立模型组,细胞分为Con组(空白对照)、IL-1β组(IL-1β处理)、IL-1β+miR-NC组(IL-1β处理,转染miR-NC)、IL-1β+miR-149-3p组(IL-1β处理,转染miR-149-3p)、IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组(IL-1β和通路激活剂Anisomycin处理,转染miR-149-3p)。采用qRT-PCR检测miR-149-3p相对表达水平;MTT、流式细胞术实验检测细胞增殖和凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、Beclin 1、LC3II/LC3I、JNK/p38 MAPK信号通路相关蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8表达水平。结果IL-1β组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于Con组,凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达明显高于Con组(P<0.05)。IL-1β+miR-149-3p组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显高于IL-1β+miR-NC组(P<0.05),凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达明显低于IL-1β+miR-NC组。IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组的p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达、凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平明显高于IL-1β+miR-149-3p组,细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于IL-1β+miR-149-3p组(P<0.05)。结论上调miR-149-3p能促进IL-1β诱导的髓核细胞增殖,抑制细胞凋亡、自噬和炎性反应,其作用机制可能与激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。

MAPK/JNK信号传导通路研究进展

JNK信号途径参与如胚胎发育、免疫反应、细胞分化等许多正常的生理过程。近年来研究表明 ,JNK信号途径也参与许多病理过程 :JNK介导心脏肥大反应 ,与 型糖尿病发病有关 ,介导胰腺 b细胞凋亡 ;JNK信号途径的异常活化与多种人类肿瘤的发生发展密切相关 ,因此 JNK是一个潜在的治疗分子靶 ,已引起人们的关注。对其功能及作用的分子机制的深入研究 ,有助于我们对

盐酸戊乙奎醚对脂多糖诱导气道平滑肌细胞炎性损伤及P38MAPK/JNK通路的影响

目的:探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)诱导气道平滑肌细胞(ASMC)炎性损伤及P38MAPK/JNK通路的影响。方法:体外培养人ASMC,将ASMC随机分成5组。对照组只含ASMC;LPS组在ASMC中加入终质量浓度为500 ng·ml-1LPS;1、10、100μmol·L-1PHC+LPS组分别在LPS组基础上加入终质量浓度为1、10、100μmo·L-1PHC。采用CCK-8法检测ASMC增殖情况;显微镜下观察细胞形态学变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测ASMC细胞因子乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平;采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blotting检测凋亡及P38MAPK/JNK通路相关蛋白表达情况。结果:与对照组相比,LPS组ASMC 48 h时的吸光度(A)值显著降低(P <0.05),细胞体积扁小,形态偏圆,胞质空亮,胞质内出现大小不等的颗粒,细胞因子LDH、MDA水平均显著升高(P <0.05),细胞凋亡率显著升高(P <0.05),抑凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P <0.05),促凋亡基因Bax蛋白表达水平显著升高(P <0.05),p-JNK、p-P38蛋白表达水平显著升高(P <0.05);给予PHC处理后,与LPS组相比,1、10、100μmol·L-1PHC+LPS组细胞48 h时的A值均显著升高(P <0.05),细胞无明显形态学变化,且贴壁细胞数量多,细胞因子LDH、MDA水平均显著降低(P <0.05),细胞凋亡率显著降低(P <0.05),抑凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P <0.05),促凋亡基因Bax蛋白表达水平显著降低(P <0.05),P-JNK、P-p38蛋白表达水平显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖性。结论:PHC可抑制LPS诱导的ASMC炎性损伤,其机制可能与抑制P38MAPK/JNK通路的活化有关。

血管紧张素Ⅱ激活p38 MAPK和JNK对诱导失血性休克血管反应性的保护作用

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）激活p38MAPK和JNK在恢复失血性休克血管反应性中的作用。方法采用大鼠失血性休克模型（SD大鼠80只,体质量200-230g,雌雄各半）,观察AngⅡ处理对休克大鼠肠系膜上动脉（superior mesenteric artery,SMA）血管组织中p38MAPK和JNK的活性变化的影响,并用p38MAPK和JNK的特异性拮抗剂SB203580和SP600125,观察阻断p38MAPK和JNK对AngⅡ诱导的失血性休克血管反应性保护作用的影响。结果失血性休克大鼠肠系膜血管组织中p38MAPK的活性呈休克早期升高、休克晚期降低的趋势,在休克后0.5h和2h时p38MAPK的活性分别为正常对照的201.2%和53.2%（P〈0.01）;而JNK的活性水平随休克时间的延长而逐渐升高,休克2h时活性升为正常对照的308.8%（P〈0.01）。在休克晚期给予AngⅡ处理能明显升高休克血管p38MAPK和JNK活性水平,同时AngⅡ处理也升高了休克晚期肠系膜动脉血管的收缩反应性。p38MAPK的拮抗剂SB203580和JNK的拮抗剂SP600125均可拮抗AngⅡ诱导的p38MAPK和JNK激活,p38MAPK和JNK的活性分别降低为AngⅡ组的52.9%和44.8%（P〈0.05-0.01）;同时p38MAPK和JNK的拮抗剂也抑制了AngⅡ升高休克血管反应性的作用,使其分别降低为AngⅡ组的60.5%和65.0%（P〈0.01）。结论 p38MAPK和JNK参与AngⅡ对休克血管反应性的保护作用。

人参皂苷Rb1通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ_(25-35)诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

探讨在Aβ25-35(beta-amyloid peptide(25-35),Aβ25-35)诱导的拟阿尔茨海默病样胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对tau蛋白磷酸化及JNK/p38 MAPK的可能作用。应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察tau蛋白磷酸化和JNK(c-jun N-terminal kinase)/p38 MAPK的表达情况。凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,tau蛋白的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38 MAPK的总量及其活性形式——磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加,人参皂苷Rb1可以减轻tau蛋白的磷酸化水平及JNK/p38MAPK的蛋白水平。人参皂苷Rb1可通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。

氧化应激激活JNK-MAPK参与波动性高血糖诱导的大鼠肝细胞损伤

目的:探讨波动性高血糖引起糖尿病大鼠肝细胞凋亡的机制。方法:SD大鼠随机均分为4组:正常对照组、稳定高血糖组、波动高血糖组和胰岛素组。采用链脲佐菌素65 mg/kg腹腔注射诱发糖尿病,波动高血糖组每天定时腹腔注射速效胰岛素,并错时给予葡萄糖,造成1 d中血糖浓度大幅度波动,12周内波动高血糖组每天血糖波动模式相似,且Hb A1c与稳定高血糖组无显著差异。12周后取血和肝脏组织,采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,RT-PCR和Western blot检测JNK、p-JNK、Bax和Bcl-2的含量。结果:与正常对照组比较,稳定高血糖组、胰岛素组和波动高血糖组的食物量、饮水量和尿量增加,肝功能异常;MDA含量增多,SOD和GSH-Px活性降低,NO含量减少(P<0.05);JNK mRNA、p-JNK蛋白及Bax蛋白水平上调(P<0.05),Bcl-2表达减少(P<0.01);且波动高血糖组的以上变化均较稳定高血糖和胰岛素组更加明显(P<0.05)。结论:波动性高血糖较稳定性高血糖更促进糖尿病肝细胞的凋亡,其机制与JNK-MAPK信号转导通路激活有关。

TGF-β_1作用后老龄大鼠心肌成纤维细胞p38 MAPK通路和JNK通路的变化

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)作用后老龄大鼠心肌成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路和c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路的变化。方法:提取乳鼠及老龄大鼠心肌成纤维细胞,以TGF-β1(5μg/L)刺激,分为乳鼠PBS对照组(N1组)、乳鼠TGF-β1干预组(N2组)、老龄鼠PBS对照组(A1组)和老龄鼠TGF-β1干预组(A2组)。采用MTT比色法测定细胞增殖;Western blotting检测各组成纤维细胞总p38、phospho-p38、JNK及phospho-JNK水平。结果:TGF-β1刺激后老龄鼠心肌成纤维细胞增殖能力低于乳鼠心肌成纤维细胞。加入TGF-β1后,N2组和A2组的phospho-p38和phospho-JNK分别较N1组和A1组明显升高;N2组与A2组总p38及JNK水平无显著差异;加入TGF-β1后,与N2组相比,A2组phospho-p38及phospho-JNK表达水平显著减弱(P<0.05)。结论:老龄导致心肌成纤维细胞的TGF-β1/p38及TGF-β1/JNK信号通路相关蛋白磷酸化水平受损。

MiRNA-138抑制JNK/p38 MAPK通路保护新生大鼠心肌细胞凋亡

[目的]探究miRNA-138抑制JNK/p38MAPK通路保护新生大鼠心肌细胞凋亡。[方法]收集2018年1月至12月急性心肌缺血患者全血样本33例,另招募同期体检健康者全血样本33例作对照;构建新生大鼠缺血再灌注(I/R)模型,将40只新生大鼠随机分为空白对照组(Control)、模型组(I/Rmodel)、阴性对照组(注射无序序列,Scramble)及miRNA-138过表达组(A d-miRNA-138),每组10只。采用qRT-PCR检测全血和心肌组织中miRNA-138、Bcl2及BaxmRNA的表达,电生理记录仪检测大鼠血流动力学指标水平,HE染色观察大鼠心肌组织病理损伤,免疫组法化检测心肌组织中Casapse-3的表达,TUNEL染色观察大鼠心肌组织细胞的凋亡情况,ELISA法检测心肌组织活性氧(R OS)的含量,Westernblotting检测JNK/p38MAPK通路蛋白的表达。[结果]与健康对照相比,急性心肌缺血患者全血中miRNA-138的水平显著降低(P<0.05);与I/R模型组相比,Ad-miRNA-138组大鼠心肌细胞间隙更小、排列更整齐性、结构更完整,miRNA-138表达、心功能指标+dp/dtmax、HR、LVSP及Bcl2/Bax水平显著上升,凋亡细胞数、Caspase-3阳性表达细胞率、ROS、p-p38/p38、p-c-jun/c-jun及p-JNK1/2/JNK1/2显著下调(P<0.05)。[结论]m iRNA-138可通过抑制JNK/p38MAPK通路,抑制大鼠心肌细胞的凋亡,并减轻活性氧损伤,从而保护新生大鼠心肌细胞。

凝聚态Aβ_(25～35)可通过JNK/p38 MAPK途径诱导胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨JNK／p38MAPK在p淀粉样蛋白多肽片段25-35（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）样胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化中的作用。方法 应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法，观察Tau蛋白磷酸化和JNK／p38丝裂原活化的蛋白激酶（JNK／p38MAPK）的表达情况。结果凝聚态Aβ25-35（20μmol／L）作用于皮层神经元12h，Tau蛋白sep396、Ser199/202、Thr205位点的磷酸化水平明显增高，同时JNK／p38MAPK的总量及其活性形式．磷酸化JNK／p38MAPK的蛋白表达水平也增加。结论 Aβ25-35可通过激活JNK／p38MAPK使Tau蛋白的磷酸化水平增高。

ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达

目的检测ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达情况,初步探讨它们与黑素瘤发生、发展的关系。方法分别采用免疫组化和Western印迹法检测磷酸化的ERK1/2,JNK及P38MAPK在皮肤黑素瘤、皮内痣组织中的表达情况;用实时荧光定量聚合酶链反应(Real time-PCR)方法定量分析皮内痣和皮肤黑素瘤中ERK1/2,JNK和P38MAPK mRNA的表达情况。结果免疫组化和Western印迹法结果均显示p-ERK1/2,p-JNK及p-P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达高于皮内痣组(P<0.05);Western印迹法显示p-ERK1/2,p-JNK及p-P38MAPK在皮内痣组中的表达高于正常对照组(P<0.05)。ERK1/2,JNK及P38MAPK mRNA在皮肤黑素瘤和皮内痣中的表达均高于正常皮肤组织(P<0.05);皮肤黑素瘤中ERK1/2,P38MAPKmRNA的表达均高于皮内痣(P<0.05);而皮肤黑素瘤中JNK mRNA的表达与皮内痣组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤表达增高,提示MAPK信号通路在皮肤黑素瘤发生、发展中起到重要作用,该信号通路有望成为预防和治疗皮肤黑素瘤的新靶点。