携带非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A穿膜区等位基因中晚期食管癌患者对NK细胞免疫治疗的敏感性高

目的:探讨非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC classⅠ-related molecules A,MICA)穿膜区等位基因对中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗疗效的影响。方法:选取福建省肿瘤医院2013年4月至2015年10月收治的中晚期(TNMⅢ-Ⅳa期)食管癌患者152例,均在姑息性手术后行全身化疗,根据患者MICA穿膜区等位基因是否为A5.1分为4组:(1)A5.1化疗+NK细胞治疗(A5.1+NK)组;(2)A5.1单纯化疗(A5.1)组;(3)非A5.1化疗+NK细胞治疗(no A5.1+NK)组;(4)非A5.1单纯化疗(no A5.1)组,观察各组患者临床疗效。构建食管癌组织标本MICA等位基因A5.1的真核表达载体p TE-1A5.1,转染食管癌TE-1细胞株;Western blotting检测p TE-1A5.1转染对TE-1细胞MICA蛋白表达的影响,LDH法检测TE-1细胞转染p TE-1A5.1前后对NK细胞杀伤敏感性的变化,ELISA法检测食管癌患者血清可溶性MICA及转染p TE-1A5.1前后TE-1细胞上清中可溶性MICA含量。结果:经过3年的随防,A5.1+NK组患者中位总生存期(medium overall survival,m OS)为15.0个月,A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组为22.4个月,no A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.05)。经Cox多因素回归分析发现,患者年龄、性别、ECOG评分及基因型与预后均无明显相关(P>0.05),将基因类型与是否NK细胞治疗进行交叉分析,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.01)。转染p TE-1A5.1后TE-1细胞内MICA表达显著升高,培养液上清可溶性MICA分泌明显增加[(256.2±45.3)vs(45.3±11.5)pg/ml,P<0.01];与转染前相比,NK细胞对过表达MICA的TE-1细胞的杀伤率明显降低[(29.5±7.2)%vs(42.5±7.1)%,P<0.05]。结论:相对中晚期食管癌MICA穿膜区A5.1等位基因患者,非A5.1基因患者手术后化疗联合NK细胞的疗效较好,其机制与其不容易产生可溶性MICA密切相关。

MHCⅠ类分子及ICAM-1在IL-2、IL-4、IL-6基因转染的瘤苗在诱导CTL中的作用

本文研究了IL-2、IL-4、IL-6基因转染后B16黑色素瘤细胞表面MHCⅠ类抗原及ICAM-1的表达水平,并探讨了其在CTL诱导过程中的作用.结果表明,IL-2、IL-4、IL-6基因转染的B16黑色素瘤细胞表面MHCⅠ类抗原及ICAM-1表达均高于野生型B16黑色素瘤细胞及转染对照质粒的B16黑色素瘤细胞.体内接种后,小鼠脾脏CTL活性明显增强,CTL培养体系中IFN-γ、TNF-α的分泌水平也增高.在CTL诱导体系中加入抗ICAM-1单抗可以抑制CTL的活化,加入抗MHCⅠ类分子单抗后可使CTL的活化完全阻断.这提示细胞因子基因转染可能通过使肿瘤细胞表面MHCⅠ类抗原、ICAM-1的表达增加,从而增强瘤苗的免疫原性.

自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑血管内皮细胞VCAM-1和MHCⅡ类分子表达

目的 探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)大鼠脑血管内皮细胞表面分子的改变。 方法 用免疫组织化学方法检测EAE大鼠脑血管内皮细胞上血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)和主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅱ类分子的表达。用MTT(四甲基偶氮唑盐 )法检测不同发病级别大鼠血清TNF和IFN γ的水平。 结果 EAE大鼠脑血管内皮细胞较对照有诱导表达的VCAM 1和MHCⅡ类分子 ,血清中存在TNF和IFN γ活性。 结论 中枢神经系统炎症状态下 ,脑血管内皮细胞表面分子发生改变 。

非小细胞肺癌血清sMICA、microRNA-99a、DJ-1表达及临床意义

目的 分析血清可溶性MHCⅠ类链相关分子A(sMICA)、microRNA-99a、DJ-1蛋白(DJ-1)对非小细胞肺癌(NSCLC)诊断及预后评估价值。方法 收集2019年6月至2022年6月本院收治的NSCLC患者90例(NSCLC组),另选取本院同期健康体检志愿者90例(对照组)。对患者进行为期6个月随访,随访截止至2023年1月。采用ROC曲线评估sMICA、microRNA-99a、DJ-1对NSCLC诊断价值。采用多元Logistic回归分析影响NSCLC患者预后的关系。结果 NSCLC组sMIC、DJ-1表达水平高于对照组,microRNA-99a表达水平低于对照组(P<0.05);ROC曲线结果显示:sMICA、microRNA-99a、DJ-1对NSCLC诊断AUC值分别为0.742(95%CI:0.642~0.842)、0.759(95%CI:0.660~0.859)、0.789(95%CI:0.698~0.901)。90例患者中预后良好69例,预后不良21例。预后不良者sMIC、DJ-1表达水平高于预后良好组,microRNA-99a表达水平低于预后良好组(P<0.05);预后不良者TNM分期(III-IV期)、低分化占比高于预后良好组(P<0.05);两组在年龄、性别、肿瘤直径、病理类型中比较差异无统计学意义(P>0.05)。经多元Logistic回归分析:临床分期、分化程度、sMICA、microRNA-99a、DJ-1为影响NSCLC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论 相对健康人群,NSCLC患者sMICA、DJ-1水平高,microRNA-99a水平低;三指标水平与患者预后密切相关,通过检测血清三者水平可为患者后续诊疗、预后评估提供参考资料。

肿瘤精准免疫治疗的临床实践

目的通过二代高通量测序,评估肿瘤组织的潜在驱动突变和人类白细胞抗原(HLA)I类基因突变,预测肿瘤患者对主要组织相容性复合物I类分子(MHC-I)限制性的免疫治疗手段,如程序性死亡受体1(PD-1)单抗或多靶点抗原肽自体免疫细胞治疗技术(MASCT)的有效性。方法对35例肿瘤组织样本进行333个肿瘤相关基因二代高通量测序,根据肿瘤组织样本中基因突变信息将35例肿瘤样本进行Dirichlet Multinomial Mixture(DMM)分类分析,并根据肿瘤组织HLA-I类基因突变量,结合对患者肿瘤组织中检测到的点基因突变位点,分析预测能引起免疫响应的新生抗原肽数目,预测患者对MHC-I类分子限制性免疫治疗——PD-1单抗或MASCT单用或联用治疗中的临床疗效,并根据实际治疗结果对预测方法进行优化和改进。结果 35例肿瘤组织样本根据肿瘤相关基因测序和DMM分类分析,形成2个分组。DMM 2个分组中,HLA-I类基因突变量差异显著(P=1.076e-5)。其中5例患者接受免疫治疗,对结果进行个案分析:2例HLA-I类基因高突变量患者进行MHC-I类分子限制性免疫治疗PD-1单抗联用MASCT,或单用MASCT治疗3次或3次以上,患者临床评估为疾病进展;3例HLA-I类基因低突变量患者,进行PD-1单抗单用或联用MASCT 4次以上,2例患者临床评估为疾病控制,1例患者临床评估为疾病稳定。结论通过特定的基因测序,检测患者肿瘤组织驱动突变和HLA-I类基因突变量,对患者进行分类,筛选适合MHC-I类分子限制性肿瘤免疫治疗适应证人群,提高临床肿瘤免疫治疗有效率,达到精准免疫治疗的目的。

B7基因转导非免疫原性肿瘤B16并联合应用IFN-γ的抗肿瘤研究

目的探索非免疫原性肿瘤的免疫基因治疗。方法将Ｂ７１基因导入非免疫原性肿瘤细胞Ｂ１６，在体外经ＩＦＮγ处理后，观察细胞表面分子的表达变化，以及肿瘤细胞在小鼠体内的成瘤性。结果单独Ｂ７基因转导的Ｂ７＋Ｂ１６在小鼠体内持续生长。体外用ＩＦＮγ处理肿瘤细胞，可明显增加细胞表面ＭＨＣＩ类分子的表达，与Ｂ７－Ｂ１６比较，Ｂ７＋Ｂ１６在小鼠体内的成瘤性明显降低。结论单独Ｂ７基因导入并表达，不能改变Ｂ１６在体内恶性增殖的特性。同时提高细胞表面Ｂ７与ＭＨＣＩ分子的表达，两者可协同发挥作用，诱发肿瘤排斥。

海南汉族和黎族人群1型糖尿病患者MICA基因多态性研究

目的探讨主要组织相容性复合体I类分子链相关基因A （MICA）基因多态性在海南汉族、黎族人群中的分布情况，分析MICA基因多态性与1型糖尿病（T1DM）的相关性。方法病例对照研究。选取2015年6月至2016年12月来自海南省五指山市、陵水县、琼中县、白沙县、乐东县、昌江县、东方市、海口市就诊的，海口市人民医院、海南省第二人民医院的汉族、黎族T1DM患者各55例及健康体检者各55名（其中汉族T1DM患者，男35例，女20例；汉族健康体检者，男28名，女27名。黎族T1DM患者，男33例，女22例；黎族健康体检者，男28名，女27名）。采用聚合酶链反应－直接测序分型（PCR－SBT）方法进行MICA基因分型。采用χ2检验对MICA等位基因频率进行相关性分析。结果海南汉族健康人群共检测出11种MICA序列等位基因和5种MICA－STR序列等位基因，黎族健康人群分别为13种和5种，其中汉族MICA＊008：01和A5检出频率最高[分别为30.85%（29/94例），41.49%（39/94例）]，黎族MICA＊002：01和A4检出频率最高[分别为21.57 %（22/102例），36%（36/100例）]；汉族T1DM患者人群共检测出10种MICA序列等位基因和5种MICA－STR序列等位基因，黎族分别为9种和5种，其中汉族MICA＊002：01和A9检出频率最高[分别为29%（29/100例），29.29%（29/99例）]，黎族MICA＊012：01、MICA＊002：01和A4最常见[分别为21.15%（22/104例），21.15%（22/104例），38.24%（39/102例）]。海南汉族人群与T1DM患者人群MICA＊002：01、MICA＊010、MICA－A5、MICA－A6和MICA－A9等位基因的频率（健康人群分别为：5.32%，22.34%, 41.49 %，9.58%，6.38%；T1DM患者人群分别为：29%，7%，26.26%，2.02%，29.29%），差异有统计学意义（χ2值分别为：18.799，9.233，5.218，5.197，16.762；P值分别为：0.000，0.002, 0.025，0.024，0.000，P〈0.05）；黎族健康人群各MICA等位基因频率（分别为：17.65%，21.57%，12.75%，5.88%，19.61%，2.94%，10.78%，1.96%，1.96%，0.98%，1.96%，0.98%，0.98%；36%，22%，14%，2%，27%），黎族T1DM患者人群检出的各MICA等位基因频率（分别为：21.15%，21.15%，11.54%，5.77%，14.42%，5.77%，16.35%，1.92%，1.92%；38.24%，28.43%，11.76%，1.96%，19.61%），差异均无统计学意义（χ2值分别为：0.405，0.005，0.070，0.001，0.982，0.986，1.356，0.000，0.000，1.025，2.059，1.025，1.025，0.108，1.497，0.225，0.000，1.545；P均〉0.05）。结论海南汉族健康人群以MICA＊008：01和MICA－A5等位基因频率最高，黎族健康人群为MICA＊002：01和MICA－A4。MICA＊002：01、MICA－A9在海南汉族T1DM患者人群为高频率等位基因，而MICA＊010、MICA－A5和MICA－A6为低频率等位基因。未发现在海南黎族健康人群与T1DM患者人群有明显差异的MICA等位基因。

可手术肺腺癌主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A和B的表达及临床意义

目的检测可手术肺腺癌组织中主要组织相容性复合体－Ⅰ类分子链相关蛋白A和B（MICA/B蛋白）的表达，探讨其临床意义。方法回顾分析郑州人民医院2002年1月至于2003年12月诊治的可手术肺腺癌100例。免疫组织化学染色法检测其MICA/B蛋白的表达，按照免疫组织化学染色评分标准≥5分者为高表达组，〈5分者为低表达组。运用χ2检验分析MICA/B蛋白与患者临床病理特征的关系。Kaplan－Meier生存曲线及Log－rank检验计算MICA/B蛋白表达与可手术肺腺癌总生存期之间的关系。采用Cox回归模型分析各个协变量单一及联合效应。结果MICA/B蛋白在可手术肺腺癌组织中的高表达率为38%（38/100）。MICA/B蛋白表达在EGFR基因突变组中的高表达率显著高于EGFR基因野生组（93.8%比11.8%，P〈0.001），而在患者不同年龄、性别、TNM分期、T分期、组织学分级及淋巴结转移之间差异均无统计学意义。MICA/B蛋白高表达组的总生存期显著短于低表达组（10.4比28.9个月，P＝0.005）。结论 可手术肺腺癌组织中MICA/B蛋白高表达，与EGFR基因突变型及总生存期有密切关系，有可能是可手术肺腺癌患者预后不良的指标。