散发性结直肠腺癌微卫星状态分析及其与Fascin-1蛋白表达的相关性

目的检测Fascin-1蛋白及DNA错配修复蛋白(mismatch repair proteins,MMRs)在散发性结直肠腺癌中的表达,分析Fascin-1蛋白在散发性结直肠腺癌侵袭转移过程中的作用及其与微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)的相关性。方法检测250例散发性结直肠腺癌及癌旁正常组织中4种DNA MMRs的缺失表达及Fascin-1蛋白的表达,探讨MMRs表达情况及Fascin-1蛋白的表达与散发性结直肠腺癌临床病理特征的关系,并对Fascin-1蛋白与MMRs表达情况进行相关性分析。结果Fascin-1蛋白在癌旁正常结直肠黏膜上皮几乎不表达,在散发性结直肠腺癌中85例呈高表达,高表达率为(34%,85/250)。250例标本中,31例为MSI-H,32例为MSI-L,187例为MSS,MSI-H发生率为12.4%。Fascin-1蛋白高表达与淋巴结转移及Dukes分期相关(P<0.05);MSI-H与年龄、性别无关,而与肿瘤分化程度、淋巴结转移及Dukes分期相关(P<0.05)。MSS/MSI-L与Fascin-1蛋白呈正相关(r_(s)=0.142,P<0.05)。结论与MSI-H患者相比,MSS/MSI-L散发性结直肠腺癌患者更易出现Fascin-1蛋白高表达,提示两者可能协同参与结直肠腺癌的侵袭转移,Fascin-1蛋白有望成为MSS/MSI-L结直肠腺癌治疗的潜在新型靶点。

胃癌MSI、hMLH1基因甲基化及其蛋白表达研究

目的:通过研究散发性胃癌中错配修复基因hMLH1启动子区5’CpG岛甲基化及蛋白表达、微卫星不稳定性(MSI)发生的情况及各指标之间的关系,探讨hMLH1基因、MSI在胃癌发生过程中的作用,揭示胃癌发生的分子机制。方法:取标本55例,其中胃癌41例,正常组织(包括正常及浅表性胃炎)14例。酚/氯仿法提取DNA,PCR扩增-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-硝酸银染法检测BAT-26、D2S123两个位点的MSI,酶切产物特异性扩增法检测hMLH1基因启动子区5’CpG岛甲基化异常情况,免疫组化SP法检测hMLH1蛋白的表达。结果:胃癌组MSI发生率为51.2%(21/41),显著高于正常组(P<0.05)。胃癌组hMLH1基因启动子区5’CpG岛甲基化发生率为41.5%,其中88.5%表现为蛋白表达缺失或降低,正常组织中未发现甲基化。胃癌组MSI(+)中,甲基化发生率81.0%。结论:hMLH1基因甲基化是导致胃癌组织出现MSI的重要因素,MSI在散发性胃癌发生、发展过程中发挥一定作用。由于错配修复基因甲基化而丧失修复功能,引起MSI的产生,促进肿瘤的发生。对胃癌组织中hMLH1基因、MSI的深入研究,可以为肿瘤早期发现、早期诊断提供信息。

龙眼MEE70/MSI1基因DlMEE70-1a及其可变剪接体DlMEE70-1b的分离及其在体胚发生过程中的表达分析

MEE70/MSI1是拟南芥母性效应胚胎滞育基因,在植物胚胎发生过程中具有重要作用。采用RACE技术获得龙眼MEE70-1a(登录号KC492117)及其可变剪接体MEE70-1b(登录号KC492118)c DNA序列,克隆MSI1g DNA(登录号KC492126)序列。生物信息学分析预测Dl MEE70-1a和Dl MEE70-1b均为亲水不稳定的酸性蛋白,主要定位于过氧化物酶体和细胞核,各含有4和1个WD-repeat结构域。MEE70-1a和MEE70-1b在体细胞胚胎发生过程实时荧光定量PCR分析结果表明,Dl MEE70-1a和Dl MEE70-1b表达趋势以心形胚为界,除了Dl MEE70-1b的不完全胚型紧实结构(ICp EC)到球形胚(GE)阶段之间,都表现出先降后升的趋势;胚性愈伤组织(EC)时期两者表达量一致且最高;心形胚(HE)时期,两者表达量一致且最低,另Dl MEE70-1b在不完全胚性紧实结构(ICp EC)表达量与心形胚基本一致。这2个表达剂量是胚胎发生的重要保障,心形胚(HE)后,Dl MEE70-1a被再次激活转录促进胚胎正常发育。从Dl MEE70-1a和Dl MEE70-1b的理化性质、WD重复结构域数量、亚细胞定位以及表达量和趋势,可以推测Dl MEE70-1a需要Dl MEE70-1b的协同来调控龙眼胚胎发育。

Msi1 siRNA对人结肠癌SW-480细胞增殖的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人结肠癌SW-480细胞增殖的影响。方法针对Msi1 mRNA序列设计合成siRNA,转染SW-480细胞;采用RT-PCR法检测Msi1基因表达;MTT比色实验、群体倍增时间及平皿克隆形成实验分析Msi1siRNA对人结肠癌SW-480细胞的生长抑制效应,流式细胞术检测Msi1 siRNA对其细胞周期的影响。结果 Msi1 siRNA能有效抑制人结肠癌SW-480细胞中Msi1基因的表达;Msi1 siRNA转染SW-480细胞24、48、72 h后,与其它各组比较,其吸光度值明显降低,Msi1 siRNA组SW-480细胞生长、增殖速度明显减缓(P<0.05);空白对照组的SW-480细胞群体倍增时间为22.15h,而Msi1 siRNA处理后的细胞,群体倍增时间延长至37.76 h(P<0.05);平皿克隆形成实验结果发现,Msi1 siRNA处理后的细胞与其它各组相比,细胞生长明显减慢。流式细胞术表明Msi1 siRNA可导致SW-480细胞G0/G1期阻滞,S期细胞减少。结论沉默Msi1基因对人结肠癌SW-480细胞增殖有负性调节作用。

RNA干扰沉默MSI1表达对人脑胶质瘤细胞化疗敏感度的影响

目的探讨RNA干扰沉默MSI1表达对人脑胶质瘤细胞化疗药物敏感度的影响。方法构建针对MSI1 mRNA的小分子RNA干扰(siRNA)重组质粒p SIREN-MSI1,转染人脑胶质瘤U-87MG细胞;Western blot检测U-87MG细胞内MSI1蛋白的表达;CCK-8法观察U-87MG细胞对化疗药物替莫唑胺(TMZ)敏感度的改变;流式细胞仪(FCM)检测p SIREN-MSI1转染后对U-87MG细胞凋亡的影响。结果成功构建了重组质粒p SIREN-MSI1,并成功转染U-87MG细胞;Western blot结果显示p SIREN-MSI1抑制U-87MG细胞中MSI1蛋白的表达(P<0.01);CCK-8结果显示在替莫唑胺作用下,pSIREN-MSI1组U-87MG细胞的存活率明显下降(P<0.01);FCM结果表明pSIREN-MSI1转染后明显提高U-87MG细胞的凋亡率(P<0.01)。结论 MSI1 si RNA能特异性抑制人脑胶质瘤细胞U-87MG细胞中MSI1的表达,增强人脑胶质瘤U-87MG细胞对化疗药物的敏感度,并促进细胞的凋亡。

Msi1 siRNA对人结肠癌SW-480细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人结肠癌SW-480细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法设计合成特异性Msi1 siRNA序列,转染人结肠癌SW-480细胞;利用Western blotting检测Msi1和MMP-9蛋白的表达;细胞免疫化学检测MMP-9蛋白的表达;划痕实验观察Msi1 siRNA对细胞迁移能力的影响;Transwell实验观察其对细胞侵袭能力的影响。结果 Msi1 siRNA能有效抑制人结肠癌SW-480细胞中Msi1蛋白的表达;并且使其迁移和侵袭能力明显下降,和对照组相比有统计学意义(P<0.05),同时MMP-9在蛋白表达水平明显降低。结论沉默Msi1基因后可以显著抑制人结肠癌SW-480细胞的迁移和侵袭能力,MMP-9基因表达下降可能参与这一过程。

MSI、PD-L1在NSCLC患者中的表达及其与预后的相关性

目的探讨微卫星不稳定性(MSI)、程序性死亡配体-1(PD-L1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达水平及其预后相关性。方法收集2010年6月至2014年12月在本院收集的86例NSCLC患者手术切除癌组织及对应距病灶5 cm以上癌旁正常组织。利用PCR技术检测172例样品中BAT-25、BAT-26、D2S123、D5S346、D17S250五个位点的MSI,判断MSI表达情况。采用免疫组化法检测PD-L1的水平。对MSI、PD-L1与临床病理因素的关系进行分析,所有患者根据病情给予手术切除联合抗PD-L1等相应治疗,对影响NSCLC患者5年生存率的独立因素进行分析,观察MSI、PD-L1表达对患者5年生存率的影响。结果非小细胞癌组织中MSI表达率为63.95%,明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。PD-L1表达率明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。PD-L1表达与肿瘤分化程度、淋巴是否转移、TNM分期有关(P<0.05);MSI状态与肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、TNM分期有关(P<0.05)。MSS及MSI-L患者术后生存时间明显低于MSI-H患者,差异有统计学意义(P<0.05)。PD-L1阳性患者术后生存时间明显低于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示PD-L1阳性(OR=3.888)、淋巴结转移(OR=3.823)、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=3.380)为影响患者5年生存率独立危险因素,MSI-H阳性为NSCLC患者5年生存率的保护因素(OR=0.289)(P<0.05)。结论 MSI和PD-L1的表达与NSCLC临床病理特征及预后密切相关,可作为NSCLC预后预测的重要指标。

Msi1基因沉默对人肝癌HepG2细胞的影响

目的:探讨siRNA沉默Msi1基因表达后,人肝癌HepG2细胞的增殖与凋亡的情况。方法:设计合成针对Msi1 mRNA序列的siRNA多条序列,分别转染人肝癌HepG2细胞。使用RT–PCR方法检测各组细胞Msi1基因表达情况;Western blot法检测survivin蛋白、caspase3蛋白表达情况;MTT法、平皿克隆实验检测HepG2细胞增殖情况;流式细胞术检测各组HepG2细胞凋亡情况。结果:(1)RT-PCR结果:转染后24 h后,序列a,b,c转染效率分别为65%,64%及62%。其抑制率分别是Msi1 siRNAa(68%)、Msi1 siRNAb(56%)、Msi1 siRNAc(35%)。(2)流式细胞术检测各组细胞凋亡:空白组、阴性组、脂质体组、Msi1 siRNAa组凋亡率分别为(4.14±0.26)%、(4.51±0.78)%、(4.19±1.21)%,(16.8±0.26)%,Msi1 siRNAa组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)Msi1 siRNAa最能有效抑制肝癌HepG2细胞中Msi1表达,与空白对照组比较,Msi1 siRNAa组HepG2细胞生长、增殖速度明显减缓(P<0.05);survivin蛋白表达水平显著下调(P<0.05),而caspase3蛋白表达水平上调(P<0.05);Msi1 siRNAa组凋亡率增高(P<0.05)。结论:沉默Msi1可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡。

siRNA干扰Msi1对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移的影响。方法针对Msi1 mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞。RT-PCR法检测Msi1基因表达;Westernblot检测survivin、caspase3及MMP-9表达;MTT法检测SGC-7901细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果Msi1 siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中Msi1的表达,与空白对照组比较,Msi1 siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P<0.05);survivin、MMP9蛋白表达水平显著下调(P<0.05),而caspase3蛋白表达水平上调(P<0.05);Msi1 siRNA组凋亡率增高。结论沉默Msi1对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移有负性调节作用。

Msi1基因在结肠癌中的临床意义及生物功能研究

目的目前Msi1(Musashi1)在结肠癌中的临床意义及生物功能仍不十分明确,因此全面了解Msi1在结肠癌中的表达及作用,具有重要的临床意义和理论意义。文章旨在探讨Msi1基因在结肠癌中的临床意义,并运用慢病毒干扰结肠癌SW480细胞Msi1基因表达,观察其在结肠癌细胞中的生物功能。方法收集2013年10月至2014年5月河北医科大学第四医院外二科手术切除的20份结肠癌标本。每份标本分别取癌组织及癌旁肠壁组织。Western blot检测Msi1蛋白在结肠癌组织及癌旁组织中的表达,分析Msi1表达与结肠癌患者临床特征的关系。通过慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的SW480细胞株,将包含有shMsi1-1、shMsi1-2干扰序列慢病毒分别转染该细胞,将结肠癌细胞分为空白组(未做任何处理)、shMsi1-1组(转染shMsi1-1)和shMsi1-2组(转染shMsi1-2)。Western blot检测2种慢病毒沉默效果。CCK-8实验检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果结肠癌患者癌组织中Msi1蛋白相对表达量(0.863±0.208)明显高于癌旁组织(0.272±0.078),差异有统计学意义(P<0.001)。shMsi1-1组、shMsi1-2组Msi1蛋白相对表达量(0.299±0.111、0.207±0.087)较空白组(1.000±0.149)明显降低(P<0.001)。shMsi1-1组、shMsi1-2组在48 h和72 h的增殖速度均明显低于空白组(P<0.01)。与空白组细胞形成集落数(296.33±64.04)比较,shMsi1-1组(92.00±43.31)、shMsi1-2组(78.67±32.87)明显降低(P<0.01)。与空白组细胞凋亡率[(4.01±0.26)%]比较,shMsi1-1组、shMsi1-2组[(10.22±1.04)%、(10.87±1.27)%]显著增高(P<0.001)。结论干扰Msi1基因表达可抑制结肠癌SW480细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,为临床治疗结肠癌提供了一个新的干预靶点。

肺腺癌中MSI、PD-L1的表达与临床病理特征及预后的相关性

目的探讨浸润性肺腺癌中MSI、PD-L1表达与临床病理特征及预后的相关性。方法采用免疫组化EnVision法检测292例浸润性肺腺癌中MSI及PD-L1表达,应用单因素、多因素进行PFS、OS生存分析。结果MSI阳性常见于女性(P=0.011)、临床T分期早期(P=0.009)、PD-L1阴性(P=0.013)的肺腺癌。临床T分期早期(P=0.012)是肿瘤细胞MSI-H阳性的独立相关因素。PD-L1阳性多出现于临床T分期晚期(P=0.015)。MSI阳性组平均生存时间和中位生存时间均比阴性组长,MSI-H组平均生存时间和中位生存时间均比MSI-L+MSS组长。PD-L1表达与预后呈正相关(PFS:P=0.004;OS:P=0.005);PD-L1表达是肺腺癌患者的独立预后因子(PFS:P=0.028;OS:P=0.049)。结论肺腺癌中MSI及MSI-H表达均与临床T分期早期有相关性,提示MSI、MSI-H可作为肺腺癌发生过程中的早期分子事件,PD-L1阳性提示患者预后较好,MSI及MSI-H均与PD-L1阴性有相关性。

金钗石斛DnMSI1-like基因的克隆和表达分析

MSIL(MSI1-like)是一类在真核生物中保守的蛋白质,在动物和植物的发育过程中具有多种的功能.本研究从金钗石斛花芽中分离了一个MSIL蛋白的c DNA序列,长度为1 640 bp,含有一个长度为1 206 bp的开放阅读框;预测其编码的蛋白质在序列、结构域组织和空间结构上均与拟南芥At MSI1蛋白相似,故命名为Dn MSI1-like.Dn MSI1-like基因的表达具有明显的组织差异性,在金钗石斛的根、花和腋芽中表达较高,但在叶和假鳞茎中表达较低;低温处理时,花芽中Dn MSI1-like的表达急剧升高.研究结果为深入探索金钗石斛的生长发育如低温相关的开花调控机制提供基础.

siRNA沉默Msi1表达对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法针对Msi1基因mRNA序列设计合成siRNA,转染人宫颈癌Hela细胞;实验分Msi1 siRNA组、空白对照组、脂质体组及阴性对照组;通过RT-PCR法检测Msi1基因在m RNA水平的表达;分别利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色试验、群体倍增时间及平皿克隆实验分析干扰Msi1基因对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制效应;通过细胞划痕实验观察干扰Msi1对细胞迁移能力的影响;利用Transwell小室实验观察干扰Msi1对细胞侵袭能力的影响。结果 Msi1 siRNA能有效抑制人宫颈癌Hela细胞中Msi1基因的表达;Msi1 siRNA转染Hela细胞24、48、72h后,与其他各组比较,Msi1 siRNA组Hela细胞的生长、增殖速度明显减缓(均P<0.05)。空白对照组Hela细胞群体倍增时间为(20.18±0.01)h,而干扰Msi1基因处理后的Hela细胞,群体倍增时间延长至(35.68±0.04)h(P<0.05);同时平皿克隆实验结果发现,Msi1 siRNA处理后的Hela细胞与其他各组相比,Hela细胞生长明显减慢(均P<0.05);细胞划痕实验和Transwell小室实验分别显示处理后的Hela细胞其迁移和侵袭能力均明显下降,与其他各组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭有负性调节作用。

MSI、PD-L1及IL-6在结直肠腺癌中的表达及意义

目的:通过研究微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)、程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)及白介素6(interleukin 6,IL-6)在人结直肠腺癌组织中的表达,探讨三者之间的相关性,分析其与结直肠腺癌临床病理学参数间的关系。方法:用免疫组化法对312例结直肠腺癌组织及30例癌旁组织中错配修复基因(Mismatch repair genes,MMRs)、PD-L1及IL-6的表达进行检测,分析MSI、PD-L1、IL-6三者之间的相关性及各指标与结直肠腺癌临床病理学参数间关系。结果:结直肠腺癌组织中,MSI表达率为16.3%,微卫星稳定(Microsatellite stability,MSS)表达率为83.7%。PD-L1及IL-6在结直肠腺癌组织中的阳性表达率与癌旁组织相比均明显上调(P<0.01)。结直肠腺癌组织中,MSI与PD-L1蛋白表达呈正相关(P<0.01),MSI与IL-6蛋白、PD-L1与IL-6蛋白表达均呈负相关(P<0.01)。MSI表达与患者低龄(≤60岁)、升结肠、低分化、无淋巴结转移相关,而PD-L1、IL-6表达仅与肿瘤分化程度相关。结论:结直肠腺癌组织中PD-L1和IL-6的表达均明显上调,均与结直肠腺癌的分化程度相关,可能作为结直肠腺癌恶性程度的评价指标及临床治疗的靶点;PD-L1表达增高与MSI状态及IL-6表达下调相关,通过检测MSI及IL-6表达情况,可能预测抗PD-L1免疫治疗的有效率,通过抑制肿瘤中IL-6的表达可能提高抗PD-L1治疗的有效率;MSI更多表达于低年龄、升结肠、分化差及无淋巴结转移患者,有利于免疫治疗的初步分流。

沉默Msi1对食管鳞癌TE7细胞CCL2分泌及单核细胞趋化的影响

目的:研究沉默Msi1对食管鳞癌TE7细胞CCL2分泌及单核细胞趋化的影响。方法:利用脂质体转染法将靶向Msi1的siRNA(siMsi1#1、#2)转入TE7细胞中,以转染阴性对照siRNA(siNC)的TE7细胞作为对照,采用CBA法检测细胞培养上清液中13种趋化因子的改变,ELISA法检测细胞培养上清中CCL2质量浓度,采用Transwell实验观察细胞培养上清液对单核细胞趋化的影响。结果:与对照组相比,siMsi1#1组TE7细胞Msi1 mRNA的表达降低(P <0. 05),细胞培养上清液中CCL2的质量浓度降低(P <0. 05),趋化的单核细胞数量减少(P <0. 05)。结论:Msi1基因可能通过调控CCL2的分泌来影响食管鳞癌TE7细胞趋化单核细胞的能力。

Msi1过表达对宫颈癌细胞增殖及干性维持的影响及其机制

目的探讨Msi1通过Wnt/β-catenin通路促进宫颈癌细胞增殖及干细胞样特性的作用机制。方法取制备成功的Msi1稳定过表达的SiHa、HeLa细胞株及相应的对照细胞株,其中Msi1稳定过表达的SiHa细胞及其对照细胞分别命名为SiHa-Msi1组、SiHa-EGFP组,Msi1稳定过表达的HeLa细胞及其对照细胞分别命名为HeLa-Msi1组、HeLa-EGFP组。采用裸鼠成瘤检测SiHa-Msi1组、HeLa-Msi1组及其相应对照组体内肿瘤形成能力;细胞计数、软琼脂克隆形成实验检测SiHa-Msi1组、HeLa-Msi1组及相应对照组细胞的体外增殖能力;肿瘤细胞成球及连续成球实验检测SiHa-Msi1组、HeLa-Msi1组及相应对照组细胞的肿瘤干细胞样特性;在SiHa-Msi1组、HeLa-Msi1组及相应对照组细胞中,采用报告基因分析(TOP-Flash/FOP-Flash)检测Wnt/β-catenin通路活性的变化,采用real-time PCR检测干细胞相关因子Klf4、Sox2、Oct4、Aldh的表达,采用Western blot检测Wnt信号通路中的β-catenin、SOX2蛋白的表达。结果与相应对照组相比,SiHa-Msi1组和HeLa-Msi1组体内形成肿瘤体积和质量显著增加(P<0.05),体外细胞增殖数量、软琼脂形成的单克隆数量均显著增加(P<0.05),肿瘤细胞连续成球后成球数目及直径均显著增加(P<0.05);SiHa-Msi1组、HeLa-Msi1组Wnt通路活性显著增加(P<0.05),干细胞相关因子Sox2、Oct4、Aldh的RNA表达水平显著上调(P<0.05),Wnt通路中的β-catenin和SOX2蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论Msi1过表达促进了宫颈癌细胞增殖并维持其干细胞样特性,可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路,上调SOX2在宫颈癌细胞中的表达,从而发挥了促进宫颈癌进展的作用。

Musashi1正调控肝细胞癌细胞的生长并促进其增殖

目的 Musashi1(MSI1)属于RNA结合蛋白(RBP)家族,可特异性地结合mRNA并对蛋白质的翻译起激活或抑制作用,但它在肝细胞癌(HCC)中的功能还未被深入探究。本课题主要探讨MSI1在HCC细胞生长及增殖中的作用及机制。方法构建MSI1过表达或敲除细胞系。采用免疫组化和Western blot技术检测MSI1在HCC组织中的表达。采用MTT、流式等方法探讨过表达或沉默MSI1对HCC细胞增殖、细胞活力及细胞周期分布的影响,同时检测细胞内PCNA、Cyclin D1以及Wnt/β-catenin通路关键分子APC和β-catenin的表达。结果 MSI1在HCC组织中的表达比非肿瘤的癌旁组织高。与对照细胞相比,HepG2细胞过表达MSI1不仅显著促进了其生长(7 d时的MTT值从0.52±0.12大幅增加至1.01±0.14,P<0.01),且处于G0/G1期的细胞比率也从(58.42±3.18)%降至(40.67±1.22)%,而S期细胞比率则从(28.51±1.93)%增加至(40.06±1.92)%(P<0.01)。与此同时,细胞PCNA和Cyclin D1蛋白的表达明显上调。反之,敲除MSI1使Huh7细胞的生长显著受抑,更多细胞停滞于G0/G1期(G0/G1)期细胞比率从(43.83±1.57)%增加至(62.84±1.22)%(P<0.01),同时细胞PCNA和Cyclin D1的表达则显著下调。MSI1的过表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路分子APC但增加β-catenin的表达,反之MSI1的敲低却可以增加细胞内APC而降低β-catenin的表达。结论 MSI1可以通过正调控HCC细胞的生长及细胞周期的进程而加速HCC病程的进展,其作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。

MSI结直肠癌的研究进展

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,随着生活水平的提高以及饮食习惯的西化,我国结直肠癌的发病率和死亡率均有上升趋势。结直肠癌的发生发展是一个多步骤、多基因参与的过程,目前认为染色体不稳定(Chromosomal instability,CIN)和微卫星不稳定(Microsatellite instability,MSI)是其发生的主要基因途径,本文就MSI结直肠癌在临床病理及分子特征方面的研究进展进行综述。

中国人原发性胆囊肿瘤nm23H1基因遗传不稳定性的研究

采用石蜡包埋组织抽提DNA,PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP),常规银染,Envision免疫组织化学和Leica-Qwin计算机图像分析等方法,研究人类17号染色体D17S396位点微卫星不稳定性(microsatelliteinstablility,MSI)和杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH),对胆囊肿瘤nm23H1蛋白表达的影响,阐明nm23H1基因遗传不稳定性与胆囊肿瘤进展的关系,为揭示nm23H1基因与肿瘤发生和转移机理提供实验依据。在本实验中,原发性胆囊癌D17S396位点遗传不稳定发生率为42.55%,明显高于良性胆囊肿瘤的13.04%,而在胆囊炎组织中,未见该位点遗传不稳定的发生;其中,LOH的发生率随组织恶性程度的增高而增加(P<0.05)。在胆囊癌中,LOH和MSI发生率与肿瘤组织分化程度具有显著差异(P<0.05);LOH的发生率,在肝脏浸润和淋巴转移组高于无肝脏浸润和无淋巴转移组,在NevinⅣ+Ⅴ期高于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P<0.01);而MSI发生率则相反。nm23H1蛋白阳性率在胆囊癌、胆囊良性肿瘤和炎症组织中差异显著(P<0.05);在胆囊癌中,淋巴转移组低于无淋巴转移组(P<0.01);NevinⅣ+Ⅴ期低于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ期(P<0.05)。此外,计算机图像定量分析显示,在各临床病理参数影响下,nm23H1蛋白的表达强度没有差异。在胆囊癌中,LOH阳性组中nm23H1蛋白阳性率显著低于LOH阴性组,两者差异显著(P<0.05)。实验结果提示,nm23H1基因的遗传不稳定性可能是胆囊肿瘤发生、发展的一个重要机制。nm23H1基因的MSI和LOH,通过相互独立的途径调控胆囊癌的发生和转移,MSI是胆囊癌早期分子指标,LOH可作为胆囊组织恶变的判断指标,可抑制胆囊癌局部nm23H1蛋白的表达,并赋予胆囊癌高淋巴结转移、低预后的特性。提高胆囊癌局部nm23H1蛋白的表达,可减缓肿瘤的浸润转移并提高预后率。

肺鳞癌组织中hMLH1、PCNA、P53及P21的表达及其与微卫星不稳定性的相关性

目的:探讨肺鳞癌组织中hMLH1、PCNA、P53及P21的表达及其与癌组织微卫星不稳定性(MSI)之间的关系。方法:采用免疫组化SP法检测上述各指标在18例MSI阳性和12例MSI阴性的肺鳞癌组织中的表达。结果:在肺鳞癌组织中MSI阳性组的hMLH1的阳性表达率明显低于MSI阴性组(P<0.05);MSI阳性组PCNA指数明显低于MSI阴性组(P<0.05);MSI阳性组P53及P21蛋白的阳性表达率明显高于MSI阴性组。结论:肺鳞癌hMLH1表达、PCNA标记指数与癌组织的MSI呈负相关,而P53、P21表达则与MSI呈正相关。