猴头菇多糖对MDRV感染雏番鸭肠道修复作用与MAdCAM-1分泌量关系的研究

为研究猴头菇多糖(HEPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染雏番鸭肠道修复作用与黏膜地址素细胞黏附分子1(MAd CAM-1)分泌量的关系,将200只1日龄番鸭随机分为空白对照组(BCG)、猴头菇多糖对照组(HCG)、同居感染对照组(CICG)和猴头菇多糖预防组(HPG),其中后两组按建立MDRV自然感染发病模型进行同居感染;各组番鸭分别于同居感染3、6、10、15和21 d后取血液和十二指肠样品进行放射性免疫检测MAd CAM-1含量,并观察其肠道形态和淋巴细胞分布及数量变化。结果显示,HCG组番鸭肠道MAd CAM-1分泌量极显著高于HPG(P<0.01),且显著高于CICG(P<0.05),HEPS对MDRV感染番鸭血清中MAd CAM-1含量的调节作用不显著;HPG组与CICG组相比,肠道形态结构较完整,淋巴细胞的分布有向黏膜上皮移动的趋向,且分布在细胞顶端的数量增多。研究表明:HEPS可能通过调节MDRV感染番鸭肠道MAd CAM-1的分泌量,参与淋巴细胞归巢过程,起到修复和保护肠道黏膜,提高雏番鸭的黏膜免疫力的作用。

人MAdCAM-1真核表达载体的构建及其表达细胞株的建立

目的:建立表达人MAdCAM-1的细胞模型。方法:从pUC21/hMAdCAM-1质粒酶切下hMAdCAM-1全长cDNA片段,将其克隆于巨细胞病毒载体pCIneo中,构建出由CMV启动子控制的重组真核表达载体pCIneo-hMAd,经脂质体介导转染至CHO细胞,以G418筛选抗性克隆。结果:筛选出的阳性克隆细胞以免疫荧光和免疫酶标染色法检测,表明有人MAdCAM-1分子表达;其细胞裂解物经免疫印迹分析,证实约63 kD的新增蛋白带与抗 hMAdCAM-1抗体有特异性结合反应;淋巴细胞粘附实验结果提示表达产物具有一定的功能活性。结论:成功地获得了表达人MAdCAM-1分子的细胞株,为进一步研究其生物学功能及其作用机制奠定了基础。

溃疡性结肠炎中医症候类型与Madcam-1、TNF-a及IL-8的相关性研究

目的:探讨溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)中医症候类型与患者血清中黏膜地址素粘附分子1(Madcam1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-8(IL-8)表达水平的相关性,为UC的临床症候分型及分证论治提供依据。方法:通过收集南通市中医院门诊及住院的UC患者108例,同时选择20例正常人作为对照。观察UC患者临床表现及肠镜下结肠黏膜的病理形态,判断其病情的轻重。对收集的UC患者进行症候分型,分为大肠湿热证,脾虚湿热证,肝郁气滞证,寒热错杂证,脾肾阳虚证。采用双抗体夹心ELISA法检测各组UC患者血清中Madcam-1,TNF-a和IL-8的表达水平。通过统计学分析,探讨各项指标与UC症候类型的相关性。结果:中重度UC患者血清中IL-8、TNF-α、Madcam1蛋白水平明显高于轻度患者与正常人群,具有明显的相关性。大肠湿热证与脾虚湿热证UC患者血清中IL-8、TNF-α、Madcam1蛋白水平明显高于其他组与正常人群,具有明显的相关性。结论:检测UC患者血清中Madcam-1,TNF-a及IL-8的表达水平,可作为判断UC病情轻重及临床症候类型的依据,抗Madcam-1,TNF-a及IL-8抗体可能是治疗UC的有效方法。

CD62L、MadCAM-1表达与非小细胞肺癌淋巴结转移关系

目的初步探讨细胞粘附分子CD62L及黏膜地址素细胞粘附分子(mucosal addressin cell adhesion molicule,MadCAM-1)在非小细胞肺癌及其转移淋巴结中的表达状况及其与淋巴结转移之间的关系和意义。方法选取肺癌60例和淋巴结转移标本30例,同时选取正常肺组织30例以及无转移淋巴结30例,利用免疫组化检测CD62L、MadCAM-1在不同组别的表达情况。结果 CD62L在肿瘤组织中表达在肿瘤细胞、脉管内癌栓、间质浸润的淋巴细胞;在转移淋巴结主要表达在转移灶肿瘤细胞、脉管内癌栓以及淋巴细胞;在正常肺组织以及无转移淋巴结主要表达在成熟淋巴细胞;CD62L在癌组织中表达高于正常肺组织(P<0.05);转移淋巴结中的表达高于无转移淋巴结表达(P<0.05);CD62L在转移淋巴结中表达与癌组织中的表达相比无差异(P>0.05);CD62L在正常肺组织表达与无转移淋巴结表达差异无统计学意义(P>0.05)。MadCAM-1主要表达淋巴结滤泡间区的高内皮后微静脉内皮细胞;在癌组织中的高内皮微静脉无表达;转移淋巴结中的表达高于无转移淋巴结表达(P<0.05)。CD62L及其受体MadCAM-1表达在肺癌组织以及转移淋巴结中表达之间存在密切相关(r=0.7081,P=0.002);CD62L及其受体MadCAM-1表达在肺癌组织以及无转移淋巴结中表达之间不存在切相关(P>0.05)。CD62L的阳性表达水平(即灰度单位)与淋巴结转移、脉管内癌栓、临床分期之间存在密切相关(P<0.05),与肿瘤体积、细胞分化程度、侵犯肺膜无关(P>0.05);MadCAM-1的阳性表达水平与淋巴结转移、脉管内癌栓、肿瘤体积存在明显相关(P<0.05),与细胞分化、侵犯肺膜、肿瘤分期无明显相关(P>0.05)。结论 CD62L及其受体MadCAM-1参与正常肺组织的淋巴细胞归巢和肺癌组织的淋巴结转移,并与肺癌的发展密切相关。

奶牛黏附分子MadCam-1基因的克隆及原核表达

原核表达MadCam-1基因、纯化MadCam-1黏附蛋白,并制备其多克隆抗体,为进一步功能研究奠定基础。根据MadCam-1的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术扩增MadCam-1基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1,转化入E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,以纯化后的融合蛋白为抗原,免疫家兔,获得抗血清。结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-MadCam-1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%。表达产物经Western blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为50ku的蛋白质。纯化的蛋白质免疫家兔后,经ELISA检测多克隆抗体效价为1∶32000。因此,成功获得了奶牛MadCam-1多克隆抗体,为进一步研究奶牛黏附分子MadCam-1的功能奠定了基础。

靶向MAdCAM-1超声造影剂的制备及其体外寻靶实验研究

目的:制备适用于炎症性肠病超声诊断并靶向MAdCAM-1的长循环脂膜超声造影剂,并鉴定其物理性状及体外寻靶能力。方法:采用超声破碎法制备长循环脂膜超声微泡,通过"生物素-亲和素"法桥接超声微泡与抗MAdCAM-1单克隆抗体(MECA-367)。对制备出的靶向微泡造影剂进行物理性状检测;通过光镜和激光共聚焦显微镜观察该靶向造影剂对TNF-α诱导的炎症性肠病细胞模型的结合能力。同法制备携同型对照抗体IgG2a微泡作对照。结果:制备的靶向超声微泡形态好且粒径较均匀,平均粒径(464.5±85.7)nm,Zeta电位(-19.3±2.5)mV。SVEC4-10细胞MAdCAM-1的表达与TNF-α刺激时间成正相关。并且,当TNF-α浓度达到20 ng/ml时,MAdCAM-1的表达达到峰值。体外寻靶试验表明,该靶向造影剂较多并牢固地黏附到表达MAdCAM-1的细胞周围;携IgG2a的同型对照组未见明显结合。结论:成功制备出桥连MECA-367的靶向长循环脂膜超声造影剂,该造影剂在体外对高表达MAdCAM-1的炎性细胞模型有较强的特异性亲和力;TNF-α诱导SVEC4-10细胞建立炎症性肠病细胞模型的方法简便易行。

MAdCAM-1分子:免疫生物学功能

有关MAdCAM 1分子生物学功能的研究目前虽属初级阶段 ,但至少已知它与淋巴归巢、肠道相关淋巴组织的发育、淋巴细胞活化及炎症反应等多种生理和病理过程有关。本文拟就其上述功能作一讨论。

MAdCAM-1在大鼠小肠移植肠管中的表达及其意义

【目的】通过建立大鼠小肠移植模型，观察粘附素细胞粘附分子-1（MAdCAM-1）在大鼠小肠移植肠管中的表达及移植肠管的改变。【方法】实验分三组，第Ⅰ组为同系同基因移植（从LEW鼠到LEW鼠）；第Ⅱ组为异系同基因移植（从DA鼠到LEW鼠）；第Ⅲ组为使用抗-MAdCAM-1抗体的异系同基因移植。将DarkAgouti（DA）鼠的小肠异位移植到Lewis（LEW）鼠中。观察各组移植肠管的形态和组织学变化；并用免疫染色检测MAdCAM-1和整合素a4137在移植肠管中的表达。通过荧光激活细胞分类术来分析移植肠管中肠系膜淋巴结和肠管Peyer＇s淋巴结的淋巴细胞浸润情况。【结果】实验组大鼠移植肠管存活期为（7．0±3．3）d，对照组为（24．6±8．4）d（P〈0．05）。并且，在实验组的移植肠管中MAdCAM-1的表达被抑制。而对照组在Peyefs淋巴结中CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞无显著差别，实验组的肠系膜淋巴结中CD4^＋T细胞有显著降低。【结论】在小肠移植中，通过阻断抗-MAdCAM-1抗体可以用来预防急性排斥反应。

人MAdCAM-1分子:基因、分子结构、分布与配体

MAdCAM 1(MucosalVascularAddressinCellAdhesionMolecule 1)分子是一种免疫球蛋白超家族粘附分子 ,主要表达于肠道粘膜及其相关淋巴组织的血管内皮细胞表面 ,通过与淋巴细胞上相应配体α4 β7结合而主要介导淋巴细胞向肠道粘膜部位定向归巢。本文介绍了它的编码基因、分子结构、组织分布及配体。

MAdCAM-1及NF-КB在小鼠恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体的干预作用

目的:探讨MAdCAM-1在恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体DETA NONOate和GTN对恶唑酮结肠炎的干预作用.方法:32只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(A)、恶唑酮结肠炎组(B)、GTN干预组(C)和DETA NONOate干预组(D).除正常对照组外,其余3组均建立小鼠恶唑酮结肠炎模型,两个一氧化氮供体干预后处死小鼠.评价DAI、大体评分和组织学评分;免疫组织化学法检测MAdCAM-1及NF-КB;硝酸还原酶法测定血清中NO含量;测定结肠组织MPO活性.结果:B组小鼠DAI评分自灌肠之日起逐渐增高,而D组则变化不明显.B组小鼠大体评分、组织学评分、NF-КB的表达、MAdCAM-1的表达、MPO活性(3.13±0.84,20.31±2.63,30.29±8.68,17.60±6.53,3.83±0.60)均分别高于A组(0.38±0.52,0.88±0.83,7.38±2.29,4.08±1.30,1.75±0.25,P<0.01)和D组(1.38±0.52,11.13±1.48,12.60±3.54,8.42±2.16,2.76±0.48,P<0.01),而C组则与B组相近.B组小鼠血清NO浓度高于A组(54.51±22.28 vs 32.17±14.88,P<0.05),而低于D组和C组(54.51±22.28 vs 88.53±24.77,80.12±19.79,均P<0.05).B组MAdCAM-1的表达与组织学评分、MPO活性、NF-КB P65 L4值呈正相关(r=0.786,r=0.833,r=0.833,P<0.05).结论:小鼠恶唑酮结肠炎中结肠固有层MAdCAM-1的表达增加,DETA NONOate可能是治疗溃疡性结肠炎的有价值药物.

小鼠MAdCAM-1分子cDNA的获得及测序

MAdCAM-1分子(mucosal addressin cell adhension molecule-1)也称粘膜血管定居因子(mucosal vascular addressin),是一种选择性表达于肠道粘膜淋巴组织血管内皮细胞上的粘附分子,它属于免疫球蛋白超家族,是一个跨膜蛋白,胞外区由3个免疫球蛋白样结构域及一个粘蛋白(mucin)样区域组成,N端2个免疫球蛋白样结构域可以同淋巴细胞的归巢受体α4β7整合素结合,第三个粘蛋白样结构域可以和选择素L(selectin)结合。MAdCAM-1分子的这种结合特性可引导淋巴细胞向粘膜部位的定向归巢。

抗人粘膜地址素-1单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗人ＭＡｄＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）。 方法以重组人ＭＡｄＣＡＭ－１胞外区蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术制备ｍＡｂ。结果获得１０株可分泌特异性ｍＡｂ的杂交瘤细胞，其腹水ｍＡｂ的效价为３．２×１０５～１．９×１０６，ｍＡｂ的Ｉｇ亚类均为ＩｇＧ１，其中，８株ｍＡｂ的轻链属κ型，２株为λ型。应用于免疫组化染色法，检测表明，正常成人小肠、附睾及前列腺组织中存在ＭＡｄＣＡＭ－１阳性表达的血管内皮细胞。结论 成功地研制出抗人ＭＡｄＣＡＭ－１的ｍＡｂ，为进一步研究ＭＡｄＣＡＭ－１在肠道黏膜免疫中的作用提供了有用的试剂。

人MAdCAM—1胞外区基因在原核系统的表达及重组蛋白纯化

目的：制备高纯度的重组人MAdCAM-1蛋白。方法 采用PCR技术从pUC21/hMadCAM-1质粒上，选择性扩增编码成熟MAdCAM-1胞外区两个Ig域的基因片段。将其克隆至pQE30载中，转化大肠杆菌后，以IPTG诱导表达，产物经Ni-NTA亲和层析纯化。结果：诱导表达出相对分子质量（Mt)约29000的融合蛋白。薄层凝胶扫描显示，其表达量占菌体总蛋白质的50％左右。经亲和层析纯化得到高纯度的蛋白产品。结论 获得了重组人MAdCAM-1胞外区蛋白，为后续功能研究及其单抗研制奠定了基础。

MAd CAM-1分子的研究进展

MAdCAM－1分子（MucosalVascularaddressin）也称为粘膜血管定居因子，是在肠道粘膜淋巴组织和固有层的血管内皮细胞上表达的一种粘附分子，属于免疫球蛋白超家族。它可以同向派伊尔小结（peryer’spatches，PPS）归巢的淋巴细胞上的归巢受体分子整合素α457及选择素LSeleetin结合，在引导淋巴细胞向粘膜部位的定向归巢中起重要作用。这里仅就其分子结构、基因结构及其受体作简要概述。

益生菌及肠内外营养对重症急性胰腺炎大鼠肠道黏附分子及免疫屏障的影响

目的:观察益生菌及肠外、肠内营养对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道黏附分子MAdCAM-1及免疫屏障的影响.方法:经胆胰管逆行注射50g/L牛磺胆酸钠制作SAP模型24h后,分别给予肠外营养(PN组),肠外+肠内营养(PN+EN组),肠外+肠内营养+益生菌(益生菌组),持续6d,7d时处死,检测腹腔脏器组织菌群易位率,免疫组化法测定末端回肠和Peyer结MAdCAM-1,CD4,CD8,IgA.结果:益生菌组、PN+EN组CD4、CD8T细胞数量及IgA,MAdCAM-1表达高于PN组(P<0.05);益生菌组Peyer结MAdCAM-1,CD8表达高于PN+EN组(P<0.05).PN组菌群易位率(70.2%)、7d死亡率(75.6%)高于益生菌组(27.5%,50.0%)、PN+EN组(30.5%,52.4%)(P<0.01或P<0.05),但后两组间差异无显著性意义.结论:EN能增加MAdCAM-1表达,提高SAP时肠免疫屏障,减少菌群易位,提高生存率.加用益生菌后总体改善不明显.

健脾化瘀解毒复方对溃疡性结肠炎患者炎症因子及免疫屏障影响

目的：观察健脾化瘀解毒复方的临床疗效,探讨其对炎症因子及免疫屏障的影响。方法：选取2014年1月—2016年9月医院诊治的60例慢性复发型活动期或慢性持续型轻中度的溃疡性结肠炎患者,随机分为对照组30例和观察组30例,对照组给予美沙拉嗪颗粒4 g/d,口服,观察组予以健脾化瘀解毒复方口服2次/d,连续治疗3个月,比较两组治疗前后血沉（ESR）、血清降钙素原（PCT）、疾病活动指数（DAI）及肠镜下黏膜病变的变化,酶联免疫法（ELISA）检测血清白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）及黏膜地址素细胞黏附分子（MAd CAM-1）的水平。结果：治疗前两组患者ESR、PCT、DAI、肠镜下黏膜病变及血清中IL-6、IL-8、IL-10、MAd CAM-1无统计学差异（P〉0.05）。与治疗前相比,两组治疗后ESR、PCT、DAI显著降低（P〈0.01）,血清中IL-6、IL-8、MAd CAM-1表达明显降低（P〈0.01,P〈0.05）,而血清中IL-10表达显著升高（P〈0.01）;与对照组相比,观察组ESR、DAI明显降低（P〈0.01,P〈0.05）,血清中IL-6显著降低、IL-10显著升高均具有统计学差异（P〈0.05）;且两组患者黏膜充血水肿、糜烂、溃疡均有显著好转（P〈0.01,P〈0.05）,健脾化瘀解毒复方在改善黏膜充血水肿、糜烂方面较美沙拉嗪具有更明显优势（P〈0.05）。结论：健脾化瘀解毒复方具有明显的修复肠道黏膜、减轻肠道炎症的作用,其机制可能与调节肠道黏膜屏障,提高肠道局部免疫能力有关;在调节IL-6、IL-10平衡方面其作用优于美沙拉嗪。

人粘膜血管定居因子/GST融合基因表达载体的构建与表达

目的构建 h MAd CAM- 1/ GST融合基因表达载体并进行表达。方法采用 PCR技术扩增 h MAd CAM- 1c DNA5 '端 615 bp的基因片段 ,将其插入 p GEM- T质粒中 ,经全自动序列分析仪测序证实后 ,再亚克隆至表达载体 p GEX- 2 T,转化大肠杆菌 DH 5 a表达。结果 SDS- PAGE检测显示 ,表达出相对分子量 5 2 0 0 0 u的融合蛋白 ,占菌体总蛋白的 3 1%左右。West-ern blot分析表明 ,表达蛋白能与抗 h MAd CAM- 1多抗特异性结合。结论 h MAd CAM- 1/ GST融合基因表达载体的构建和表达 ,为深入研究 MAd CAM- 1提供了材料。

人MAdCAM-1分子的研究进展

MAdCAM-1分子(mucosal addressin cell adhesion molecule-1)是一种属于免疫球蛋白超家族的粘附分子,在小鼠体内其主要表达于肠道粘膜相关淋巴组织及固有层的血管内皮细胞上,可与淋巴细胞上的配体分子整合素α4β7及选择素L-selectin结合,在介导淋巴细胞向粘膜部位的定向归巢中担当重要角色。近年来人们开始对人体中MAdCAM-1分子的一些情况进行研究, 并取得较大进展。这里主要介绍人MAdCAM-1(hMAdCAM-1)分子的发现、分子及基因结构等方面的情况,并与小鼠MAdCAM-1(mMAdCAM-1)分子进行比较。

早期肠内营养在大鼠重症急性胰腺炎肠道免疫屏障中的作用

[目的]探讨早期肠内营养在大鼠重症急性胰腺炎肠道屏障中的作用及机制。[方法]将60只SD大鼠随机分成3组:正常对照组即假手术组(SO组),肠外营养组(TPN组),肠内营养组(EEN组),每组20只。各组于造模后1d检测血清淀粉酶(AMY),第6天统计死亡率后处死大鼠并收集标本,回肠HE染色评估肠黏膜病理损伤,免疫组化法测定末端回肠Peyer结的MAdcAM-1、CD4+、CD8+的含量,检测内毒素含量和细菌移位率。[结果]1死亡率:SO组(0%)明显低于TPN组(50%)和EEN组(25%),EEN组明显低于TPN组,均P<0.05;2AMY含量:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P<0.01);3回肠黏膜组织评分:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P<0.05);4末端回肠Peyer结CD4+、CD8+、MAdcAM-1:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P<0.05);5血内毒素水平:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P<0.05);6各种细菌易位率:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]早期肠内营养在维护大鼠重症急性胰腺炎肠道屏障方面的作用效果显著。