钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响

目的:研究钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响及相关机制。方法:采用倒置显微镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术等方法观察钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞形态、基因组DNA断裂和凋亡细胞数的变化;采用RT-PCR检测钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞凋亡相关基因bcl-XL、bcl-2、IAP-1、bax及Smac mRNA表达的变化;采用Western blotting法测定Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:与MDA-MB-435S亲本细胞(对照组)相比,钙磷酸蛋白C处理后的MDA-MB-435S细胞(实验组)出现凋亡形态学特征(如胞膜发泡、染色质凝集、凋亡小体形成等)改变,显示特征性的DNA"梯状"断裂变化,凋亡细胞数明显增多。RT-PCR和Western blotting结果显示:与对照组相比,实验组细胞中促凋亡基因bax和Smac mRNA表达上调,抗凋亡基因bcl-2mRNA表达下调,但抗凋亡基因bcl-XL和IAP-1mRNA表达没有明显变化;实验组Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。结论:钙磷酸蛋白C可诱导MDA-MB-435S凋亡,该作用可能与上调bax和Smac基因表达及下调bcl-2基因表达有关。

粉防己碱对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的作用

目的探讨粉防己碱(Tet)对雌激素受体(ER)阴性人乳腺癌MDA-MB-435S细胞的作用。方法 MTT方法检测Tet对MDA-MB-435S细胞体外生长的影响。用碘化丙啶单染流式细胞术测定法检测Tet对MDA-MB-435S细胞周期的影响。结果 Tet对MDA-MB-435S细胞生长的抑制作用随着Tet浓度的增加、时间的延长而增大,Tet剂量与时间之间存在交互作用(P<0.01)。Tet作用于MDA-MB-435S细胞24 h后,G0/G1期细胞比例均显著增多,随Tet浓度增加,G0/G1期细胞比例增多;S期、G2M期细胞比例均明显降低,并且随Tet浓度增加,S期、G2M期细胞比例降低。结论 Tet对雌激素受体阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-435S增殖有明显抑制作用,且存在浓度和时间依赖性。Tet阻滞MDA-MB-435S细胞于G0/G1期,降低S期比例,抑制DNA合成是其抑制乳腺癌细胞生长的机制之一。

下调TSG101对乳腺癌细胞系MDA-MB-435S的影响

目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)的下调对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的影响。方法:应用脂质体法将靶向TSG101的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染入乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞中。分别使用MTT法、流式细胞仪检测siRNA干扰后MDA-MB-435S细胞增殖能力、细胞周期的变化。结果:MTT结果显示,TSG101 siRNA转染后的MDA-MB-435S细胞与对照组相比,增殖能力减弱。细胞周期结果显示,TSG101 siRNA转染后的MDA-MB-435S细胞周期与对照组相比,G0/G1期比例增多,S期比例减少,细胞周期阻滞于G1/S期。结论:TSG101的下调能够抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的增殖,并导致细胞周期阻滞。TSG101可能参与乳腺癌的发生、发展过程。

Cyclin D1 表达与雌激素受体阴性乳癌细胞株MDA-MB-435s凋亡的研究

目的 探讨雌激素受体阴性乳癌细胞中CyclinD1与细胞凋亡之间的关系。 方法 通过 1,2 5 (OH ) 2 D3诱发雌激素受体阴性乳癌细胞株MDA MB 43 5s凋亡 ;采用MTT法检测细胞增殖情况 ;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率 ;TUNEL法检测细胞凋亡数 ;免疫组化法检测CyclinD1阳性表达百分率 ,并进行相关性分析。结果 在 10 - 8mol/L的 1,2 5 (OH ) 2 D3诱发MDA MB 43 5s凋亡过程中 ,细胞周期被抑制在G0 /G1 期 ,癌细胞凋亡率与CyclinD1的阳性表达呈负相关趋势。 结论 CyclinD 1的检测 ,可直接反映雌激素受体阴性乳癌细胞株用药后的细胞凋亡情况 ,可为临床评价雌激素受体阴性乳癌的治疗效果提供新的指标。

反义人DNMT1基因对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖和细胞周期的影响

目的构建表达人DNMT1基因(DNA methyltransferase 1,DNMT1)反义RNA的真核表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖的影响。方法应用DNA重组技术,将人DNMT1基因的cDNA片段克隆至pcDNA3.1(-)载体中,构建DNMT1反义RNA真核表达质粒,测序验证,将其转染入人乳腺癌细胞系中,利用荧光定量PCR法检测转染前后细胞DN-MT1基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测转染后DNMT1蛋白表达变化;应用MTT法检测细胞生长状况,绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞周期的变化。结果成功构建出能够表达DNMT1反义RNA的真核表达质粒。转染该质粒后,与未转染组和转染正义质粒组相比,MDA-MB-435s细胞中DNMT1基因mRNA和DNMT1蛋白表达量均显著下降;细胞生长变慢;细胞周期分析可见S期明显减少,而G1/G0期细胞显著增加。结论反义DNMT1能够特异性下调该基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌基因治疗提供了新的靶标。

三氧化二砷诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-435s凋亡和bcl-2、bax表达关系的研究

目的观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)诱导人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s凋亡的情况及对bcl-2和bax表达的影响,初步探讨了其诱导凋亡的途径。方法不同浓度As2O3体外作用于MDA-MB-435s细胞24h后,采用TUNEL染色法和DNA梯状电泳法检测细胞凋亡情况,应用免疫组化法检测细胞中bcl-2和bax蛋白表达情况。结果As2O3作用后,DNA琼脂糖凝胶电泳法呈现凋亡DNA梯状条带;As2O3作用组的凋亡指数明显高于阴性对照组(P<0.05);bcl-2表达下调,bax表达上调。结论As2O3能诱导MDA-MB-435s细胞凋亡,上调bcl-2蛋白表达、下调bax蛋白表达是其诱导凋亡的途径之一。

乳腺癌细胞MDA-MB-435s中侧群细胞的分选及其与非侧群细胞的生物学特点比较

目的分离乳腺癌细胞MDA-MB-435s中的侧群细胞(sidepopulation cells,SP),并比较侧群细胞和非侧群细胞(non-side population cells,NSP)的基本生物学特点.方法经Hoechst33342染色后,利用流式细胞技术分选乳腺癌细胞MDA-MB-435s中SP和NSP 2个细胞亚群,比较2群细胞的形态、增殖和周期等特点.结果分选得到的SP细胞约占5.2%,其增殖速度较NSP细胞快,且细胞形态较粗大.NSP细胞的G1期所占比例为73.63%,高于SP细胞的G1期所占比例为54.16%.结论 SP和NSP细胞的形态有差异,SP细胞的增殖速度快于NSP细胞,NSP细胞的周期阻滞在G1期,提示SP细胞可能在乳腺癌细胞的生长过程中具有重要的作用.

桂皮醛对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S侵袭能力的抑制作用及与miR-27a表达的关系探讨

目的探讨桂皮醛对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S侵袭能力的抑制作用及与其调节MDAMB-435S细胞miR-27a表达的相关性。方法聚碳酸酯膜细胞培养小室(transwell小室)法检测桂皮醛对MDA-MB-435S细胞侵袭能力的影响;脂质体2000转染miR-27a模拟物/抑制物联合实时定量聚合酶链式反应(reaI time-poIymerase chain reaction,Real-time PCR)及transwelI小室模型法探讨miR-27a表达在MDA-MB-435S细胞侵袭中的作用和桂皮醛对MDA-MB-435S细胞miR-27a表达的干预及其与影响细胞侵袭能力的关系。结果桂皮醛作用MDA-MB-435S细胞12 h后,穿过transwell小室的细胞数量均较对照组明显减少(P<0.05);miR-27a模拟物与miR-27a抑制物转染后MDA-MB-435S细胞miR-27a的表达量分别是对照组的962.07倍和40%,经miR-27a抑制物转染后MDA-MB-435S细胞穿过transwell小室的细胞数量显著下降(P<0.05);桂皮醛作用MDA-MB-435S细胞12 h后可下调其miR-27a的表达量(2^(-△△Ct)分别为0.56、0.18和0.18);先经miR-27a模拟物转染预处理后经桂皮醛作用的MDA-MB-435S细胞穿过小室的数量均较未预处理的对照组明显增多(P<0.05)。结论桂皮醛对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞株的侵袭能力具有抑制作用;miR-27a的过表达在MDA-MB-435S细胞的侵袭能力中发挥重要作用;桂皮醛抑制MDA-MB-435S细胞的侵袭能力与下调其miR-27a的表达有关。

芹黄素对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-435S侵袭和增殖能力的影响

透明质酸酶（Hyalase）是一种基质降解酶，它参与了肿瘤的侵袭转移过程。有研究表明，芹黄素可以抑制Hyalase的活性。我们通过建立乳腺癌细胞体外侵袭模型。观察芹黄索对两种乳腺癌细胞株侵袭和增殖能力的影响。

益气活血方对乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的影响

目的:观察益气活血方对乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法观察益气活血方对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞增殖的影响;釆用四甲基偶氮唑蓝法等观察益气活血方对MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞黏附能力的影响;采用Transwell小室模型观察益气活血方对MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞侵袭能力的作用。结果:益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用,呈现时间和质量浓度依赖性(P<0.05)。益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞体外黏附具有抑制作用,当质量浓度为80mg·L-1时,对MDA-MB-435S细胞体外黏附抑制作用呈现时间依赖性(P<0.05);益气活血方对MDA-MB-231细胞体外黏附的抑制作用呈现时间和质量浓度依赖性(P<0.05)。益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞侵袭能力具有抑制作用,呈质量浓度依赖性(P<0.05)。结论:益气活血方可以通过抑制影响乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的增殖、黏附和侵袭,达到抑制乳腺癌转移的作用。

半夏总生物碱对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨半夏总生物碱(total alkaloids from pinellia ternate,TATP)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolil tetracolium,MTT)比色法以及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对MDA-MB-435S细胞株的生长抑制作用。应用单细胞凝胶电泳分析检测TATP导致MDA-MB-435S细胞的DNA损伤情况。结果人乳腺癌细胞MDA-MB-435S经TATP处理后,其体外增殖能力受到明显抑制且与药物剂量、作用时间呈正相关,经TATP作用24、48、72h后的半数抑制浓度分别为:98.37μg/ml、52.16μg/ml、33.63μg/ml。单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)中,TATP组细胞尾DNA含量、尾长及尾动量与对照组有统计学差异(P<0.01),且呈现浓度依赖性。结论在体外培养条件下,TATP能明显抑制MDA-MB-435S细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。

MTT法检测乳腺癌细胞株对化疗药物5-氟脲嘧啶的敏感性

目的探讨四氮唑蓝比色分析法(MTT法)用于指导临床个体化化疗药物选择的实用性,为乳腺癌临床化疗用药提供参考。方法采用MTT法测定乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S对不同浓度的化疗药物5-氟脲嘧啶(5-Fu)的体外敏感性。结果不同浓度的5-Fu对高转移和低转移乳腺癌细胞株的生长均有一定的抑制作用,且抑制率呈剂量依赖性。结论MTT法检测有助于指导临床选择化疗药物剂量,提高化疗效果,减少毒副作用,为乳腺癌临床个体化化疗方案的选择提供客观依据。

岩大戟内酯B诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨岩大戟内酯B对乳腺癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响。方法将不同浓度的岩大戟内酯B作用于MDA-MB-435S细胞,采用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡情况;电镜观察细胞形态。结果随着岩大戟内酯B浓度增加,细胞凋亡率明显增加;电镜显示药物处理后细胞出现核固缩,细胞器空泡变性,出现凋亡小体,甚至坏死。结论岩大戟内酯B可诱导乳腺癌细胞凋亡,为临床开发新药提供理论依据。

乳腺癌细胞中E1AF,MMP-1和MMP-9的表达及其相关性

目的 探讨雌激素受体阳性（ER＋）乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性（ER-）乳腺癌细胞MDA-MB-231及MDA-MB-435s中E1AF,MMP-1和MMP-9表达情况及相关性.方法 应用免疫细胞化学技术检测3种不同乳腺癌细胞中MMP-9的表达,采用RT-PCR方法检测细胞株中E1AF,MMP-1及其mRNA表达.结果 ER（-）乳腺癌细胞MDA-MB-231中E1AF基因、MMP-1及其mRNA的表达水平与MMP-9的表达高于ER（＋）乳腺癌细胞MCF-7和ER（-）乳腺癌细胞MDA-MB-435s.结论 乳腺癌细胞中E1AF的表达与MMP-1,MMP-9的表达存在相关性,E1AF可能是乳腺癌侵袭转移的重要因子.

TUNEL法检测ER^((-))乳癌细胞凋亡和Ki-67表达的研究

目的：探讨雌激素受体阴性乳癌细胞中Ki-67与细胞凋亡之间的关系。 方法：通过1,25(OH)2D3诱发雌激素受体阴性乳癌细胞株MDA-MB-435s凋亡，采用MTT法检测细胞增殖情况，TUNEL法检测细胞凋亡指数，免疫组化法检测Ki-67阳性表达指数，进行相关性分析。结果：在10-8mmol/L 1,25(OH)2D3诱发MDA-MB-435s凋亡过程中，肿瘤细胞凋亡指数与Ki-67阳性表达指数呈负相关。结论：对凋亡指数及Ki-67阳性表达指数的综合分析，可全面反映细胞凋亡和增殖的平衡状态，对于判断肿瘤细胞的增生具有参考价值。

ER阴性乳癌细胞株凋亡过程Cyclin DI表达的研究

目的：应用ＤＮＡ末端标记法探讨激素受体阴性乳癌细胞凋亡和Ｃｙｃｌｉｎ ＤＩ之间的关系。方法：通过１，２５（ＯＨ）２Ｄ３诱发雌激素受体阴性乳癌细胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４３５Ｓ凋亡，采用ＭＴＴ法检测细胞增殖情况，ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡数、免疫组化法检测Ｃｙｃｌｉｎ ＤＩ，进行相关性分析。结果：在１０－８Ｍ１，２５（ＯＨ）２Ｄ３诱发ＭＤＡ－ＭＢ－４３５Ｓ调亡过程中，癌细胞凋亡率与Ｃｙｃｌｉｎ ＤＩ表达呈负相关。结论：Ｃｙｃｌｉｎ ＤＩ的检测可以直接反应雌激素受体阴性乳癌细胞株的凋亡，为临床评价雌激素受体阴性乳癌的治疗效果提供新的指标。

中药癌复康对重症联合免疫缺陷鼠人乳腺癌肺转移及免疫重建的影响

目的探讨中药癌复康对重症联合免疫缺陷(SCID)鼠原位移植人乳腺癌自发性肺转移及免疫重建的影响。方法将40只SCID小鼠随机分为4组,以高转移人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435s)接种于鼠腹部左侧第二乳头下的乳房脂肪垫上建立小鼠人乳腺癌自发性肺转移模型,接种量为0.2 m L/只。接种后,模型对照组给予生理盐水10 m L/(kg·d)灌胃,1次/d;癌复康组给予癌复康3.6g/(kg·d)以生理盐水10 m L稀释灌胃,1次/d;免疫重建组腹腔注射人体外周血淋巴细胞4×107个/只(0.5 m L),并给予生理盐水10 m L/(kg·d)灌胃,1次/d;癌复康+免疫重建组腹腔注射人体外周血淋巴细胞4×107个/只,并予以癌复康3.6 g/(kg·d)以生理盐水10 m L稀释灌胃,1次/d。观察各组肿瘤体积、生长速度、肿瘤转移情况。结果癌复康+免疫重建组成瘤潜伏期明显长于其余3组(P均<0.05),癌复康组和免疫重建组成瘤潜伏期明显长于模型对照组(P<0.05);模型对照组肿瘤生长速度较其余3组快,肿瘤体积大于其余3组(P均<0.05),癌复康组和免疫重建组肿瘤生长速度相近(P>0.05),癌复康+免疫重建组肿瘤生长速度最慢(P均<0.05);癌复康组、免疫重建组、癌复康+免疫重建组乳腺癌肺转移抑制率分别为64.7%,38.4%和84.8%,3组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论中药癌复康能延长人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s接种SCID鼠成瘤潜伏时间,促进SCID鼠的免疫重建,具有一定的抑制肿瘤生长和抗肿瘤转移的作用。

纳米雄黄酸飞品对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响

目的探讨纳米雄黄酸飞品(Acid Cleaning-Realgar Nanoparticles,NRPP)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及对自噬的影响,并初步研究其可能作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40、60、80、100、120μg·mL^(-1))和不同干预时间(12、24、48 h)的NRPP对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDAMB-435S细胞增殖的影响;荧光显微镜观察MDA-MB-435S细胞形态变化;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡现象;透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡(Bcl-2和PARP)、自噬(LC3和p62)及自噬通路相关蛋白的表达水平。结果NRPP对上述3种乳腺癌细胞的增殖均有显著的抑制作用,且呈现一定的浓度和时间依赖性。在荧光显微镜下观察,随着NRPP浓度的增大,细胞数量减少,细胞间隙增大,细胞逐渐皱缩、变圆、脱落,未见凋亡小体。TEM下观察,对照组细胞的细胞器状态良好,NRPP组有明显的自噬体。Western blot结果显示Bcl-2和PARP表达量未发生明显的趋势变化;LC3Ⅱ/Ⅰ表达上调,p62表达下调,并呈一定的浓度和时间依赖性;PI3K/Akt/mTOR自噬通路蛋白表达量未发生明显的趋势变化;COXIV表达下调,并呈浓度依赖性。结论NRPP可抑制3种乳腺癌细胞的增殖,且可能通过线粒体自噬诱导MDA-MB-435S细胞死亡。

检测乳腺癌细胞株对化疗药物5-氟脲嘧啶的敏感性

目的:检测不同乳腺癌细胞株对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性。方法:体外培养乳腺癌低转移细胞株MCF-7和高转移细胞株MDA-MB-435S,并加入不同浓度的5-氟尿嘧啶,MTT法检测这两种细胞株对5-氟尿嘧啶的敏感性。结果:5-氟尿嘧啶对这2种细胞株的细胞生长均具有抑制作用,且抑制作用与给药剂量正相关。结论:应用MTT法可检测乳腺癌细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性,可用于指导临床选择合适的化疗药物,制定治疗方案。

异黏蛋白在乳腺癌细胞中的表达

异黏蛋白（MTDH）作为一个癌基因,可在全身多种肿瘤中过表达[1].MTDH的过表达可能与乳腺癌的耐药和转移有关.本研究旨在测定4种乳腺癌细胞中MTDH的表达水平,探讨MTDH的表达与乳腺癌细胞生物学特性之间的关系.一、材料与方法1.材料：乳腺癌细胞：MDA-MB-231、MCF-7、 MDA-MB-435S、 MCFG/ADR.TransStart Top Green qPCR Supermix,逆转录试剂盒,MTDH鼠抗人单克隆抗体.2.实时定量聚合酶链反应（Realtime PCR）：抽提细胞RNA合成cDNA,进行聚合酶链反应.内参基因为甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）,内参引物和MTDH引物参照文献[2].ABI7500仪器设置为SYBR Green法,计算2-△△Ct,进行统计分析.