丙戊酸钠诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1凋亡的实验研究

为了探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1的生长抑制及诱导凋亡作用,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测VPA对细胞生长的抑制作用;采用光学显微镜和电子显微镜观察VPA作用后细胞形态的变化;应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度VPA作用后细胞凋亡的比例和细胞周期分布的变化。结果显示:VPA对MUTZ-1细胞的生长抑制作用呈现时间和剂量依赖性;经4mmol/LVPA处理MUTZ-1细胞72小时后,细胞呈现典型的凋亡形态特征,光学显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体;透射电子显微镜下可见凋亡细胞核染色质边集、胞浆浓缩、密度增加,胞浆内大小不规则的染色质团块;流式细胞术结果表明,细胞凋亡率随着VPA浓度的增加而逐步增高,G0/G1期细胞比例随着VPA浓度的增加而逐渐增多,S期细胞比例逐渐减低,细胞被阻滞在G0/G1期。结论:VPA通过G0/G1期阻滞诱导MUTZ-1细胞凋亡,从而抑制MUTZ-1细胞增殖。

维生素K_2诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究维生素K2(VK2)诱导人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制,采用流式细胞术Annexin-VFITC/PI双染分析细胞凋亡率和PI染色分析细胞周期的改变,用RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达,用发光比色法检测caspase-3活性。研究结果显示:细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长逐渐增高并呈明显的时间浓度依赖性(P<0.05),且随着药物浓度的增加和作用时间的延长S期和G2期细胞逐渐减少(P<0.05),G0/G1期细胞逐渐增多(P<0.01),细胞被阻滞在G0/G1期,并且在G0/G1期前出现明显的亚G1峰,即凋亡峰;抗凋亡基因bcl-2、survivin的表达随着VK2浓度的增高明显下调(P<0.05),而促凋亡基因bax表达无明显变化(P>0.05);caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论:VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MUTZ-1细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因bcl-2、survivin在细胞凋亡过程中也起重要作用。

2-甲氧基雌二醇对MUTZ-1细胞内活性氧和线粒体膜电位的影响

目的探讨在2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome，MDS）MUTZ-1细胞凋亡中活性氧（ROS）和线粒体膜电位（△ψm）的作用及其作用机制。方法MUTZ-1细胞与不同浓度2-ME共育，FCM分析荧光探针DCFH-DA标记后细胞内ROS和荧光探针JC-1标记后细胞△ψm的变化。加入抗氧化剂过氧化氢酶（CAT）后，MUTZ-1细胞内相应指标的变化。结果经1-4μmol／L 2-ME作用MUTZ-1细胞12h，与对照组相比，细胞内ROS升高（F=102．56，P〈0.05）和细胞△ψm下调（F=108．02，P〈0．05），且MUTZ-1细胞△ψm下降与细胞内ROS升高成正相关（r=0．981，P=0．019）。CAT能够明显抑制2-ME诱导MUTZ-1细胞内ROS升高（F=68．26，P〈0．01）和细胞△ψm下调（F=55．29，P〈0.01）。结论2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡，可能与2-ME刺激细胞内ROS积聚过多、损伤线粒体结构的完整性以及降低细胞线粒体膜电位有关。

丙戊酸钠协同阿霉素抑制骨髓增生异常综合征细胞株增殖并诱导其凋亡

本研究探讨丙戊酸钠(SVPA)协同阿霉素(ADM)抑制骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1增殖并诱导其凋亡的作用。采用细胞形态学方法观察小剂量SVPA和ADM处理后细胞形态的改变,应用(MTT)比色法检测SVPA及ADM对细胞生长的抑制作用,流式细胞术分析细胞凋亡。结果表明:不同浓度的ADM(0.039μg/ml、0·078μg/ml、0.156μg/ml、0.312μg/ml和0.4μg/ml)与0.25mmol/LSVPA联合作用于MUTZ-1细胞72小时后,细胞抑制率分别为(23.46±1.12)%、(49.87±0.84)%、(52.37±1.05)%、(78.43±4.34)%和(82.47±1·04)%,明显高于单用ADM时的(5.08±0.79)%、(12.32±2.39)%、(23.65±1.34)%、(43.33±2.38)%和(47.85±1·46)%(p<0.05)。单用0.25mmol/LSVPA时对细胞生长无影响(p>0.05)。SVPA联合ADM作用细胞株72小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态学特征;SVPA和ADM联合作用后细胞的凋亡率比单独使用ADM明显增加,并呈浓度依赖性,与对照组相比有显著的统计学意义,其中以0.078μg/ml浓度ADM为最佳抑制浓度。结论:小剂量的SVPA能增敏ADM诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1发生凋亡。

丙戊酸钠协同阿霉素抑制MUTZ-1细胞株增效作用的研究

目的:探讨丙戊酸钠协同阿霉素对MUTZ-1细胞株生长的抑制作用及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察药物对细胞生长的影响;发光比色法检测Caspase-3的活性。结果:小剂量丙戊酸钠可协同阿霉素抑制MUTZ-1细胞株生长,细胞生长抑制率在两药联合作用后比单独使用阿霉素明显增加,有剂量依赖性,与对照组相比有显著统计学意义。单药使用阿霉素时细胞的caspase-3活性上升,两药联合后caspase-3活性上升更明显。结论:小剂量的丙戊酸钠能增敏阿霉素诱导MUTZ-1细胞株发生凋亡,作用机制可能是通过上调caspase-3的活性来完成的。