经鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠EAE的实验研究

目的探讨鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用。方法合成3条不同的碱性髓鞘蛋白(MBP)多肽(MBP68-86、87-99和非致脑炎性肽段110-128),在用豚鼠MBP(gp-MBP)加弗氏完全佐剂免疫Lewis大鼠前的11、10、9、8和7d,经鼻黏膜分别给予MBP多肽,观察其对EAE的保护作用。结果致脑炎性肽段MBP68-86和87-99都有保护作用,其中MBP68-86的保护作用更强;而MBP110-128没有保护作用。鼻黏膜给予MBP68-86+87-99的混合物,在相对低的剂量可完全阻断gp-MBP引发的EAE。淋巴细胞增殖实验和IFN-γELISPOT检测显示,与鼻黏膜给予大鼠MBP110-128组相比,鼻黏膜给予大鼠MBP68-86+87-99可降低T细胞对于MBP的反应性,淋巴结单核细胞中表达IFN-γ和TNF-αmRNA的细胞数减少,而两组表达TGF-β及IL-4mRNA的淋巴细胞数都低。结论鼻黏膜给予致脑炎性MBP多肽能够导致抗原特异性T细胞耐受,对gp-MBP引发的EAE提供不完全的保护,MBP68-86和MBP87-99具有协同作用。鼻黏膜给予多肽引发的免疫耐受与非调节机制有关。

NGF对坐骨神经损伤后腰髓与损伤神经MBP含量变化的影响

目的 探讨大鼠周围神经损伤后相应神经与脊髓组织髓鞘碱性蛋白 (Myelinbasicprotein ,MBP)含量变化及神经生长因子 (NGF)的影响。方法 Wistar大鼠行单侧坐骨神经切断 ,断端采用硅胶管桥接 ,管内注入NGF ,应用酶联免疫吸附法测定腰段脊髓和损伤坐骨神经组织MBP含量的变化 ,实验分为Ⅰ组 :生理盐水对照 ;Ⅱ组 :硅胶管内给NGF ;Ⅲ组 :硅胶管内给NGF +每日肌肉注射NGF(5 0 0ng/kg连续 2周 )。结果 治疗组之间比较无统计学意义 ;治疗组与对照组相比较有非常显著性差异 (P <0 0 1) ;治疗组2 4h、2周时MBP含量较伤前显著升高 (P <0 0 1) ,4周恢复到伤前水平。结论 NGF治疗能减少MBP含量 。

MBP-52位点多态性与肺结核易感性的病例对照研究

[目的]探讨甘露糖结合蛋白(MBP)基因多态性与汉族人群肺结核发病的关系。[方法]采用病例对照研究,用特异引物PCR方法进行MBP的基因分型,对肺结核发病影响因素进行问卷调查,并进行单因素分析和多因素非条件Logistic回归分析。[结果]对126例病例和202例对照的MBP基因52位点进行分型,野生型、突变型(杂合子+纯合子)两种基因型在病例组和对照组中的分布频率分别为男性86.7%、13.3%、95.7%和4.3%;女性93.0%、7.0%、85.9%和14.1%。男性病例的突变频率显著高于对照组(OR为6.222,OR95%CI为1.285～30.134),而女性病例的突变频率明显低于对照组(OR为0.646,OR95%CI为0.564～0.740)。在多因素分析中调整卡介苗接种史、卡痕和家族史后,MBP-52基因突变与肺结核发病仍有统计学意义,与单因素分析的结果相同。[结论]MBP-52位点C/T突变可能与肺结核发病相关。

30%TBP-煤油-HNO_3体系的α辐解行为Ⅰ.溶剂辐解生成DBP/MBP的规律

用气相色谱法研究了238Pu为α源的30%TBP-煤油-HNO3体系的辐解产物DBP和MBP的生成情况,研究了反萃剂、反萃条件和钚等因素对DBP/MBP分析的影响,考察了辐照累积剂量、剂量率和稀释剂等因素对DBP和MBP生成量的影响。结果表明:DBP和MBP生成量随吸收剂量、剂量率的增加而增大;在剂量率73.7Gy/min、累积剂量5×105 Gy时,DBP浓度达到7.09×10-2 mol/L,MBP浓度达到9.84×10-3 mol/L;在吸收剂量5×105 Gy时,加氢煤油、正十二烷和特种煤油中的DBP生成量分别为4.45×10-2、4.44×10-2、4.35×10-2 mol/L,MBP生成量为3.52×10-3、3.50×10-3、3.52×10-3 mol/L,在吸收剂量5×105 Gy时,三种稀释剂的DBP和MBP的生成量近似相等;在吸收剂量5×104 Gy时,α辐照的DBP和MBP的生成量分别为5.57×10-2 mol/L和5.10×10-3 mol/L,对应的γ辐照的为2.50×10-3 mol/L和3.14×10-4 mol/L,α辐照产生的DBP和MBP的生成量明显大于γ辐照的。

自身免疫神经保护:MBP主动免疫对脊髓损伤后二次损害的有益作用

目的 研究髓鞘碱性蛋白 (MBP)主动免疫 ,对大鼠脊髓损伤 (spinalcordinjurySCI)后二次损害的治疗作用 ,探讨自身免疫T细胞对中枢神经系统损伤的神经保护机制。方法 用不完全福式佐剂 (IFA)乳化的MBP、全脊髓匀浆 (WSCH)、卵白蛋白 (OVA)分别免疫三组SD大鼠 ,1周后使用OHBASIKI打击器制作脊髓损伤模型 (SCI)。每周进行一次斜板试验及BBB评分 ,2 8天后标本取材行光镜及电镜检查。结果 用MBP或WSCH免疫鼠神经功能康复明显优于OVA免疫鼠 ,斜板实验及BBB评分与后者相比差异显著 (P <0 0 1)。形态学检查前两组大鼠损伤脊髓组织大部分恢复 ,形态基本正常 ,后者仍破坏严重。结论 MBP或WSCH主动免疫能中断SCI后二次损害的破坏作用 ,被激活的自身免疫T细胞对中神经系统损伤具有神经保护功能。

急性脑梗死患者S-100、MBP动态检测的临床意义

目的 动态观察急性脑梗死(ACI)患者血浆中S- 100蛋白、髓磷脂碱性蛋白 (MBP)的变化,探讨其与脑梗死体积、神经功能缺损程度及梗死部位等方面的相关性。方法 用ELISA法对 50例ACI患者的血浆S 100、MBP水平进行动态检测;用NIHSS进行神经功能缺损评分及CT扫描测定梗死体积。结果 ACI患者S -100、MBP浓度在发病早期显著升高,S 100 (1. 75±0. 65)d达到峰值,MBP(5. 08±1. 02)d达到峰值,有严重神经功能缺失的患者S 100、MBP升高更明显,S 100 >1. 0μg/L、MBP>8. 0μg/L、NIHS>12分均提示患者预后不良;S- 100、MBP的血浆浓度与梗死体积、神经功能缺损程度均呈显著正相关(P<0. 01)。结论 缺血性脑损伤后血浆中S- 100、MBP的出现分别与神经胶质细胞、髓鞘的受损有关,可作为缺血性脑损伤尤其是大面积脑梗死早期的指标。

DBP、DEHP及其代谢物MBP、MEHP的体内雌激素样活性分析

[目的 ]探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)和邻苯二甲酸 2 乙基己基酯 (DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单丁酯 (MBP)和邻苯二甲酸 单 乙基己基酯 (MEHP)的雌激素样活性。 [方法 ]按照经济合作与发展组织 (Or ganizationforEconomicCooperationandDevelopment ,OECD)推荐的标准试验方法 ,采用背部皮下注射的方式对出生后 18d雌性未成熟大鼠连续给药 3d ,末次给药 2 4h后处死 ,观察化学物对大鼠体重、子宫重量、滤纸吸干后子宫重和子宫粘液重量等相关指标的变化。 [结果 ]虽然未观察到DBP、MBP、DEHP及MEHP有明显的促子宫增重作用 ,但MBP和MEHP对未成熟雌性大鼠的毒性大于DBP和DEHP ,40～ 10 0 0mg/kgMBP和 10 0 0mg/kgMEHP可减缓大鼠的体重增长速度 ,2 0 0和10 0 0mg/kgMEHP则可明显降低大鼠子宫的粘液分泌量。 [结论 ]DBP、DEHP及其代谢产物MBP和MEHP均无雌激素样活性 ,MBP可减缓大鼠体重增长速度 。

30%TBP/煤油中DBP和MBP的离子色谱分析

采用离子色谱作为检测仪器,建立了简单、快速、灵敏地测定30%TBP/煤油中DBP和MBP的新方法。以去离子水为反萃剂将有机相中DBP和MBP反萃到水相,去除有机相干扰,离子色谱仪进行检测。当DBP浓度在0.01~6.0 mmol/L、MBP浓度在0.02~2.5 mmol/L时,标准曲线均具有良好的线性,相关系数r 2均达到0.999,DBP的检出限为5.0μmol/L,MBP的检出限为4.0μmol/L。采用建立的方法对模拟30%TBP/煤油生成的辐解产物进行重加回收实验,DBP的重加回收率在92%~96%,模拟样品6次平行测定的s r=2.1%。

胆红素脑病仔鼠血液中NSE、S-100及MBP含量变化的动态研究

目的:探讨胆红素脑病新生大鼠血液中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100蛋白(S-100)及髓鞘碱性蛋白(MBP)的含量变化,筛选胆红素脑病早期诊断的客观指标。方法:采用7日龄Wister大鼠腹腔注射胆红素200mg/kg制备胆红素脑病动物模型。采用放射免疫法、酶联免疫法动态观察胆红素脑病新生大鼠血液中NSE、S-100及MBP含量的变化。结果:血液中NSE、S-100及MBP水平都有升高,但各项指标升高的时间和幅度并不一致。与对照组比较,实验组血液中MBP含量变化出现较早,在造模后6h即有一定程度的增加(P<0.05);NSE、S-100在12—24h都有明显增加(P<0.05)。结论:血液中NSE、S-100可反映胆红素脑病仔鼠神经元和神经胶质的损伤程度,是判定胆红素脑病的可靠指标;血液中MBP升高最早,是早期诊断胆红素脑病神经损伤的敏感生化指标。

血清S100B和MBP在颅脑损伤患者中的检测意义

目的探讨颅脑损伤患者血清S100B和MBP的变化及其临床意义。方法用双抗体夹心ELISA法检测30名健康人和108例颅脑损伤患者血清S100B和MBP水平。结果108例颅脑损伤患者在伤后12 h血清S100B水平升高,重型、中型和轻型颅脑外伤患者的血清MBP浓度均明显高于对照组的MBP浓度(P<0．01);而不同组别颅脑外伤患者血清MBP水平差异有显著性(P<0．05)。结论血清S100B和MBP检测可作为诊断早期脑损伤严重程度的指标。

睡眠剥夺对大鼠血清MBP及皮质醇含量的影响

目的 测定大鼠睡眠剥夺 ( sleep deprivation,SD)后血清髓鞘碱性蛋白 ( myelin basic protein,MBP)和皮质醇水平变化 ,观察 SD对大脑的损害情况。方法 采用小平台水环境法建立 SD模型 ,以大平台组 ( TC)和正常笼养组 ( CC)作为对照组 ,采用酶联免疫吸附法测定 MBP水平 ,并用双抗体放射免疫法测定皮质醇水平。观察大鼠经 1、3、5 d SD后上述指标变化。结果 与 CC组比较 ,SD 1、3、5 d后血清皮质醇水平均增高 ,与 TC组比较 ,SD3、5 d血清皮质醇水平增高 ,差异有显著性 ;SD5 d后血清 MBP水平增高 ,SD1、3 d水平差异无显著性。TC组与 CC组比较 ,血清皮质醇水平增高而 MBP水平差异无显著性。结论 长时间 SD可引起脑器质性损害。

MBP诱导小鼠免疫细胞凋亡的体内研究

为初步探讨ＭＢＰ与免疫细胞凋亡的关系，实验设置了超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）作为阳性对照，普通蛋白抗原ＢＳＡ为阴性对照。实验方法以检测ＤＮＡ断裂为主，配以形态学观察。结果表明，ＭＢＰ处理组免疫细胞ＤＮＡ经电泳可见“典型”的梯状带；通过比色法和流式细胞术定量检测了ＤＮＡ断裂的数值。结果显示，ＭＢＰ处理组ＤＮＡ断裂百分数与ＳＥＢ组无明显区别（Ｐ＜０．０５）。同时形态学观察表明ＭＢＰ处理组凋亡细胞数目与ＳＥＢ组基本相同。上述结果表明ＭＢＰ具有类似超抗原ＳＥＢ的效应。

妊娠合并糖尿病母亲新生儿脐血S100B蛋白、NSE、MBP水平及NBNA相关性研究

目的:探讨妊娠合并糖尿病母亲分娩的新生儿脐血血清中S100B蛋白、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enofase,NSE)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)水平分别与新生儿行为神经测定(Neonatal Behavioral Neurological Assessment,NBNA)评分的相关性。方法:2012年9月至2013年3月在上海交通大学附属第一人民医院产科常规产前检查及分娩的176例单胎孕妇及其分娩的新生儿。参照《2011年妊娠合并糖尿病诊治推荐指南》,将这些产妇分为:血糖正常孕妇组(n=59例)、糖尿病合并妊娠组(DM组,n=32例)、妊娠期糖尿病组(GDM组);同时根据GDM组患者是否应用胰岛素分为无胰岛素治疗组(GDM-A1组,n=44例)和胰岛素治疗组(GDM-A2组,n=41例)。其中DM组、GDM-A1组和GDM-A2组所分娩的新生儿为实验组。同期孕周相似、血糖正常孕妇所分娩的新生儿为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定新生儿脐血S100B蛋白、MBP水平。采用电化学方式测定新生儿脐血NSE水平。同时生后3天对新生儿进行新生儿行为神经测定(NBNA)。结果:(1)对照组、GDM-A1组、GDM-A2组、DM组新生儿脐血血清S100B蛋白、NSE、MBP水平组间差异显著(F=13.067,F=14.428,F=8.772,P<0.05)。且与对照组比较,GDM-A1组、GDM-A2组、DM组新生儿脐血血清S100B蛋白、NSE水平上升明显,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,GDM-A2组新生儿脐血血清MBP水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)对照组、GDM-A1组、GDM-A2组、DM组NBNA评分水平组间差异显著(F=7.002,P<0.05)。且与对照组比较,GDM-A1组、GDM-A2组、DM组NBNA评分降低明显,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)妊娠合并糖尿病母亲所分娩的新生儿脐血血清S100B蛋白、NSE水平分别与NBNA评分呈负相关(r=-0.0159,r=-0.0177,P<0.05),新生儿脐血血清MBP水平与NBNA评分无相关性(r=-0.0992,P>0.05)。结论:脐血S100B蛋白、NSE、MBP这三种分子作为新生儿中枢神经系统常在的低表达蛋白,其表达水平升高,提示妊娠合并糖尿病母亲分娩的新生儿存在脑损伤。联合检测脐血S100B蛋白、NSE、MBP和NBNA对早期发现新生儿脑损伤有重要意义。

红景天煎剂对运动性疲劳运动员血清MDA、SOD、NGF、MBP及BFGF水平的影响

目的探讨红景天煎剂对运动性疲劳运动员血清MDA、SOD、NGF、MBP及BFGF水平的影响。方法收集体育学院学生40例,随机分为实验组和对照组,每组20例。2组均进行踏车运动使产生疲劳,运动结束后,实验组运动员给予红景天煎剂,对照组给于红糖水,检测2组运动员血清MDA、SOD、NGF、MBP及BFGF变化。结果运动后,与对照组相比,实验组患者MDA水平较低(P<0.05),SOD水平较高(P<0.05);NGF、BFGF水平较高(P<0.05)、MBP水平较低(P<0.05)。结论红景天煎剂能够显著降低运动性疲劳运动员MDA、MBP水平,升高SOD、NGF与BFGF水平。

重组人MUC1-MBP融合蛋白的抗肿瘤作用

目的 :研究重组人MUC1 MBP的抗肿瘤作用。方法 :用重组人MUC1 MBP皮下注射途径免疫健康鼠 ,采用MTT法测定小鼠抗MUC1特异的CTL活性 ;通过免疫鼠成瘤及荷瘤鼠治疗实验检测其对肿瘤的预防和治疗作用。结果 :MUC1 MBP免疫鼠CTL对MCF 7及Lewis肺癌细胞的杀伤率分别为 (47.7± 4 .3) %和 (6 7.5± 6 .5 ) % ;免疫鼠成瘤结果免疫组小鼠共长 5个肿瘤 ,存活时间明显延长 ,对照组共长 5 1个 ,平均生存时间 2 3d ;荷瘤鼠治疗结果显示治疗组小鼠肿瘤平均体积 386mm3 ,对照组小鼠肿瘤平均体积 4 0 0 0mm3 。结论 :重组人MUC1 MBP具有明显的治疗、预防肿瘤和抑制肿瘤转移的作用 ,有希望发展成人类抗肿瘤疫苗。

丁苯酞氯化钠注射液联合降纤酶治疗进展性卒中对血清MBP、S100β蛋白含量的影响

目的观察丁苯酞氯化钠注射液联合降纤酶静脉注射治疗对进展性卒中患者血清MBP、S100β含量的影响。方法对120例急性进展性卒中的患者随机分为治疗组和对照组,每组60例,治疗组在常规治疗的基础上加用丁苯酞氯化钠注射液联合降纤酶,对照组在常规治疗的基础上只加用降纤酶,于治疗前及治疗后1、5、15 d进行临床疗效及神经功能缺损评分,并于治疗前和治疗后15 d检测2组患者血清MBP和S100β的含量。结果 2组患者治疗前后神经功能缺损评分、临床疗效均有改善(P<0.05),治疗组改善更明显(P<0.05),治疗后2组MBP、S100β含量均明显减少(P<0.05),治疗组降低更加显著(P<0.05)。结论丁苯酞氯化钠注射液联合降纤酶治疗可改善临床症状,可能与下调MBP、S100β有关。

弓形虫P30基因MBP融合蛋白的表达

目的 构建弓形虫主要表面抗原Ｐ３０ 基因的原核表达载体并在Ｅ－ｃｏｌｉ 中表达。方法 根据已发表的弓形虫Ｐ３０基因序列，自行设计合成一对引物并在引物５’端分别引入限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＳａｌＩ酶切位点，用ＰＣＲ技术从弓形虫ＲＨ 株基因组ＤＮＡ中扩增Ｐ３０ 基因片段，插入ｐＭＡＬＰ２ 质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａα感受态细胞，于氨苄ＬＢ培养平板上筛选阳性克隆，经过酶切及ＰＣＲ扩增鉴定重组子。将阳性重组子经ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ及免疫印迹分析。结果 从弓形虫ＲＨ 株ＤＮＡ中扩增出９７６ｂｐ 的Ｐ３０ 基因，构建成功ｐＭＡＬＰ２ － Ｐ３０ 重组质粒；ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔ 显示ＭＢＰ／Ｐ３０ 融合蛋白条带的分子量约为７７－５ｋＤ，减去ＭＢＰ的分子量４３ｋＤ，得出Ｐ３０ 蛋白分子量为３４－５ｋＤ，且能被弓形虫高免鼠血清识别。结论 从弓形虫基因组ＤＮＡ中获取Ｐ３０ 基因，并成功构建ｐＭＡＬＰ２ － Ｐ３０ 重组质粒，诱导表达了Ｐ３０ 的融合蛋白。为进一步Ｐ３０ 蛋白的分离纯化及其对动物的免疫原性研究作好准备。

基于L-MBP神经网络的煤自然发火期预测

针对不同矿井、矿井不同工作面预测煤自然发火期的难题,采用具有较好收敛性的L-M(Levernberg-Marquardt)BP算法的神经网络,开发出煤自然发火期预测仿真系统软件。根据煤自燃的内因和外因影响因素,在东北矿区各自燃采场收集了152个样本训练数据,并应用于该软件训练、预测其结果误差<10%。在神东矿区进行预测时,预测结果与实际情况吻合较好,为制定预防采场自然发火的技术措施提供了可靠的技术参数。

巷道围岩稳定性分类的MBP神经网络预测研究

研究BP神经网络的工作原理和改进技术,分析巷道围岩稳定性的影响因素,基于改进的MBP神经网络建立了围岩稳定性分类的神经网络识别模型。研究结果表明,该预测模型性能好,预测精度高,预测结果能很好地拟合地下工程实际,验证了该模型的可行性和实用性。