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鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究 被引量:1
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作者 赵雪丽 闫若潜 +8 位作者 王华俊 王淑娟 马震原 谢彩华 柴茂 杨海波 王翠 刘影 王东方 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期165-173,共9页
建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性... 建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 rep基因 猪圆环病毒3型 cap基因 双重TaqMan mgb FQ-PCR
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深中通道沉管隧道最终接头MGB滑轨摩擦系数试验研究 被引量:1
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作者 韩涛 刑长利 +2 位作者 何平 吕迎雪 朱岭 《中国港湾建设》 2024年第2期44-47,共4页
深中通道沉管隧道最终接头采用了水下推出式对接方式,推出过程中采用MGB滑轨作为底部滑行系统,为分析结构受力,建立了与施工现场荷载相同的试验结构,研究了深中通道沉管隧道最终接头MGB滑轨与防腐涂层在不同施工荷载和润滑状态下的摩擦... 深中通道沉管隧道最终接头采用了水下推出式对接方式,推出过程中采用MGB滑轨作为底部滑行系统,为分析结构受力,建立了与施工现场荷载相同的试验结构,研究了深中通道沉管隧道最终接头MGB滑轨与防腐涂层在不同施工荷载和润滑状态下的摩擦系数,并与厂家提供的摩擦系数进行了对比。研究结果表明:MGB材料的摩擦系数随着荷载的增大而减小,干摩擦情况下的静摩擦系数范围为0.181~0.266,滑动摩擦系数范围为0.150~0.226,在水润滑条件下摩擦系数小于干摩擦,摩擦系数与接触界面有关,工程中建议根据实际荷载和摩擦界面情况对摩擦系数进行测试。 展开更多
关键词 深中通道 最终接头 摩擦系数 mgb 滑轨
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猪繁殖与呼吸综合征病毒2型TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立
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作者 徐之恒 孙少辉 +8 位作者 董友富 唐伟明 徐孝宙 邢军 李豪 孙刘妹 万进 王聪 张振东 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期84-88,共5页
为了准确、特异、高效地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(PRRSV2),本研究根据GenBank上登录的PRRSV2不同谱系流行毒株的ORF6基因序列,选取保守区域设计合成了1对特异性检测引物和1条MGB探针,经优化退火温度、引物和探针比例等反应条件及... 为了准确、特异、高效地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(PRRSV2),本研究根据GenBank上登录的PRRSV2不同谱系流行毒株的ORF6基因序列,选取保守区域设计合成了1对特异性检测引物和1条MGB探针,经优化退火温度、引物和探针比例等反应条件及敏感性、特异性、重复性试验,建立了检测PRRSV2的TaqMan MGB荧光定量PCR方法。结果:以猪繁殖与呼吸综合征病毒1型(PRRSV1)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪细小病毒(PPV)等阳性核酸为模板,均无扩增;对标准质粒的最低检测下限为1×10^(1)copies/μL,建立的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.994;稳定性和重复性好,批内和批间变异系数均小于1.78%。应用该方法对保留的30份临床阳性样品进行检测,结果阳性100%,Ct值在22~36间。综上,本研究建立的TaqMan MGB荧光定量PCR方法可用于临床和实验室中PRRSV2的快速检测,为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供了技术支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF6基因 TaqMan mgb qPCR
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Selection of Fe as a barrier for manufacturing low-cost MgB2 multifilament wires-Advanced microscopy study between Fe and B reaction
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作者 Hao Liang Dipak Patel +7 位作者 Ziming Wang Akiyoshi Matsumoto Matt Rindfleisch Micheal Tomsic Richard Taylor Fang Liu Yusuke Yamauchi Md.Shahriar A Hossain 《Journal of Magnesium and Alloys》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第7期2783-2792,共10页
The high cost of using the niobium(Nb)barrier for manufacturing magnesium diboride(MgB2)mono-and multi-filamentary wires for large-scale applications has become one of the barriers to replacing current commercial niob... The high cost of using the niobium(Nb)barrier for manufacturing magnesium diboride(MgB2)mono-and multi-filamentary wires for large-scale applications has become one of the barriers to replacing current commercial niobium-titanium superconductors.The potential of replacing the Nb barrier with a low-cost iron(Fe)barrier for multifilament MgB2 superconducting wires is investigated in this manuscript.Therefore,MgB2 wires with Fe barrier sintered with different temperatures are studied(from 650°C to 900°C for 1 h)to investigate the non-superconducting reaction phase of Fe-B.Their superconducting performance including engineering critical current density(Je)and n-value are tested at 4.2 K in various external magnetic fields.The best sample sintered at 650°C for 1 h has achieved a Je value of 3.64×10^(4) A cm^(−2) and an n-value of 61 in 2 T magnetic field due to the reduced formation of Fe2B,better grain connectivity and homogenous microstructure.For microstructural analysis,the focused ion beam(FIB)is utilised for the first time to acquire three-dimensional microstructures and elemental mappings of the interface between the Fe barrier and MgB2 core of different wires.The results have shown that if the sintering temperature can be controlled properly,the Je and n-value of the wire are still acceptable for magnet applications.The formation of Fe2B is identified along the edge of MgB2,as the temperature increases,the content of Fe2B also increases which causes the degradation in the performance of wires. 展开更多
关键词 Superconducting wires mgb2 MRI magnet Engineering critical current density Fe2B
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基于TaqMan MGB探针的大豆北方茎溃疡病菌快速检测
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作者 李雪莲 于洪娟 +1 位作者 朱小琼 段维军 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期317-325,共9页
为准确快速检测检疫性真菌大豆北方茎溃疡病菌,根据大豆北方茎溃疡病菌及其近似种的模式分离物ITS序列差异,设计并合成1对特异性引物和1条MGB探针,建立大豆北方茎溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明:该检测方法能特异... 为准确快速检测检疫性真菌大豆北方茎溃疡病菌,根据大豆北方茎溃疡病菌及其近似种的模式分离物ITS序列差异,设计并合成1对特异性引物和1条MGB探针,建立大豆北方茎溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明:该检测方法能特异性检测大豆北方茎溃疡病菌。灵敏度试验结果表明:最低检测限量为10μL反应体系中总DNA含量1.0 pg;实时荧光PCR优化反应条件为引物终浓度0.5μmol·L^(-1),探针终浓度0.6μmol·L^(-1)。实际样品检测结果表明:该方法可用于疑似受大豆北方茎溃疡病菌侵染的进境大豆样品的检测与初筛。此方法准确、快速、灵敏,整个反应过程约1 h,检测过程完全闭管,无需PCR后续处理,可作为大豆北方茎溃疡病菌检测防控方法。 展开更多
关键词 大豆北方茎溃疡病菌 实时荧光PCR Taq Man-mgb探针 快速检测
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应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌耐链霉素基因 被引量:1
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作者 张琪 李胜 +8 位作者 靳娟 何建 杨晓艳 辛有全 柏吉祥 周奎章 张晓璐 蒋可 代瑞霞 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1198-1200,I0001,共4页
目的 应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫菌耐链霉素基因,为今后该地区突发人间鼠疫的精准临床用药提供理论依据。方法 分离培养海西地区1957—2009年间取自鼠疫患者、媒介昆虫及中间宿主的... 目的 应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫菌耐链霉素基因,为今后该地区突发人间鼠疫的精准临床用药提供理论依据。方法 分离培养海西地区1957—2009年间取自鼠疫患者、媒介昆虫及中间宿主的代表性鼠疫菌110株,提取其DNA,针对我国链霉素耐药基因rpsl基因设计引物P-F和P-R和TaqMan-MGB探针Probe1 [FAM]和Probe2[VIC],利用荧光定量PCR技术,进行耐药rpsl基因筛查。结果 110株被试菌株中FAM检测均为阳性(RFU峰值>2000);VIC阳性的为0株(RFU峰值<200)。阳性对照和空白对照成立。结论 实时荧光定量PCR结果显示,该地区未检测出耐链霉素菌株。 展开更多
关键词 鼠疫菌 TAQMAN-mgb探针 荧光定量PCR技术 耐链霉素 青海省海西州
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长孢轮枝菌Taq Man-MGB探针实时荧光PCR快速检测方法 被引量:1
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作者 段维军 李雪莲 +1 位作者 吕燕 张晓梅 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期224-232,255,共10页
长孢轮枝菌是一种在我国局部地区新近出现且危害性极大的植物病原真菌。根据长孢轮枝菌及其近似种的actin序列差异,设计并合成特异性引物和探针,建立了长孢轮枝菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法能特异性检测长... 长孢轮枝菌是一种在我国局部地区新近出现且危害性极大的植物病原真菌。根据长孢轮枝菌及其近似种的actin序列差异,设计并合成特异性引物和探针,建立了长孢轮枝菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法能特异性检测长孢轮枝菌;灵敏度试验结果表明,最低检测限量为10μL反应体系中总DNA含量10 pg;实时荧光PCR优化反应条件为引物终浓度0.8μmol/L,探针终浓度0.8μmol/L,优化后的整个反应过程约1 h。实际样品检测结果表明,该方法可用于疑似受长孢轮枝菌侵染的萝卜样品检测与初筛。此方法快速、灵敏,检测过程完全闭管,无需PCR后续处理,为早期快速检测长孢轮枝菌提供了重要参考。 展开更多
关键词 长孢轮枝菌 实时荧光PCR Taq Man-mgb探针 检测
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基于TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法
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作者 卓召振 靳倩 +2 位作者 张亮亮 匡颖 令狐克燕 《中国医药导报》 CAS 2023年第7期32-36,共5页
目的建立TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法。方法针对CYP2C19基因*2、*3和*17位点设计合成相应引物及双标记探针。选取2021年3月至2022年6月贵州省人民医院心内科门诊已知基因型的剩余全血样本42例,覆盖... 目的建立TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法。方法针对CYP2C19基因*2、*3和*17位点设计合成相应引物及双标记探针。选取2021年3月至2022年6月贵州省人民医院心内科门诊已知基因型的剩余全血样本42例,覆盖每个位点的每个基因型各10例,提取DNA进行聚合酶链反应(PCR)检测,产物进行电泳和Sanger法测序分析。加样1、10、100、800 ng DNA,进行PCR检测以评价灵敏度。每个位点的每个基因型5例,每周1次对其检测,连续3周,以评价重复性。结果设计的引物扩增出目的基因片段,电泳显示明亮的单一的DNA条带;90个基因型的PCR结果与测序结果完全一致(P>0.05);不同加样量PCR法均可准确判读基因型,所有基因型在1 ng水平的Ct值均<34。同一基因型3次重复检测的结果一致。结论本研究成功建立了TaqMan-MGB探针检测CYP2C19基因*2、*3和*17三个多态性位点的方法,具有快速、准确、灵敏、简便的特点。 展开更多
关键词 TAQMAN-mgb探针 CYP2C19 单核苷酸多态性 细胞色素酶P450
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牛传染性鼻气管炎gE基因TaqMan-MGB与SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立及应用
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作者 袁浩芳 朱晓晖 +4 位作者 张雨 李焱 李可伟 胡剑武 李家奎 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第11期110-116,共7页
为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的荧光定量检测方法,本研究根据IBRV gE基因的序列设计了相应的探针和引物,分别建立TaqMan-MGB探针和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并对2种方法进行了综合比较。结果显示,TaqMan-MGB探针和SYBR Gr... 为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的荧光定量检测方法,本研究根据IBRV gE基因的序列设计了相应的探针和引物,分别建立TaqMan-MGB探针和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并对2种方法进行了综合比较。结果显示,TaqMan-MGB探针和SYBR GreenⅠ定量荧光PCR方法的灵敏度分别达到1.0×10^(1) copies/μL和1.0×10^(2) copies/μL;2种荧光定量方法对除IBRV的其他牛病毒和细菌检测结果均为阴性;重复性检测中变异系数均小于2.3%;检测了130份来自西藏的牦牛样品,2种荧光定量PCR阳性检出率均为100%。以上结果表明,2种荧光定量方法都可用于检测IBRV,且TaqMan-MGB荧光定量PCR敏感性高于SYBR GreenⅠ荧光定量PCR。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 TaqMan-mgb荧光定量PCR SYBR GreenⅠ荧光定量PCR
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多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162 被引量:1
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作者 王凤军 许海锋 +2 位作者 陈强 杨伊平 金浩然 《保鲜与加工》 CAS 2023年第3期56-61,共6页
为对转基因玉米MIR162的进口实行监测、规范转基因玉米在国内市场中的流通,建立一种转基因玉米MIR162准确快速的检测方法,通过设计转基因玉米MIR162品系特异性序列的引物和探针,摸索和优化多重荧光PCR体系和参数,开发建立多重实时荧光PC... 为对转基因玉米MIR162的进口实行监测、规范转基因玉米在国内市场中的流通,建立一种转基因玉米MIR162准确快速的检测方法,通过设计转基因玉米MIR162品系特异性序列的引物和探针,摸索和优化多重荧光PCR体系和参数,开发建立多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162。结果表明,转基因玉米MIR162品系标准品和平行样品中内标基因和品系特异性基因均出现明显扩增曲线,其他转基因玉米品系标准品仅内标基因有扩增曲线,空白对照无扩增曲线,说明该TaqMan-MGB探针对转基因玉米MIR162品系具有扩增特异性。该方法可作为鉴定筛查转基因玉米MIR162品系及其转化体成分的有效方法,用于规范管理转基因产品在市场上的流通。 展开更多
关键词 转基因玉米MIR162 多重实时荧光PCR TaqMan-mgb杂交探针标记法 快速鉴定
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基于TaqMan MGB探针的人粪便中华支睾吸虫虫卵实时荧光PCR检测方法的建立及应用
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作者 马文晨 杨迪 +2 位作者 于欣 赵欣玥 李文君 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2023年第3期143-147,共5页
本研究根据华支睾吸虫cox 1基因序列设计合成特异性引物和探针,建立基于TaqMan MGB探针的人粪便中华支睾吸虫虫卵实时荧光PCR检测方法,同时评价该方法的特异性、敏感性、重复性。采用建立的荧光PCR方法对临床样本进行检测,并与改良加藤... 本研究根据华支睾吸虫cox 1基因序列设计合成特异性引物和探针,建立基于TaqMan MGB探针的人粪便中华支睾吸虫虫卵实时荧光PCR检测方法,同时评价该方法的特异性、敏感性、重复性。采用建立的荧光PCR方法对临床样本进行检测,并与改良加藤厚涂片法检测结果进行比对。结果显示,本研究建立的方法与形态和种属关系相近的寄生虫无交叉反应;以9.97×10^(7)~9.97×10^(0)copies/μL浓度的质粒作为标准品建立标准曲线,检测灵敏度为9.97 copies/μL;组内、组间重复性试验变异系数均小于0.4%。采用该方法检测280份居民粪便样本,检出阳性54份,经对比该方法敏感性高于改良加藤厚涂片法。本研究所建立的方法可用于华支睾吸虫虫卵的检测及诊断。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 虫卵 cox 1基因 TaqMan mgb探针 实时荧光PCR
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TaqMan-MGB荧光定量IC/TC-RT-PCR检测菜豆荚斑驳病毒
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作者 蔡伟 金晶 +3 位作者 沈建国 高芳銮 廖富荣 吴祖建 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期489-493,共5页
菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)是我国重要的检疫性有害生物,BPMV传入的风险随大豆进境数量增多而加大。本文针对菜豆荚斑驳病毒,以大豆种子提取液为材料,分别建立了TaqMan-MGB荧光定量IC-RTPCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-... 菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)是我国重要的检疫性有害生物,BPMV传入的风险随大豆进境数量增多而加大。本文针对菜豆荚斑驳病毒,以大豆种子提取液为材料,分别建立了TaqMan-MGB荧光定量IC-RTPCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR快速检测方法。根据GenBank公布的BPMV外壳蛋白基因序列,选择其保守区域,设计1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,测定了TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR方法的特异性和灵敏度,并将TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR、TaqMan-MGB荧光定量TC-RTPCR、IC-RT-PCR和TC-RT-PCR 4种检测方法的灵敏度进行比较。结果表明:所建立的两种检测方法特异性良好;TCRT-PCR的灵敏度为10-1倍病毒提取液原液;IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR灵敏度相当,为10-3倍病毒提取液原液;TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR灵敏度最高,为10-5倍病毒提取液原液,是IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR检测方法的102倍,是TC-RT-PCR检测方法的104倍;两种检测方法均能较好应用于实际大豆样品的检测。本文所建立的TaqMan-MGB荧光定量IC/TC-RT-PCR检测方法利用抗原特异性或试管非特异性捕捉病毒粒子,无需提取RNA,为进境大豆种子上BPMV的检测提供了稳定、快速、简便的技术依据,其较高的灵敏度和特异性具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 TaqMan-mgb荧光定量IC-RT-PCR TaqMan-mgb荧光定量TC-RT-PCR 菜豆荚斑驳病毒 检测
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饲料用鱼类、哺乳类及禽类源性成分三重TaqMan-MGB荧光PCR检测方法的建立及应用
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作者 吕继洲 袁向芬 +5 位作者 林祥梅 林玉 邓俊花 王慧煜 孔玉方 吴绍强 《质量安全与检验检测》 2023年第3期16-24,共9页
为建立饲料用鱼类、哺乳类及禽类源性成分的广谱、快速检测方法,收集Genbank中鳕鱼、鲈鱼、沙丁鱼等鱼类,猪、牛、羊等哺乳类以及鸡、鸭、鹅等禽类的18S rRNA基因序列,分别设计特异性扩增引物和MGB-TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和条... 为建立饲料用鱼类、哺乳类及禽类源性成分的广谱、快速检测方法,收集Genbank中鳕鱼、鲈鱼、沙丁鱼等鱼类,猪、牛、羊等哺乳类以及鸡、鸭、鹅等禽类的18S rRNA基因序列,分别设计特异性扩增引物和MGB-TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和条件,每种引物探针体系均可以特异性检测目标物种类型而与其他物种无交叉反应。3套引物探针体系组合后可同时检测鱼类、哺乳类及禽类源性成分,三重荧光PCR方法的最低检测限可低至0.002 ng或0.02 ng基因组/反应,变异系数均小于2%。利用建立的三重荧光PCR方法检测35份进境及国产饲料样本,从2份进口饲料及1份国产饲料中检出非标定动物源性成分,结果与行业标准方法的检测结果一致,符合率100%。结果表明,本研究建立的三重荧光PCR方法具有特异性、敏感性高、重复性好等优点,为包括饲料在内的动物产制品源性成分定性分析提供了新的技术分析手段。 展开更多
关键词 哺乳动物源性成分 鱼类源性成分 禽类源性成分 荧光PCR
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TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测布鲁氏菌 被引量:37
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作者 高正琴 邢进 +2 位作者 冯育芳 岳秉飞 贺争鸣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期995-1000,共6页
目的利用新一代TaqMan MGB探针技术,建立特异敏感的实时荧光定量PCR方法,用于布鲁氏菌的快速检测。方法针对布鲁氏菌基因组中16SrRNA序列设计特异性引物和探针,建立一套基于TaqMan MGB探针技术的实时荧光定量PCR方法,验证方法的特异性... 目的利用新一代TaqMan MGB探针技术,建立特异敏感的实时荧光定量PCR方法,用于布鲁氏菌的快速检测。方法针对布鲁氏菌基因组中16SrRNA序列设计特异性引物和探针,建立一套基于TaqMan MGB探针技术的实时荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性,对2008-2010年期间采集的773份动物样本中的布鲁氏菌进行检测,并与普通PCR方法进行比较分析。结果建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对布鲁氏菌的检测具有高度的特异性,对小肠结肠耶尔森菌、假结核耶尔森菌、肠炎沙门氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌均无交叉反应。生成的标准曲线的相关系数为0.999,斜率为-3.301,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100.872%。TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能够准确地从布鲁氏菌阳性样本中检测到布鲁氏菌DNA,最低能够检测到的布鲁氏菌数量为9.3拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高100倍。对773份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能检出53份布鲁氏菌阳性样本,而常规PCR只检出37份阳性。结果显示,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比常规PCR方法更敏感,能够直接从动物样本中检出布鲁氏菌DNA,检测时间仅为2h。结论本研究首次建立了直接用于检测动物样本中布鲁氏菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,该技术适用于传染性病原体的快速检测与鉴定。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 小沟结合物(minor GROOVE binder mgb)探针 实时荧光定量PCR 检测
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应用TaqMan MGB探针检测小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌 被引量:14
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作者 章桂明 程颖慧 +2 位作者 王颖 杨伟东 易建平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期142-151,共10页
以小麦印度腥黑穗病菌9个菌株和黑麦草腥黑穗病菌5个菌株及其近似种或相关种:稻粒黑粉菌、狼尾草腥黑粉菌、狗尾草腥黑粉菌、苏玛特腥黑粉菌、狐尾草腥黑粉菌、小麦网腥黑穗病菌和小麦矮化腥黑穗病菌共9种22个菌株为研究对象,通过序列... 以小麦印度腥黑穗病菌9个菌株和黑麦草腥黑穗病菌5个菌株及其近似种或相关种:稻粒黑粉菌、狼尾草腥黑粉菌、狗尾草腥黑粉菌、苏玛特腥黑粉菌、狐尾草腥黑粉菌、小麦网腥黑穗病菌和小麦矮化腥黑穗病菌共9种22个菌株为研究对象,通过序列比对分析,设计了检测小麦印度腥黑穗病菌及黑麦草腥黑穗病菌的TaqM an MGB实时荧光PCR引物和探针,优化了反应条件,筛选出特异性探针,分别建立了小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌实时荧光单重PCR和实时荧光双重PCR检测方法,其中实时荧光双重PCR检测方法实现了在同一PCR管中仅用5μL的反应体系,进行1次PCR反应就能特异性检测出小麦印度腥黑穗病菌或黑麦草腥黑穗病菌。本研究所建立的检测方法特异性强、结果可靠、检测速度快、成本明显降低,在实际应用中具有推广价值。 展开更多
关键词 小麦印度腥黑穗病菌 黑麦草腥黑穗病菌 TAQMAN mgb探针 荧光单重PcR 荧光双重PCR
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TaqMan MGB探针实时聚合酶链反应检测登革病毒 被引量:18
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作者 柯昌文 郑夔 +3 位作者 张欣 周惠琼 段金花 林立丰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第8期716-720,共5页
目的建立一种敏感、特异、重复性好的登革病毒(Dengue Virus, DV)鉴定方法.方法根据DV 3'端非编码区基因保守序列,设计一套特异性引物和TaqMan MGB探针.利用1998~2004年收集的26份登革热病人临床血清标本,15例乙脑病人血清,DV 4个... 目的建立一种敏感、特异、重复性好的登革病毒(Dengue Virus, DV)鉴定方法.方法根据DV 3'端非编码区基因保守序列,设计一套特异性引物和TaqMan MGB探针.利用1998~2004年收集的26份登革热病人临床血清标本,15例乙脑病人血清,DV 4个血清型标准毒株及23株1978~1997年DV 地方流行株和相关西尼罗病毒、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒等毒株,同时用克隆了1型DV 基因组3'端非编码区序列片段的质粒DNA作为阳性对照,检测所建立方法的特异性、敏感性.结果所建立方法的最低检测限约为每反应5个基因拷贝.用该方法检测4个血清型DV 标准毒株、23株DV 地方流行株和26例分离到DV 的阳性血清标本,检出率为100 %;用该方法检测15例乙脑病人血清、10例麻疹病人血清和西尼罗病毒、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒,结果均为阴性.结论新建的TaqMan MGB探针检测DV 方法是实验室早期诊断登革热较理想的方法. 展开更多
关键词 登革病毒 TAQMAN mgb探针 实时聚合酶链反应
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TaqMan MGB实时荧光PCR对转基因大豆定量检测的研究 被引量:8
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作者 黄东东 翁少萍 +2 位作者 吕玲 常迪 何建国 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期140-142,共3页
利用实时荧光定量PCR技术,根据转基因大豆(Roundup ReadyTM)的外源基因35S启动子序列设计引物和TaqMan MGB探针,对大豆粉中Roundup ReadyTM大豆含量进行了定量检测,根据这个检测体系建立了35S启动子Ct值与样品中转基因成分数量之间的标... 利用实时荧光定量PCR技术,根据转基因大豆(Roundup ReadyTM)的外源基因35S启动子序列设计引物和TaqMan MGB探针,对大豆粉中Roundup ReadyTM大豆含量进行了定量检测,根据这个检测体系建立了35S启动子Ct值与样品中转基因成分数量之间的标准曲线和线性回归方程(相关系数r2:0.9942)。本研究设计的方法还可以应用到多组分的食品、饲料等加工产品,检测转基因成分的含量,并可作为转基因食品常规PCR定性检测方法。 展开更多
关键词 转基因大豆 实时定量PCR TAQMAN mgb探针 基因 生物技术 食品技术
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快速凝固法制备大尺寸MgB_2超导体 被引量:1
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作者 张安民 刘永长 +1 位作者 史庆志 韩雅静 《材料导报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第10期94-96,共3页
简单化合物 MgB_2超导性的发现引起了世界科学家对其组织结构、超导原理、制备方法及应用前景的广泛兴趣。针对 MgB_2单晶制备过程中存在镁的气化温度很低,MgB_2在镁的沸点以下溶解度很小等不利因素,在国际上率先提出了从过冷熔体中的... 简单化合物 MgB_2超导性的发现引起了世界科学家对其组织结构、超导原理、制备方法及应用前景的广泛兴趣。针对 MgB_2单晶制备过程中存在镁的气化温度很低,MgB_2在镁的沸点以下溶解度很小等不利因素,在国际上率先提出了从过冷熔体中的相选择与控制入手,采用深过冷快速定向凝固技术来制备高品质、大尺寸 MgB_2单晶的新思路。 展开更多
关键词 mgb2 超导性 单晶 深过冷 快速凝固 mgb2超导体 制备方法 大尺寸 快速凝固法 定向凝固技术
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TaqMan MGB探针实时检测兔病毒性出血症病毒 被引量:15
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作者 张秀娥 田夫林 +2 位作者 李希友 李建亮 崔言顺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期814-817,共4页
应用荧光定量PCR技术,根据兔病毒性出血症病毒的保守基因VP60设计了1对引物和1段Taqman MGB探针,建立了用于检测兔病毒性出血症病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。试验中能够检出的RHDV VP60基因质粒拷贝数达103数量级,能够检测到RHDV病毒... 应用荧光定量PCR技术,根据兔病毒性出血症病毒的保守基因VP60设计了1对引物和1段Taqman MGB探针,建立了用于检测兔病毒性出血症病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。试验中能够检出的RHDV VP60基因质粒拷贝数达103数量级,能够检测到RHDV病毒核酸最低量可以达到5 pg,未检出其他病原的RNA。试验结果表明,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量RT-PCR方法的特异性、敏感性、重复性均达到试验设计要求,能快速检测临床样品中的兔病毒性出血症病毒,适合于兔各脏器及肌肉组织中兔病毒性出血症病毒的快速诊断和检测。 展开更多
关键词 兔病毒性出血症病毒 TAQMAN mgb探针 实时定量
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Taqman-MGB双重探针PCR技术检测含89K毒力岛猪链球菌2型 被引量:9
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作者 朱水荣 王志刚 +4 位作者 杨婷婷 金大智 张政 徐宝祥 姚萍萍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期434-438,共5页
目的建立同时检测猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种特异性16S rRNA及其89K毒力岛基因的SS2中国毒力株双重荧光定量PCR方法。方法利用SS种特异性16S rRNA和89K毒力岛基因的特异性序列设计引物和MGB探针。优化荧光定量PCR反应条件和反... 目的建立同时检测猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种特异性16S rRNA及其89K毒力岛基因的SS2中国毒力株双重荧光定量PCR方法。方法利用SS种特异性16S rRNA和89K毒力岛基因的特异性序列设计引物和MGB探针。优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,并对21株猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)、18株其它链球菌、9株葡萄球菌、5株其它菌株进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性。结果该技术的种特异性16S rRNA及其89K毒力岛两基因检测灵敏度分别为6个拷贝/反应(或12cfu/mL)及27拷贝/反应(或58cfu/mL);重复性实验,变异系数为0.30%~2.11%;从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右。用该方法对有关菌株进行考核,21株SS2菌检测结果均为SS种特异性16S rRNA基因阳性,其中15株含有89K毒力岛的SS2菌株的89K毒力岛基因检测均阳性;而非SS菌株的16S rRNA和89K毒力岛基因检测结果均为阴性。对49份呼吸道咽拭子、血液应急样本等进行实际考核,有2份血液样本16S rRNA基因阳性,其中1份血液样本89K毒力岛基因阳性。结论本次建立的Taq Man-MGB双重探针荧光定量PCR方法特异、快速、敏感,可特异性鉴定SS2中国毒力株(含有89K毒力岛),区分SS与非SS菌以及是否含有89K毒力岛基因,该方法的建立将有益于目前针对猪链球菌2型中国毒力株快速定量检测,以及疑似猪链球菌病患者病原的早期甄别、猪链暴发疫情调查及猪群暴发或带菌调查与评估等。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 双重荧光定量PCR mgb探针 16S RDNA基因 89K毒力岛
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