多浪羊和中国美利奴羊MHC-DRB_1基因多态性与包虫病的遗传易感性

目的探讨多浪羊和中国美利奴(新疆军垦型)羊MHC-DRB1基因的多态性与包虫病的遗传易感性。方法利用巢式PCR扩增192只多浪羊和199只中国美利奴(新疆军垦型)羊(其中各有70只和98只为棘球蚴病感染——包虫病阳性)MHC-DRB1基因第二外显子,其296bp扩增产物经SacI、Hin1I和HaeIII3种限制性内切酶进行RFLP多态性分析。结果多浪羊和中国美利奴羊的MHC-DRB1基因第二外显子在SacI、Hin1I和HaeIII酶切位点存在丰富的多态性,两绵羊品种均检测出了2、2和6种等位基因,但基因型分别为3、3、18和3、3、15种。DRB1第二外显子的第159,173,177,178,208,225位碱基上存在多态性。结论将两绵羊品种包虫病阴性和阳性羊的等位基因频率和基因型频率分别进行了分析比较,结果提示多浪羊等位(基因HaeIII a与包虫病的易感性相关(P<0.05);基因型SacI ab和HaeIII cf与包虫病的抗性相关(P<0.05),SacI bb,Hin1I ab和HaeIII aa 3种基因型与包虫病的易感性相关(P<0.05),而基因型HaeIIIbe和HaeIII ef与包虫病的易感性具有较强的相关性(P<0.01)。中国美利奴(新疆军垦型)羊等位基因HaeIII d与包虫病的易感性相关(P<0.05);基因型SacI ab和HaeIII ee与包虫病的抗性相关(P<0.05),而基因型HaeIII bd与包虫病的易感性相关(P<0.05)。

哈萨克绵羊MHC-DRB1基因SSCP多态性与细粒棘球蚴病遗传抗性关联分析

目的研究新疆哈萨克绵羊MHC-DRB1基因多态性与细粒棘球蚴病遗传抗性之间的相关性。方法应用巢式PCR-SSCP对细粒棘球蚴病阳性和阴性各100只哈萨克绵羊的MHC-DRB1第2外显子进行多态性分析。结果试验结果共检测出15个等位基因和37种基因型。χ2适合性检验结果表明,哈萨克绵羊MHC-DRB1基因第2外显子的SSCP带型未达到Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。将细粒棘球蚴病阴性和阳性哈萨克绵羊的等位基因频率和基因型频率进行差异性显著检验和相对危险性估计(RR值估计)分析,发现等位基因H(P<0.01,RR=0.394)和F(P<0.01,RR=0.465)、基因型FF(P<0.05,0.352)和GH(P<0.05,RR=0.45)与细粒棘球蚴病的抗性具有较强的相关性;等位基因B(P<0.01,RR=14.5>4.1)和基因型GG(P<0.01,RR=13.5>4.1)与细粒棘球蚴病易感性具有很强的相关性,K(P<0.01,RR=3.76)和G(P<0.01,RR=3.395)与细粒棘球蚴病易感性具有较强的相关性,基因型KK(P<0.05,RR=3.996)与细粒棘球蚴病易感性具有较强的相关性。结论巢式PCR-SSCP方法证明了哈萨克绵羊MHC-DRB1基因第2外显子存在丰富的多态性,并初步筛选出了与包虫病抗性或易感性相关的等位基因与基因型。

多浪羊MHC-DRB_1基因的HaeⅢ酶切多态性

应用巢式PCR-RFLP方法,对192只多浪羊的MHC-DRB1外显子2的遗传多态性进行检测,结果表明:多浪羊的MHC-DRB1基因外显子2在HaeⅢ的酶切位点存在多态性,这个酶切位点受6个等位基因控制,在多浪羊中共发现18种基因型;χ2适合性检验结果表明,多浪羊MHC-DRB1外显子2在HaeⅢ酶切位点未达到Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。

甘肃地区绵羊MHC-DRB1基因第2外显子多态性与乳房炎的相关性分析

为研究甘肃地区绵羊MHC-DRB1基因第2外显子基因多态性与绵羊乳房炎的相关性,采用PCR-SSCP方法检测了200只甘肃高山细毛羊和212只小尾寒羊(其中各有43只和48只乳房炎阳性)MHC-DRB1第2外显子基因多态性,分析了群体内各等位基因与绵羊乳房炎的关联性。结果表明,两个品种绵羊群体的MHC-DRB1第2外显子共检测到13个等位基因,具有高度多态性(PIC>0.5),且偏离了哈德温伯格平衡定律(P<0.01)。两个品种绵羊乳房炎阴性和阳性个体的13个单倍型序列的差异显著性检验和相对危险值(RR值)计算发现,甘肃细毛羊中等位基因D(0.01<P<0.05,RR=0.898)与乳房炎的抗性具有相关性,F(0.01<P<0.05,RR=3.360)与乳房炎易感性具有相关性;而等位基因K(0.01<P<0.05,RR=0.030)与小尾寒羊乳房炎的抗性有相关性,F(P<0.01,RR=5.176)与小尾寒羊乳房炎的易感性具有较强相关性。

多浪羊MHC-DRB1基因多态性与包虫病抗性分析

通过PCR扩增122只包虫病(细粒棘球蚴病)阴性和70只包虫病阳性多浪羊的MHC-DRB1第2外显子,产物经SacⅠ、Hin1Ⅰ和HaeⅢ3种限制性内切酶酶切后进行RFLP多态性分析。结果表明,多浪羊MHC-DRB1基因第2外显子在SacⅠ、Hin1Ⅰ和HaeⅢ酶切位点存在丰富的多态性,分别检测出了2、2和6种等位基因,出现了3、3和18种基因型。将包虫病阴性和阳性多浪羊的等位基因频率和基因型频率分别进行比较分析,发现等位基因HaeⅢa对包虫病感染具有一定的易感性(P<0.05),SacⅠab和Hin1Ⅰaa 2个基因型对包虫病具有一定的抗性(P<0.05),HaeⅢbe和HaeⅢef这2个基因型对包虫病具有较强的易感性(P<0.01)。

不同物种MHC-DRB1基因外显子2生物信息学分析

为了研究不同物种MHC—DRB1基因的遗传多样性，试验采用比较基因组学和生物信息学方法比较了绵羊、驼鹿、狗、野猪和人的MHC-DRB1基因外显子2序列，并对该基因的遗传多样性及分子系统发育进行了分析。结果表明：在95个基因序列中检测到149个多态位点，共生成83个单倍型。说明物种间及物种内MHC—DRB1基因存在较丰富的遗传多样性。

中国美利奴羊(军垦型)MHC-DRB1基因Nested PCR-RFLP反应体系的优化

本实验针对目前对绵羊MHC-DRB1基因的分析,介绍了利用NestedPCR扩增再进行RFLP反应的方法在中国美利奴(军垦型)上的应用。分析了在NestedPCR-RFLP反应中的一些影响因素,及它的优缺点,建立了绵羊MHC-DRB1基因NestedPCR-RFLP的最佳反应体系。

两种MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊细粒棘球六钩蚴侵染期小肠消减文库的构建

为了分离两种MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊个体在细粒棘球六钩蚴侵染期小肠组织的差异表达基因,试验在实验室前期采用PCR-RFLP方法筛选获得这两种MHC-DRB1单倍型(包虫病抗性相关的MHC-DRB1MvaIbc-SacIIab-Hin1Iab单倍型和包虫病非抗性相关的MHC-DRB1 MvaIbb-SacIIaa-Hin1Iaa单倍型)的基础上,采用抑制性消减杂交技术构建了以非抗性相关哈萨克绵羊六钩蚴侵染期小肠cDNA为实验方(Tester),抗性相关哈萨克绵羊六钩蚴侵染期小肠cDNA为消减方(Driver)的消减文库。结果显示:以内参基因GAPDH为指标,检测文库的消减效率为215倍;从文库中随机挑选98个阳性克隆进行了PCR检测,显示插入片段的大小分布于150～1000bp。结论:消减文库的构建成功,为进一步分离和鉴定相关的差异表达基因,探讨包虫病抗性相关MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊抵抗六钩蚴侵染的分子作用机制奠定了研究基础。

中国美利奴羊(军垦型)MHC-DRB1基因Nested PCR—RFLP反应体系的优化

试验针对目前对绵羊MHC-DRB1基因的分析,介绍了利用Nested PCR扩增再进行RFLP反应的方法在中国美利奴(军垦型)上的应用。分析了在Nested PCR-RFLP反应中的一些影响因素及它的优缺点,建立了绵羊MHC-DRB1基因Nested PCR-RFLP的最佳反应体系。

新疆4个绵羊群体MHC-DRB1基因外显子2多态性的遗传分析

采用PCR-RFLP的方法研究了哈萨克羊、多浪羊、中国美利奴羊(新疆军垦型)及哈萨克羊与中国美利奴羊(新疆军垦型)杂交一代的MHC-DRB1基因外显子2遗传多态性。结果显示,4个绵羊群体的MHC-DRB1基因外显子2表现出丰富的多态性,共检测到28种基因型和14个等位基因,其在4个绵羊群体间的分布存在不一致。对4个群体的遗传参数检测结果显示,MHC-DRB1基因外显子2的基因杂合度较大,遗传变异程度较高。根据MHC-DRB1基因外显子2在5个酶切位点的等位基因频率对4个绵羊群体进行了聚类分析,结果反映了4个群体间就MHC多态性建立的遗传关系,并初步探讨了4个群体间抗病性的相互关系。

洼地绵羊MHC-DRB1基因PCR-RFLP多态性分析

为了探讨洼地绵羊MHC-DRB1基因的多态性,采用套式PCR扩增82只洼地绵羊的MHC-DRB1基因第2外显子,其296 bp扩增产物经SacⅠ、HaeⅢ限制性内切酶酶切后进行RFLP多态性分析。结果表明,洼地绵羊的MHC-DRB1基因外显子2在SacⅠ、HaeⅢ的酶切位点存在多态性,测序发现,这些酶切位点分别受2、5个等位基因控制,由于MHC-DRB1为多碱基突变的基因位点,综合2种限制性内切酶的酶切结果,在洼地绵羊中共发现15种基因型,其中新的等位基因MHC-DRB1.D(225 bp/71 bp)仅在该洼地绵羊群体中发现。对MHC-DRB1的5个等位基因的核苷酸序列以及预测的氨基酸序列分别进行比对,发现5个等位基因间存在丰富的变异位点。

急性白血病细胞B7-1及MHC分子的表达

目的 :探讨共刺激分子B7 1(CD80 )及MHC分子在急性白血病 (acuteleukemia ,AL)中的表达 .方法 :应用一组mAb ,采用免疫荧光法对AL 5 2例瘤细胞及 34例正常人骨髓单个核细胞 (BMMC)表面B7 1及主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex ,MHC)分子的表达进行了检测 .结果 :所有患者瘤细胞及正常人BMMC上MHCⅠ类分子表达强阳性 ,MHCⅡ类分子表达 92 %阳性 ,而B7 1表达差异较大 ,急性单核细胞白血病 (M 5 )表达阳性率最高 (8/11) ,而急性粒细胞白血病 (M 1,M2 ,M3)均无表达 .结论 :B7 1缺陷是白血病细胞逃避宿主免疫监视的重要原因 ,转染B7

北方汉族寻常型银屑病与HLA-DRB1及DQB1等位基因相关性研究

目的:探讨HLA-DRB1及DQB1等位基因与北方汉族寻常型银屑病相关性。方法:利用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)分型技术,对63例寻常型银屑病患者和102例健康人的HIA-DRB!及DQB1等位基因进行检测。结果:(1)HLA-DRB1*070x、DRB1*1001及DOB`*020x等位基因与北方汉族寻常型银屑病呈正相关(P分别为0.001,0.005,0.009);HLA-DRB1*120x等位基因与北方汉族寻常型银屑病呈负相关(P=0.007)。(2)HLA-DRB1*070x及DQB1*020x等位基因仅与家族史阳性的早发型(Ⅰ型)银屑病发病相关(P<0.001)。(3)HLA-DRBq*1001等位基因频率在Ⅰ型及无家族史的晚发型(Ⅱ型)银屑病均显著性增高(P<0.05)。结论:(1)HLA-DRB1*070x、DRB1*1001及DQB1*020x等位基因可能是北方汉族寻常型银屑病的易感基因或与易感基因相连锁;HLA-DRB1*120x等位基因可能是阻止北方汉族人发生银屑病的保护基因。(2)Ⅰ型及Ⅱ型银屑病的遗传背景存在差异。

急性早幼粒细胞白血病与MHC—DRB1*基因的相关研究

目的探讨北方地区汉族人急性早幼粒细胞白血病(APL)与人类主要组织相容性复合体MHC—DRB1*基因多态性的关系。方法应用顺序特异性引物和聚合酶链反应(PCR-SSP)技术,对21例急性早幼粒细胞白血病患者及32例无血缘关系的健康人的MHC—DRB1*各等位基因及亚基因进行了检测分析,并将该方法与其它检测MHC等位基因的方法进行对比。结果结果表明,MHC—DRB1*09(RR=1.59,P<0.05=;MHC—DRB1*14(RR=1.59,P<0.05=基因与APL呈正相关,显著高于对照组,两组之间比较差异有显著性意义,而其它MHC—DRB1*各等位基因未见异常,均无统计学差异。结论本项研究结果提示,MHC—DRB1*09和14基因可能是我国北方汉族人APL致病的易感基因,为揭示APL的发病机制中免疫遗传学作用提供了重要信息和依据。

妊娠大鼠子宫和胎盘MHC类分子的表达及TGF-β1对其表达的影响

本研究旨在对大鼠妊娠过程中子宫和胎盘主要组织相容性抗原(MHC)的动态表达和表达定位,及体内注射超生理剂量的转化生长因子-β1(TGF-β1)后MHC分子的表达进行检测,探讨妊娠子宫和胎盘中典型性MHC-Ⅰ类分子(RT1-A)和非典型性MHC-Ⅱ类分子(RT1-DM)的表达规律、定位及与TGF-β1的关系。笔者采用蛋白质印迹和免疫组化方法对妊娠各时期大鼠子宫和胎盘中相关指标进行检测。结果表明,正常妊娠各个时期大鼠子宫和胎盘中均能检测到MHC类分子的表达。子宫中RT1-A蛋白的表达在整个妊娠期呈增长趋势(D4～D19)。妊娠早期至妊娠中期RT1-DM蛋白在子宫中的表达量逐渐增加,妊娠晚期表达量下降。胎盘中RT1-A、RT1-DM蛋白的表达量自妊娠早期至妊娠中期下降,妊娠晚期逐渐上升。注射超生理剂量的TGF-β1后,植入前期子宫中RT1-A略有升高,在植入期(D6)和植入后期(D9)下降,D19显著下降(P<0.01)。RT1-DM表达量在植入前期上升、植入期下降、植入后期略有上升,妊娠晚期显著下降(P<0.01)。胎盘中妊娠早期(D9)和晚期(D19)RT1-A和RT1-DM的表达显著下降(P<0.01),妊娠中期这两种蛋白表达量显著上升(P<0.05,P<0.01)。免疫组化结果表明这两类分子的定位不受外源性TGF-β1的影响:妊娠早期RT1-DM主要定位于子宫腔上皮、腺上皮、血管壁和子宫肌层。RT1-A主要定位于腔上皮、腺上皮、基蜕膜及血管壁。妊娠中晚期RT1-A和RT1-DM主要定位于迷宫层、海绵滋养层、腺上皮和子宫血管壁。综上所述,大鼠妊娠过程中超生理剂量的TGF-β1对MHC抗原表达有调节作用,这种调节在妊娠各个时期有所不同。

兰州地区汉族寻常性、脓疱性银屑病与HLA-DRB1*0701的相关性

目的探讨兰州地区汉族寻常性、脓疱性银屑病与HLA-DRB1*0701等位基因的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异引物(PCR-SSP)法检测42例寻常性银屑病、28例脓疱性银屑病和50例健康对照者HLA-DRB1*0701等位基因频率,并相互比较。结果寻常性银屑病患者组及脓疱性银屑病患者组HLA-DRB1*0701等位基因频率分别(54.8%,46.4%)与正常对照组(22.0%)比较差异均有显著性(P<0.05)。结论HLA-DRB1*0701等位基因可能是兰州地区汉族寻常性、脓疱性银屑病的遗传标志。

血清Ⅰ类MHC链相关蛋白A、C-反应蛋白、α1-酸性糖蛋白对恶性妇科肿瘤诊断的临床检测

随着分子生物学的进展,当前血清Ⅰ类MHC链相关蛋白A、C-反应蛋白、α1-酸性糖蛋白是用于妇科肿瘤诊断的可行方法。本研究将构建受试者工作特征ROC曲线模型,综合评价血清Ⅰ类MHC链相关蛋白A(MICA)、C-反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(α1-AG)三种方法诊断恶性妇科肿瘤的效果并进行对比分析,以期为我国恶性妇科肿瘤寻找最佳的实验诊断方法。通过平均值的显著性t检验,可以看出在1%的显著性水平下,恶性妇科肿瘤患者的MICA、CRP、α1-AG指标均显著大于对照组的数值。经过ROC分析,MICA监测AR灵敏度、特异度和AUROC为97.8%、76.2%、0.810;CRP为97.8%、57.1%、0.918;α1-AG为93.5%、95.2%、0.835。ROC曲线下面积反映诊断试验的准确性,实验结果提示AUROC:CRP>α1-AG>MICA。可以认为,相比于其他两种监测方法,CRP的诊断准确性最好,更有助于指导临床的恶性妇科肿瘤的诊断。

绵羊和人主要组织相容性复合体DRB1基因外显子2多态性及生物信息学分析

本试验旨在研究绵羊和人的主要组织相容性复合体(MHC)DRB1基因外显子2(exon2)单核苷酸多态性(SNPs)和单氨基酸多态性(SAPs),并进行生物信息学分析。运用生物基因组学数据库,利用生物信息学及比较基因组学方法对人与绵羊MHC-DRB1基因exon2序列多态性进行分析,采用生物信息学软件对绵羊MHC-DRB1的蛋白质结构及生物学功能进行预测和分析。结果显示,人主要组织相容性复合体(HLA)和绵羊主要组织相容性复合体(OLA)的DRB1exon2均存在丰富的SNPs位点和SAPs位点,单一多态位点和简约多态位点数不尽相同,二者相比仅有14个SNPs位点相同,其余位点均不同。序列分析结果表明,二者MHC-DRB1exon2序列具有高度相似性。进一步生物信息学分析结果显示序列变异引起的单氨基酸变化引发了蛋白质二级结构和三级结构的改变,可能因此会引起基因功能的异常,从而引发抗病性和疾病易感性的变异。

聚乙二醇干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效与人类白细胞抗原DRB1等位基因的相关性研究

目的探讨青岛地区汉族慢性乙型病毒性肝炎患者聚乙二醇干扰素治疗疗效与人类白细胞抗原（HLA）-DRB1等位基因的关系。方法以接受聚乙二醇干扰素α-2a正规治疗48周的青岛地区汉族慢性乙型肝炎患者40例作为研究对象，应用聚合酶链反应-序列特异性引物技术对患者的HLA-I／类抗原的DRB1 ＊04、＊07进行等位基因检测，应用SC2000统计软件对结果进行分析。结果40例慢性乙型肝炎患者接受聚乙二醇干扰素α-2a治疗48周后，完全应答者19例（47．5％），部分应答者10例（25．0％），无应答者11例（27．5％）。无应答者11例中，HLA—DRB1＊04携带者4例，HLA-DRB1＊07携带者7例；部分、完全应答者29例中，HLA—DRB1＊04携带者1例；HLA—DRB1＊07携带者6例，无应答者HLA-DRB1＊04和＊07携带率均明显高于部分、完全应答者（前者P〈0．05，OR=16．0；后者P〈0．05，OR=6．7）。结论青岛地区汉族人群中慢性乙型肝炎聚乙二醇干扰素α-2a治疗无应答与HLA-DRB1＊04、＊07呈正相关。