虫草素对MDA-MB-231细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的研究虫草素对高转移潜能乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及其TMSG-1蛋白表达的影响。方法采用MTT法观察不同浓度的虫草素(0、1、2、4和8μg/ml)对MDA-MB-231细胞增殖的作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;免疫印迹法检测经不同浓度的虫草素(0、1、2、4和8μg/ml)处理48 h后,MDA-MB-231细胞TMSG-1蛋白的表达。结果虫草素能够以剂量依赖方式显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.01)。流式细胞术结果显示,虫草素可显著促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.01)。虫草素可以呈剂量依赖方式增强MDA-MB-231细胞TMSG-1的表达。与对照组相比,2μg/ml虫草素即可明显上调MDAMB-231细胞TMSG-1蛋白的表达(P<0.05)。结论虫草素可以呈剂量依赖方式抑制MDA-MB-231细胞的生长并诱导其凋亡;虫草素可能通过上调MDA-MB-231细胞TMSG-1蛋白的表达,发挥其潜在的抑制肿瘤细胞浸润转移的作用。

Src激酶抑制剂PP2对乳腺癌MDA-MB-231细胞黏附、迁移能力的影响

目的:研究Src激酶抑制剂PP2对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)肌动蛋白细胞骨架及黏附、迁移能力的影响。方法:不同浓度Src激酶抑制剂PP2(0.2、1.0、5.0和25.0!mol/L)孵育MDA-MB-231细胞24h。用FITC标记的鬼笔环肽标记F-肌动蛋白,用荧光显微镜分析肌动蛋白细胞骨架的重组情况;用免疫印迹技术检测细胞内骨架组分(Triton不溶组分)及胞浆组分(Triton可溶组分)中肌动蛋白的分布;划痕损伤实验检测细胞迁移速度;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞对人工重组基底膜(Matrigel)的黏附能力。结果:PP2处理可导致细胞内肌动蛋白细胞骨架发生解聚,F-肌动蛋白排列和分布及细胞形态发生明显改变;此外,PP2可明显降低MDA-MB-231细胞迁移速度及其对人工重组基底膜的黏附能力,其效应呈剂量依赖性。结论:Src激酶抑制剂PP2可影响乳腺癌细胞的黏附及迁移能力,其作用可能与其对肌动蛋白细胞骨架的重组有关。

单羧酸转运蛋白基因过表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的研究单羧酸转运蛋白(MCT)基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、细胞周期、侵袭和转移能力的影响。方法将真核表达质粒pcDNA3.1/MCT及空质粒pcDNA3.1分别转染乳腺癌MDA-MB-231细胞。采用实时定量PCR(qRTPCR)和Western blot法分别检测转染后细胞内MCT基因的表达。Annexin V-FITC/PI染色和PI单染色结合流式细胞术检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、细胞周期的影响,Transwell实验检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响。结果实验组MCT的mRNA和蛋白水平明显高于转染空质粒的阴性对照组和未处理组;MCT过表达能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡,G2期细胞减少、S期细胞增多,同时能抑制癌细胞的侵袭和迁移能力。结论 MCT基因过表达能促进MDA-MB-231细胞的凋亡、调节细胞G2/M期检控点,抑制细胞的侵袭和迁移能力。

MCM10沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及其机制

目的:探讨微小染色体维持蛋白10(MCM10)基因沉默对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,并阐明其作用机制。方法:将人三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞分为对照组、MCM10干扰组1(shMCM10-1组)和MCM10干扰组2(shMCM10-2组)。构建MCM10慢病毒干扰载体MCM10-1和MCM10-2,分别感染shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞,对照组MDA-MB-231细胞感染阴性对照病毒。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中MCM10 mRNA和蛋白表达水平,Cellomics计数法检测各组MDAMB-231细胞的增殖率,流式细胞术检测各组MDA-MB-231细胞凋亡率,采用Caspase3/7活性检测试剂盒检测各组MDA-MB-231细胞中Caspase3/7活性。结果:与对照组比较,shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞中MCM10 mRNA表达率明显降低(P<0.01),未检测到MCM10蛋白表达;与对照组比较,shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞相对增殖倍数明显降低(P<0.01),MDA-MB-231细胞凋亡率明显升高(P<0.01),MDA-MB-231细胞中Caspase3/7活性明显升高(P<0.01)。结论:MCM10基因沉默可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进细胞凋亡,增加细胞中Caspase3/7活性。

醉香含笑心材挥发性成分GC-MS分析及抑制MDA-MB-231细胞生长与诱导其凋亡作用

目的分析醉香含笑心材提取物(extract of trunk of Michelia macclurei Dandy.,ETMMD)的挥发性成分,并考察其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外生长抑制作用及诱导其凋亡的作用。方法水蒸气蒸馏法提取醉香含笑心材的挥发性成分,用气-质联用(GC-MS)技术进行分析,并用峰面积归一化法测定各成分相对含量;采用MTT法及流式细胞术分别检测6.25,12.50,25.00μg·mL-1的ETMMD对MDA-MB-231细胞体外生长抑制作用及诱导其凋亡的作用。结果共检出42个色谱峰,确定了其中41种化合物,占该挥发性成分总量的99.73%。ETMMD对MDA-MB-231细胞的抑制率呈浓度依赖关系。结论 ETMMD的挥发性成分以倍半萜烯及不饱和酮、不饱和酯类为主,此外还包括高级脂肪酸酯,以及一些甾体类化合物。ETMMD能明显抑制MDA-MB-231细胞的生长。浓度为6.25,12.50,25.00μg·mL-1的ETMMD可明显诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡。

CD44剪接变异体在乳腺癌中的表达

目的观察乳腺癌细胞系及原发性乳腺癌组织中CD44剪接变异体种类及其表达情况。方法 RT-PCR法检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435和20例原发性乳腺癌组织中CD44变异体表达情况,分析其与临床病理参数之间的关系。结果 RT-PCR分析显示,在已知的8种剪接变异体、乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435和所检测的全部乳腺癌组织标本中,检测到CD44剪接变异体1、2、3、4、5、6、8,其中CD44剪接变异体4、5表达水平较高。CD44剪接变异体与临床病理参数分析显示CD44剪接变异体与患者年龄、TNM分期、淋巴结转移、ER、PR表达无关。CD44剪接变异体1和CD44剪接变异体2 mRNA的高表达与较小的肿瘤直径有关;CD44剪接变异体4的mRNA高表达与组织学高级别有关;CD44剪接变异体2、6的mRNA高表达与Her-2低表达相关;CD44剪接变异体5的mRNA低表达和Her-2高表达相关。结论 MDA-MB-231、MDA-MB-435及所检测的乳腺癌组织标本中,CD44剪接变异体为异质性表达,以标准型CD44表达水平最高。

放射性碘化氟维司群对激素依赖性人乳腺癌治疗作用研究

目的探明碘化氟维司群对人乳腺癌细胞的生长抑制作用及对裸鼠重要脏器的影响。方法明确碘化氟维司群对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞杀伤作用的不同;建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,采用不同方式给药,观察肿瘤、肝肾等重要脏器的情况。结果 MTT实验表明碘化氟维司群对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞具有相似的细胞毒作用,但前者稍强于后者,一过性接触实验表明碘化氟维司群能够与MCF-7细胞结合继续发挥肿瘤抑制效应,而在MDA-MB-231细胞则不然(P<0.05);经尾静脉注射碘化氟维司群后,肿瘤部位有放射性浓聚,占到注射总量的(4.33±0.28)%,瘤体先缩小后增大,血液中的放射性占到注射总量的(20.76±2.54)%,肝肾等脏器也有放射性分布,其分布符合雌激素受体分布状况;瘤体局部注射显示强大的肿瘤杀伤作用,放射性分布基本局限于瘤体区域。结论碘化氟维司群对乳腺癌MCF-7细胞有良好的抑制作用,是放疗和内分泌治疗作用的叠加,且对裸鼠的一般状况及重要脏器的影响是可控的。

CARD10在乳腺癌中的表达及对细胞周期和增殖能力的影响

目的检测CARD10在乳腺癌组织中的表达情况及体外沉默其表达后对MDA-MB-231乳腺癌细胞周期、增殖能力的影响。方法利用免疫组织化学染色检测CARD10在62例乳腺癌及8例正常乳腺组织中的表达;利用化学合成的靶向CARD10-siRNA转染MDA-MB-231, 48 h后,RT-PCR检测干扰效率,流式细胞实验检测细胞周期变化,CCK-8检测增殖能力变化。结果CARD10在乳腺癌组织中显著性高表达,且与乳腺癌患者分期相关(P<0.05);CARD10被沉默后,抑制M DA-MB-231细胞增殖,阻滞细胞周期进程。结论CARD10促进乳腺癌MDA-MB-231细胞周期进程和细胞增殖,该研究为CARD10在乳腺癌的靶向治疗奠定了基础理论依据。