MCM5和P16(INK4A)在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨微小染色体维持蛋白-5(MCM5)与P16INK4A在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中的表达及其意义。方法采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫组化法,分别检测MCM5和P16INK4AmRNA及蛋白在40例宫颈癌组织、11例低度宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)、15例高度宫颈上皮内瘤变(CINⅡ~Ⅲ)和15例正常宫颈组织中的表达。结果 1各不同宫颈组织中MCM5和P16INK4AmRNA及蛋白的表达趋势一致。宫颈癌组织中MCM5和P16INK4AmRNA的表达量和蛋白表达率均高于CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ和正常宫颈组织。MCM5基因和蛋白在宫颈癌组织中的表达均比正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ高,差异均具有统计学意义(P<0.05);P16INK4A基因和蛋白在宫颈癌中的表达比正常宫颈组织、CINⅠ高,差异均有统计学意义(P<0.01),而与CINⅡ~Ⅲ间差异无统计学意义(P>0.05)。2MCM5mRNA表达量和蛋白表达率与临床期别、分化程度相关,差异有统计学意义(P<0.01),与年龄无关(P>0.05);P16INK4AmRNA和蛋白表达与临床期别、年龄无关(P>0.05),而与分化程度相关,差异有统计学意义(P<0.01)。3在宫颈癌组织中MCM5和P16INK4A表达呈正相关(r=0.538,P<0.01)。结论MCM5和P16INK4A的高表达可能与宫颈癌的发生发展有关。MCM5可能成为宫颈癌肿瘤增生的新标志物;其与P16INK4A联合检测有助于进行CIN的分级和转归判断,有望提高宫颈癌的筛查率。

MCM5在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨MCM5在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与其临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测78例原发性非小细胞肺癌组织、40例正常肺组织中MCM5的表达水平。结果非小细胞肺癌组MCM5阳性率高于正常肺组织组(P=0.000)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期非小细胞肺癌组织中MCM5阳性率比较,差异有统计学意义(P=0.031);淋巴结转移者MCM5表达率与无淋巴结转移者比较也有统计学差异(P=0.015)。结论 MCM5可能参与了非小细胞肺癌的发生和发展过程;可能成为判断非小细胞肺癌发生发展和评价预后的有效参考指标之一,对于非小细胞肺癌的早期预测可能具有重要的临床意义。

乳癌新辅助化疗后MCM5、Ki-67和C-erbB-2表达变化及意义

目的观察人乳癌新辅助化疗前后MCM5、Ki-67和C-erbB-2蛋白的表达情况,探讨其与化疗效果的关系。方法采用免疫组化法检测新辅助化疗前后40例乳癌标本中MCM5、Ki-67和C-erbB-2的表达。结果新辅助化疗有效率为77.5%。化疗前MCM5和Ki-67蛋白阳性表达显著高于化疗后(Z=-3.94、-3.04,P<0.01),而化疗前后C-erbB-2蛋白阳性表达差异无显著性(Z=-1.60,P>0.05);化疗前MCM5蛋白阳性表达显著高于Ki-67(Z=-4.02,P<0.01)。化疗有效组(31例)MCM5蛋白阳性表达显著高于化疗无效组(9例)(Z=-3.57,P<0.01),而C-erbB-2蛋白阳性表达显著低于化疗无效组(Z=-3.92,P<0.01)。结论ET方案新辅助化疗有较好的疗效,可能通过抑制MCM5、Ki-67蛋白的表达来阻止乳癌细胞的增殖。MCM5高表达、C-erbB-2阴性者化疗更为敏感,二者可作为临床指导乳癌化疗的分子生物学指标。

长链非编码RNA CRNDE通过下调miR-136-5p表达并上调MCM5表达促进U937细胞增殖并抑制其凋亡

目的 探究长链非编码RNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)对U937细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其作用机制。方法 首先通过基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库分析CRNDE在急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中的表达水平;实时荧光定量PCR检测AML细胞系miR-136-5p、 CRNDE及微小染色体维持蛋白5(MCM5)的mRNA表达水平。构建敲低CRNDE的慢病毒载体并转染U937细胞,设为敲低CRNDE组(sh-CRNDE组)和阴性对照组(sh-NC组);分别转染miR-136-5p模拟物(miR-136-5p mimic)和miR-136-5p抑制物(miR-136-5p inhibitor)对U937细胞中的miR-136-5p进行过表达和敲低,设为miR-136-5p过表达组(miR-136-5p-mimic)、过表达阴性对照组(NC-mimic)、 miR-136-5p敲低组(miR-136-5p-inhibitor)和敲低阴性对照组(NC-inhibitor)。CCK-8法和细胞计数试验检测CRNDE和miR-136-5p对细胞增殖的影响,流式细胞术检测CRNDE和miR-136-5p对细胞周期和凋亡的影响。实时荧光定量PCR检测miR-136-5p、 CRNDE及MCM5的mRNA表达,Western blot法检测MCM5、 P53、 B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白A2(cyclin A2)的蛋白表达水平。结果 CRNDE在AML患者骨髓和细胞系中高表达。敲低CRNDE可以上调miR-136-5p,抑制MCM5 mRNA和蛋白表达,抑制细胞增殖,促进凋亡并使细胞周期阻滞在G1期。过表达miR-136-5p也可抑制MCM5核酸和蛋白水平表达。而敲低miR-136-5p则可以逆转以上作用。结论 CRNDE通过下调miR-136-5p和上调MCM5表达,进而促进U937细胞增殖并抑制其凋亡。

微小染色体维持蛋白5基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达与意义

目的:探讨微小染色体维持蛋白5(MCM5)基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法分别半定量检测MCM5mRNA和MCM5蛋白在正常卵巢、卵巢上皮性肿瘤组织中的表达。结果:MCM5mRNA和蛋白在不同卵巢组织中的表达趋势是一致的,上皮性癌组织中的表达高于正常和上皮性良性肿瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05)。MCM5mRNA和蛋白在不同年龄组、不同病理类型的肿瘤中表达差异无统计学意义(P>0.05)。MCM5mRNA和蛋白的表达水平随组织学级别的升高而升高,在低分化(G3)上皮性癌中的表达高于高分化(G1)和中分化(G2)癌,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MCM5的表达可能参与卵巢上皮性癌的发生发展过程,其表达水平与肿瘤的分化程度有关,可能做为新的卵巢肿瘤增生标志物。

微小染色体维持蛋白5在斑马鱼脑发育中的作用及机制研究

目的观察微小染色体维持蛋白5(mcm5)在斑马鱼脑发育中的作用及机制。方法将90枚斑马鱼胚胎分为3组:对照组[CONT组,注射无意义的吗啉基寡核苷酸(MO)]、mcm5 MO组(注射mcm5特异的MO)和mcm5 MO+mcm5mRNA组(同时注射mcm5特异的MO和mcm5 mRNA),每组30枚,观察mcm5 MO组和CONT组脑部发育情况,并用mcm5 mRNA援救敲降造成的发育缺陷;利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析mcm5 MO组和CONT组之间蛋白质组的变化;采用PH3抗体染色和荧光定量PCR(qPCR)检测斑马鱼脑部增殖细胞的变化以及增殖相关基因的表达量。结果与CONT组相比,mcm5 MO组表现出脑部变小的特征,其中眼睛、中脑和后脑脑室变小较明显。iTRAQ实验结果显示,Hippo信号通路中14-3-3蛋白表达量增加。PH3抗体染色结果表明,mcm5 MO组增殖细胞明显减少,增殖相关基因cycline、cdk2、cdc25b的表达量明显降低。结论mcm5通过Hippo信号通路调节斑马鱼脑部细胞的增殖,影响斑马鱼头部发育。

微小染色体维持蛋白5在骨肉瘤中的表达和意义

目的探讨微小染色体维持蛋白5（MCM5）在骨肉瘤中的表达特征和预后价值。方法用免疫组织化学二步法检测MCM5和细胞核相关抗原（Ki-67）在76例骨肉瘤和32例骨软骨瘤、24例正常骨组织中的表达，探讨其表达水平与临床病理特征的相关性，分析MCM5蛋白表达在骨肉瘤中的预后价值。结果MCM5和Ki-67在76例骨肉瘤组织中均有表达，在骨软骨瘤和正常骨组织中不表达，差异有统计学意义（P〈0．01）；MCM5阳性率与骨肉瘤等级相关（r=0．756，P〈0．01），与有丝分裂计数相关（r=0．643，P〈0．01），与其他临床病理参数无明显相关；MCM5与Ki-67阳性率正相关（r=0．725，P〈0．01），但显著高于后者（P〈0．01）；MCM5高表达组（〉62％）与低表达组（≤62％）生存时间差异有统计学意义（P〈0．05），MCM5阳性率与骨肉瘤预后相关。结论MCM5能反映骨肉瘤的恶性程度，MCM5阳性率越高，骨肉瘤的恶性程度越高；MCM5比Ki-67能检测出更多的骨肉瘤增殖细胞。