IL-10、MD-1基因单核苷酸多态性与哮喘易感性的相关性研究

目的：分析IL-10基因rs1800896、rs3024492位点和髓样分化蛋白1（Myeloid differentiation1,MD-1）基因rs7740529、rs2233128位点单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism,SNP）与哮喘遗传易感性的相关性以及过敏性鼻炎（Allergic rhini-tis,AR）对哮喘遗传易感性的影响。方法：应用Sequenom MassARRAYSNP分型技术对141例哮喘患者和145例正常对照的四个SNP位点（rs1800896、rs3024492、rs7740529、rs2233128）进行基因分型,再将哮喘患者中确定有过敏性鼻炎和无过敏性鼻炎者分别与正常对照组比较。χ2检验统计分析病例组和对照组的基因型频率;采用非条件Logistic回归校正年龄、性别影响,计算比数比（OR）和95%可信区间（CI）,以此评价各位点多态性与哮喘遗传易感性的相关性以及过敏性鼻炎对哮喘易感性的影响。结果：（1）IL-10rs1800896多态性位点GG、GA、AA三种基因型分布频率在哮喘组、哮喘和过敏性鼻炎共患组、哮喘而无鼻炎组的分布频率和对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.001）,有无过敏性鼻炎对其影响不明显。相较GG或AA基因型,携带基因型GA的个体,哮喘的患病风险明显降低（OR=0.033,95%CI：0.017~0.065）。（2）MD-1rs7740529位点CC、CT、TT三种基因型分布频率在哮喘患者组、哮喘和过敏性鼻炎共患组、哮喘而无鼻炎组的分布频率和对照组相比,差异也均有统计学意义（P≤0.005）,有无过敏性鼻炎对其影响不明显。相比较CC或TT基因型,携带基因型CT的个体,哮喘的患病风险明显降低（OR=0.369,95%CI：0.225~0.606）。（3）IL-10rs3024492位点TA、AA基因型和MD-1rs2233128位点AG、GG基因型在哮喘人群中的分布频率与对照组相比无统计学意义（P〉0.05）。结论：IL-10rs1800896与MD-1rs7740529位点多态性与哮喘的遗传易感性相关,其杂合型的患病风险均明显降低,且有无过敏性鼻炎对其影响不明显。

MD-1膜驱剂在油砂表面的吸附及润湿性研究

分子沉积(MD)膜驱油是提高原油采收率的一种新方法。在题示实验研究中所用MD膜驱剂MD 1是一种分析纯单分子双季铵盐,油砂未洗油,取自辽河兴隆台109井。介绍了溴百里酚蓝为指示剂测定水溶液中MD 1质量浓度的方法,在10～300mg/L范围内溶液吸光度与浓度之间有良好的线性关系。MD 1在油砂上的吸附很快,在25℃下4h即基本达到平衡,吸附量随MD 1溶液pH值升高而增大,pH值在2～4之间时增加快,在4～9之间时增加慢,在9～12之间时又增加快,由此确定吸附主要是静电作用的结果,油砂表面的电荷性质和电荷量是决定吸附的主要因素。吸附等温线符合Langmuir定律,即为单分子层吸附,计算求得25℃和40℃时饱和吸附量分别为13.04和12.68mg/g油砂,吸附热为-15.2kJ/mol。在吸附MD 1后的油砂上汽油的相对接触角由43.68°增大至49.56°,油砂表面亲油性减弱,亲水性增强。在油砂上吸附成膜时放热,成膜表面润湿性改变,是MD膜驱剂提高原油采收率的2个重要因素。图4表1参12。

MD-1膜驱剂溶液的性质

分子沉积(MD)膜驱油技术是依靠MD膜驱剂在油藏体系的各种界面上单分子层静电吸附释放热量,从而提高原油采收率的新型技术。考察了MD 1膜驱剂溶液的电导率、粘度和其在原油中的分配。结果表明,MD 1膜驱剂属表面非活性物质,其水溶液不存在"胶束"状态;MD 1膜驱剂的加入不增加驱替流体的粘度,不改变油 水流度比,膜驱油机理与聚合物驱不同。随着MD 1膜驱剂质量浓度的增加,其相应油 水分配系数明显降低,MD 1膜驱剂质量浓度小于200mg/l时,其相应油 水分配系数随着质量浓度的增加明显降低,而浓度大于200mg/l时,油 水分配系数一般小于0 1;相同条件下,原油中的胶质和沥青质含量越多,MD 1膜驱剂在油、水两相间的分配系数越高。MD 1膜驱剂的油 水分配系数远小于1,说明其在油相中的溶解量很小。

油砂的ζ电位对MD-1膜驱剂吸附的影响及吸附动力学和热力学研究

采用静态吸附法研究了不同pH值下MD 1膜驱剂在大庆主力油藏洗油油砂上的吸附特性。实验结果表明油砂悬浮液的pH值明显影响油砂粒子表面的带电性,大庆主力油藏油砂的pHzpc=2.58,pH<2.58时油砂的表面带正电,pH>2.58时,油砂的表面带负电,且pH值越高,表面负电荷越多。油砂对MD 1膜驱剂的饱和吸附量As随ζ电位的降低很快增加,电位是决定吸附的主要因素。当ζ电位降到一定值(约为-60mV)以下时,饱和吸附量As几乎不再随ζ电位的降低而变化。吸附动力学研究表明,油砂颗粒表面电位越低,对MD 1膜驱剂的吸附活化能越小,要克服的吸附势能垒越低,吸附MD 1膜驱剂的速度越快,吸附MD 1膜驱剂的静电作用越强。温度对吸附速率影响不大。吸附热力学研究表明,吸附过程是自发且放热的,而且放热很大,pH=10.03时ΔH=-79.33kJ/mol,pH=4.04时ΔH=-38.84kJ/mol。pH值越高,放出的热越多,吸附后体系越稳定。pH越高,油砂表面电荷量越大,越有利于MD 1膜驱剂的吸附。图5表2参14。

MD-1膜驱剂溶液的界面特性研究

以非离子、阳离子、阴离子表面活性剂烷基酚聚氧乙烯醚OP 10、十六烷基三甲基溴化铵CTAB、十二烷基苯磺酸钠SDBS作对比剂,在20℃用吊环法实验测定了膜驱剂MD 1(一种单分子双季铵盐)水溶液的表面张力和界面张力。MD 1水溶液的表面张力基本上不随溶液浓度而变,其值约71.5mN/m,比纯水表面张力理论值仅约低2%,说明MD 1不具有表面活性,是表面非活性物质。模拟油(1%胶质沥青质的煤油溶液,胶质沥青质为辽河兴隆台原油在体积比2∶3的甲醇/苯中的沉淀物)与MD 1水溶液之间的界面张力在MD 1浓度增至25mg/L时开始下降,250mg/L时降至稳定值(20mN/m左右),只下降36%,不形成低界面张力体系。界面张力下降是MD 1在界面吸附富集的结果。模拟油与1000mg/LOP 10+MD 1混合水溶液之间的界面粘度随MD 1浓度(0,300,500mg/L)增加而降低,降低幅度在低转动角速度下随角速度增加而增大,在高角速度下趋于一致。由于OP 10不具有与MD 1相互作用的基团,加入MD 1引起界面粘度(即界面膜强度)降低,是MD 1与胶质沥青质作用的结果。图4参10。

膜驱剂MD-1在大庆原油界面的吸附特性

为了考察MD膜驱油过程中MD 1膜驱剂(一种单分子双季铵盐)与原油之间的相互作用,研究了MD 1水溶液与大庆原油之间界面上MD 1的静态平衡吸附及吸附动力学和热力学。实验结果表明,MD 1在大庆原油界面的平衡吸附量很小,45℃时小于15μg/g原油,水溶液pH值较高时吸附量较大;吸附动力学遵循一级吸附动力学方程,pH=5.84时的吸附速率常数和吸附活化能均高于pH=10.07时的相应值,即低pH值时吸附速率较高,达到平衡所需时间较短,要克服的势能垒较低;吸附量随MD 1溶液浓度增大而增大,在浓度约75mg/L时达到平衡;在45～56℃温度范围平衡吸附量和覆盖度均随温度升高而减小;吸附过程的ΔG和ΔH均<0,是自发放热过程,吸附热达-50kJ/mol。提出了MD膜驱油的"能量场"机理。图3表2参18。

MD-1膜驱剂在石英砂和蒙脱土颗粒上吸附的光谱学表征

采用FT IR和XRD方法,与阳离子表面活性剂CTAB对比,研究了MD 1膜驱剂(一种单分子双季铵盐)在石英和蒙脱石表面的吸附。给出了吸附前后两种矿物的FT IR和XRD谱图,分析指认了各红外特征吸收峰,由X射线衍射峰强度计算了晶层间距d(100)。在石英上CTAB有微量吸附,而IR检测不出MD 1的吸附,CTAB和MD 1基本上不引起石英d(100)的改变。在蒙脱石上MD 1只发生单层吸附,其吸附量较CTAB小,MD 1的吸附使蒙脱石吸附水减少,d(100)从1.545nm减小至1.399nm,CTAB的吸附也使蒙脱石的吸附水减少,但使d(100)增大到1.952nm。因此,MD 1抑制粘土膨胀的能力比CTAB强。图6表1参7。

麦冬多糖Md-1、Md-2化学结构的研究

目的:研究中药麦冬中的多糖化学结构。方法:采用柱层析进行纯化,并用红外光谱和核磁等方法阐明Md-1、Md-2的化学结构。结果:两多糖分子量为27064、48651,均由单一的葡萄糖组成,构型为α型,单糖的连接方式为1→4连接。结论:Md-1、Md-2多糖的化学结构均为有一取代甲基的α-D-(1→4)的葡聚糖,两多糖的硫基含量和分子量不同。

免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及其在皮肤移植中的效应

目的探讨免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及在皮肤移植中的效应。方法采用小鼠同种皮肤移植模型,以环孢霉素A(CsA)、他克莫司(FK506)、霉酚酸酯(MMF)或雷帕霉素(SRL)为免疫抑制手段。结果CsA和MMF能抑制脾细胞的MD-1表达和增殖反应强度,下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,并显著延长皮肤移植物平均存活时间(MST);FK506对IL-10水平无明显影响;而SRL对MD-1表达及IL-2与IL-10水平均无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关,和IL-10水平呈极显著负相关。结论CsA、FK506和MMF能抑制小鼠MD-1的表达,其作用与血清IL-2水平下调有关。在免疫抑制状态下,MD-1表达下调与同种皮肤移植物存活时间延长有关,而其表达上调对排斥反应的发生具有一定的指示作用。

保水剂MD-1在香菇生产中的应用试验

采用不同量保水剂MD-1于培养料混拌栽培香菇,在试验范围内,节水、省人工、减少污染、提高香菇产量,其中以含量为1%保水剂MD-1配方表现最好,显著的提高香菇产量。

香菇生产中应用保水剂MD-1的研究

在香菇生产期间,采用不同量保水剂MD-1与培养料混拌处理。结果表明:在试验范围内,添加保水剂可以节水,省人工,减少污染,提高香菇产量,其中以1%保水剂MD-1配方表现最好。

小鼠MD-1表达的影响因素及其在移植排斥反应中的作用

目的:探讨影响小鼠MD-1表达的因素以及MD-1在移植排斥反应中的作用。方法:实验采用C57BL/6-BALB/c小鼠同种皮肤移植模型,以非特异性免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和SRL,以及特异性MD-1反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)为干预手段,于术后第11天留取标本检测脾细胞MD-1表达水平和增殖反应强度、血清IL-2和IL-10水平以及皮肤移植物组织学改变,并记录移植物存活时间。结果:CsA、MMF和AS-ODNs处理能减少脾脏MD-1表达阳性细胞数、降低脾细胞增殖反应强度、下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,并显著延长皮肤移植物平均存活时间(MST);FK506与CsA和MMF处理结果的差异在于其对血清IL-10水平无明显影响;SRL处理仅能减低脾细胞增殖反应强度和延长皮肤移植物MST,对MD-1表达及IL-2与IL-10分泌无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关,和IL-10水平呈极显著负相关。结论:CsA、FK506、MMF和AS-ODNs处理均能有效抑制小鼠MD-1的表达。免疫抑制剂干预MD-1表达的作用与血清IL-2水平下调有关。MD-1通过影响淋巴细胞增殖反应和血清IL-2、IL-10水平,在移植排斥反应中发挥重要作用。

香菇应用保水剂MD-1的试验方案设计

介绍了香菇栽培中应用保水剂MD-1的试验方案设计、试验方案中的内容记录及试验预期目标。

MD-1型脉冲电镀专用调制器

只需将新型的MD-1脉冲电镀专用调制器与常用的直流电源连接,便可形成脉冲电源,使应用脉冲电渡技术所需设备费用大幅度下降.专用调制器由集成电路与大功率场效应管等新型器件组成,性能稳之、易于调控.

反义脱氧寡核苷酸静脉输注抑制小鼠MD-1表达延长皮肤移植物存活时间的研究

目的静脉输注反义脱氧寡核苷酸(简称反义核酸,AS-ODN)抑制小鼠MD-1表达,并初步探讨MD-1用于排斥反应诊断的前景。方法实验组(组1和组2)和阳性对照组(组3)行C57BL/6-BALB/c同种皮肤移植,阴性对照组(组4)行BALB/c-BALB/c同基因皮肤移植后,分别静脉输注小鼠MD-1AS-ODN(组1)、随机序列脱氧寡核苷酸(组2)或生理盐水(组3和组4)。于术后第11天留样检测脾细胞MD-1表达水平(FACS)、脾细胞增殖反应强度(AlamarBlue还原率)、血清IL-2和IL-10水平(ELISA)以及皮肤移植物组织学改变(组织病理学检查),并记录移植物存活时间。结果静脉输注小鼠MD-1AS-ODN能明显减少BALB/c小鼠脾细胞中MD-1阳性细胞百分数,降低脾细胞对特异性和非特异性刺激的增殖反应强度,下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,减少移植物局部淋巴细胞浸润,并显著延长同种皮肤移植物存活时间。结论静脉输注MD-1AS-ODN特异性抑制小鼠MD-1表达可显著延长皮肤移植物的存活时间。MD-1表达水平对排斥反应的发生具有一定的指示作用。

地西他滨联合曲古抑菌素A对MDS细胞株SKM-1作用的体外研究

本研究探讨去甲基化制剂地西他滨(decitabine)和(或)组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对MDS-RAEB细胞株SKM-1的影响及作用机制。用台盼蓝拒染法研究药物对SKM-1细胞生长曲线的影响;用四氮唑蓝还原试验和流式细胞术观察药物对SKM-1细胞分化作用;用AnnexinⅤ-FITC标记药物作用后的细胞,了解其早期凋亡的情况;用RT-PCR研究药物作用前后细胞Fas,survivin和P15INK4B基因表达的变化。结果表明:decitabine和(或)TSA对SKM-1细胞生长有抑制作用,能促进SKM-1细胞分化,细胞表面CD14、CD11b表达增加,HLA-DR表达减少;decitabine和(或)TSA处理SKM-1细胞后,SKM-1细胞凋亡增加,细胞Fas和P15INK4BmRNA表达增加,survivin mRNA表达减少。结论:decitabine和TSA均可以促进SKM-1细胞凋亡和分化,可能与Fas、P15INK4B和survivin基因表达有关,二者联用有协同作用。

丙戊酸钠对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1增殖和凋亡的影响

背景与目的:骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)是一类多能造血干细胞的克隆增殖性疾病,目前临床尚无明确有效的治疗方法。研究发现丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)可通过诱导细胞周期阻滞和凋亡来抑制肿瘤细胞的增殖,本实验探讨VPA对MDS细胞MUTZ-1增殖的抑制作用及其作用机理。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测VPA对细胞增殖的抑制作用;采用光学显微镜和电子显微镜观察VPA作用后细胞形态的变化;应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度药物作用后细胞凋亡的比例及细胞周期分布的变化;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Westernblot方法分别检测药物作用后p21WAF1(细胞周期依赖性激酶抑制因子)在mRNA和蛋白质水平表达量的改变。结果:VPA对MUTZ-1细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。经4mmol/LVPA处理MUTZ-1细胞72h后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征:光镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体;透射电镜下可见凋亡细胞核染色质边集、胞浆浓缩、密度增加,胞浆内可见大小不规则的染色质团块。流式细胞术检测结果表明经1、2、4mmol/LVPA作用72h后,细胞的凋亡率由处理前的(0.99±0.35)%分别上升为(3.14±0.87)%、(14.90±1.04)%、(22.46±1.74)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);G0/G1期细胞比例逐渐增多,S期细胞比例逐渐减低,细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.05)。RT-PCR和Westernblot技术均发现VPA作用MUTZ-1细胞72h后,明显促进p21WAF1mRNA和p21WAF1蛋白的表达(P<0.05)。结论:VPA能够通过上调p21WAF1的表达,阻滞MUTZ-1细胞于G0/G1期,最终抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡。

人参皂苷Rh_2对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理

以不同质量浓度的人参皂苷Rh2与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参皂苷Rh2对MSB-l细胞的增殖抑制作用,并通过流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理。结果显示:人参皂苷Rh2对MSB-l细胞的增殖存在抑制作用,并呈剂量依赖性,人参皂苷Rh2与MSB-1细胞培养72 h后的半数抑制质量浓度为0.65 mg/L;流式细胞术测定表明,人参皂苷Rh2可阻滞MSB-1细胞于S期;荧光检测和透射电镜观察表明,人参皂苷Rh2可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡。

丙戊酸钠诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1凋亡的实验研究

为了探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1的生长抑制及诱导凋亡作用,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测VPA对细胞生长的抑制作用;采用光学显微镜和电子显微镜观察VPA作用后细胞形态的变化;应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度VPA作用后细胞凋亡的比例和细胞周期分布的变化。结果显示:VPA对MUTZ-1细胞的生长抑制作用呈现时间和剂量依赖性;经4mmol/LVPA处理MUTZ-1细胞72小时后,细胞呈现典型的凋亡形态特征,光学显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体;透射电子显微镜下可见凋亡细胞核染色质边集、胞浆浓缩、密度增加,胞浆内大小不规则的染色质团块;流式细胞术结果表明,细胞凋亡率随着VPA浓度的增加而逐步增高,G0/G1期细胞比例随着VPA浓度的增加而逐渐增多,S期细胞比例逐渐减低,细胞被阻滞在G0/G1期。结论:VPA通过G0/G1期阻滞诱导MUTZ-1细胞凋亡,从而抑制MUTZ-1细胞增殖。

维生素K_2诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究维生素K2(VK2)诱导人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制,采用流式细胞术Annexin-VFITC/PI双染分析细胞凋亡率和PI染色分析细胞周期的改变,用RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达,用发光比色法检测caspase-3活性。研究结果显示:细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长逐渐增高并呈明显的时间浓度依赖性(P<0.05),且随着药物浓度的增加和作用时间的延长S期和G2期细胞逐渐减少(P<0.05),G0/G1期细胞逐渐增多(P<0.01),细胞被阻滞在G0/G1期,并且在G0/G1期前出现明显的亚G1峰,即凋亡峰;抗凋亡基因bcl-2、survivin的表达随着VK2浓度的增高明显下调(P<0.05),而促凋亡基因bax表达无明显变化(P>0.05);caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论:VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MUTZ-1细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因bcl-2、survivin在细胞凋亡过程中也起重要作用。