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鸡MHC Ⅰ类分子的多抗制备及其在不同MD抗性MHC单倍型鸡脾脏中的差异表达 被引量:3
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作者 高彩霞 李行 +5 位作者 杨柳 武永淑 蔡文博 张伟 韩建林 韩凌霞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期93-97,103,共6页
目的制备能检测不同MHC-B单倍型MHC I类蛋白的多抗血清,并对马立克氏病(MD)抗性较强的BW/G3系鸡群(MHC B2单倍型)和敏感性较强的BW/G7系鸡群(B19单倍型)接种马立克氏病毒(MDV)后,利用Western blot技术半定量分析MHC I类蛋白表达量的差... 目的制备能检测不同MHC-B单倍型MHC I类蛋白的多抗血清,并对马立克氏病(MD)抗性较强的BW/G3系鸡群(MHC B2单倍型)和敏感性较强的BW/G7系鸡群(B19单倍型)接种马立克氏病毒(MDV)后,利用Western blot技术半定量分析MHC I类蛋白表达量的差异。方法从BW/G3系鸡脾组织cDNA中PCR扩增BF基因的保守序列第4~8外显子,克隆入原核表达载体pET-30a,构建重组质粒。转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得表达,经SDS-PAGE初步纯化,免疫新西兰兔,制备兔抗血清。以高效价的兔抗血清为一抗,对BW/G3和BW/G7系健康鸡和MDV攻毒后11周的脾组织进行Western blot,利用ImageQuant 5.2软件半定量分析其中MHC Ⅰ类蛋白含量的变化。结果含BF部分基因的重组质粒在大肠杆菌中表达,其特异性兔抗血清能检测到不同MHC-B单倍型鸡的MHC Ⅰ类蛋白。BW/G3和BW/G7系鸡群感染MDV后,MHC Ⅰ类蛋白含量全部上调,正常组和攻毒组中BW/G7系的表达量均极显著高于BW/G3系(P≤0.01,P≤0.001)。结论成功制备了能检测MHC B2、B6和B19单倍型鸡的MHC I类蛋白特异性多抗血清;MDV攻毒后期,抗性鸡BW/G3和敏感鸡BW/G7脾组织中MHC I类蛋白的表达量都发生上调,且易感鸡中的表达量高于抗性鸡,为进一步揭示病毒性肿瘤病的致病机理提供了思路。 展开更多
关键词 mhc Ⅰ类蛋白 兔多抗血清 蛋白差异表达
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帕博利珠单抗联合AP对非小细胞肺癌患者疗效及血清sMICA水平的影响
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作者 徐红利 李君霞 +2 位作者 张佳佳 杨海鹏 陈爽 《分子诊断与治疗杂志》 2024年第7期1255-1258,共4页
目的 分析帕博利珠单抗联合培美曲塞+顺铂(AP)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者疗效及血清可溶性MHC-1类链相关蛋白A(sMICA)水平的影响。方法 根据随机字表法将2019年3月至2022年3月期间河南省胸科医院收治的102例NSCLC患者分为两组,对照组(n=... 目的 分析帕博利珠单抗联合培美曲塞+顺铂(AP)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者疗效及血清可溶性MHC-1类链相关蛋白A(sMICA)水平的影响。方法 根据随机字表法将2019年3月至2022年3月期间河南省胸科医院收治的102例NSCLC患者分为两组,对照组(n=51)采用AP方案;研究组(n=51)采用AP联合帕博利珠单抗;分析两组疗效、血清sMICA水平、生活质量评分、随访1年的生存率和不良反应。结果 研究组缓解率和疾病控制率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清sMICA水平低于治疗前,且研究组血清sMICA水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组生活质量好转率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。随访期间无失访病例,研究组生存率(44/51)显著高于对照组(35/51),差异有统计学意义(χ^(2)=5.631,P<0.05)。两组不良反应比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 帕博利珠单抗联合培美曲塞+顺铂可以提高NSCLC患者疾病控制率,降低血清sMICA水平。 展开更多
关键词 帕博利珠单抗 培美曲塞 顺铂 非小细胞肺癌 可溶性mhc-I类链相关蛋白A
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口腔鳞癌细胞过表达MHC-Ⅰ类链相关蛋白A对自然杀伤细胞与细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性影响的实验研究 被引量:1
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作者 李超 石芳琼 +3 位作者 杨丹 王洁 翦新春 蒋灿华 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期32-35,共4页
目的探讨口腔鳞癌细胞过表达MHC-Ⅰ类链相关蛋白A(MICA)对自然杀伤细胞(NK)与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响。方法通过绘制细胞生长曲线、检测细胞周期、进行平板集落形成率及裸鼠皮下成瘤等方法对稳定转染并过表达MICA的口腔... 目的探讨口腔鳞癌细胞过表达MHC-Ⅰ类链相关蛋白A(MICA)对自然杀伤细胞(NK)与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响。方法通过绘制细胞生长曲线、检测细胞周期、进行平板集落形成率及裸鼠皮下成瘤等方法对稳定转染并过表达MICA的口腔鳞癌细胞株进行生物学特性鉴定。采用乳酸脱氢酶释放法及流式细胞术分析口腔鳞癌细胞过表达MICA对NK与CTL细胞杀伤活性及自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)受体表达的影响。结果口腔鳞癌细胞转染MICA基因后主要生物学特性未发生改变,但能显著增强NK与CTL细胞杀伤活性并上调其表面NKG2D的表达,与未转染及转染空白载体的细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MICA可作为口腔鳞癌免疫基因治疗的潜在靶标,值得进一步研究。 展开更多
关键词 口腔 鳞状细胞癌 mhc-Ⅰ类链相关蛋白A 杀伤活性 基因治疗
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新型示踪MHC-I类分子方法的建立 被引量:3
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作者 李志海 邹丽云 +8 位作者 熊锐华 张晋宇 李景怡 谢谆怡 秦瑶 李青 赵奇 万瑛 林治华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期809-812,共4页
目的采用位点特异性荧光蛋白标记技术建立新型示踪MHC-I类分子的方法,比较TCtag和halotag在体细胞和抗原递呈细胞中示踪MHC-I类分子的优缺点。方法构建H-2Kb-TCtag和H-2Kb-halotag融合蛋白的真核慢病毒表达载体,转染293FT细胞制备病毒,... 目的采用位点特异性荧光蛋白标记技术建立新型示踪MHC-I类分子的方法,比较TCtag和halotag在体细胞和抗原递呈细胞中示踪MHC-I类分子的优缺点。方法构建H-2Kb-TCtag和H-2Kb-halotag融合蛋白的真核慢病毒表达载体,转染293FT细胞制备病毒,将病毒分别感染体细胞293FT和树突状细胞系DC2.4细胞后,TCtag采用染料ReAsH和FlAsH染色,Halotag采用染料HaloTagTMR染色,在激光共聚焦显微镜下观察H-2Kb的分布情况。结果通过激光共聚焦显微镜观察发现:TCtag与染料ReAsH和FlAsH只在293FT细胞内是特异性的结合;Halotag与用染料HaloTagTMR在293FT和DC2.4细胞内都是特异性结合的。结论从结合特异性上来看,Halotag标记MHC I类分子要优于TC-tag。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 mhc-I类分子 Tetracysteine TAG HALOTAG
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非小细胞肺癌血清sMICA、microRNA-99a、DJ-1表达及临床意义
5
作者 卢芳 钱文霞 宣晓峰 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2023年第6期508-512,共5页
目的 分析血清可溶性MHCⅠ类链相关分子A(sMICA)、microRNA-99a、DJ-1蛋白(DJ-1)对非小细胞肺癌(NSCLC)诊断及预后评估价值。方法 收集2019年6月至2022年6月本院收治的NSCLC患者90例(NSCLC组),另选取本院同期健康体检志愿者90例(对照组... 目的 分析血清可溶性MHCⅠ类链相关分子A(sMICA)、microRNA-99a、DJ-1蛋白(DJ-1)对非小细胞肺癌(NSCLC)诊断及预后评估价值。方法 收集2019年6月至2022年6月本院收治的NSCLC患者90例(NSCLC组),另选取本院同期健康体检志愿者90例(对照组)。对患者进行为期6个月随访,随访截止至2023年1月。采用ROC曲线评估sMICA、microRNA-99a、DJ-1对NSCLC诊断价值。采用多元Logistic回归分析影响NSCLC患者预后的关系。结果 NSCLC组sMIC、DJ-1表达水平高于对照组,microRNA-99a表达水平低于对照组(P<0.05);ROC曲线结果显示:sMICA、microRNA-99a、DJ-1对NSCLC诊断AUC值分别为0.742(95%CI:0.642~0.842)、0.759(95%CI:0.660~0.859)、0.789(95%CI:0.698~0.901)。90例患者中预后良好69例,预后不良21例。预后不良者sMIC、DJ-1表达水平高于预后良好组,microRNA-99a表达水平低于预后良好组(P<0.05);预后不良者TNM分期(III-IV期)、低分化占比高于预后良好组(P<0.05);两组在年龄、性别、肿瘤直径、病理类型中比较差异无统计学意义(P>0.05)。经多元Logistic回归分析:临床分期、分化程度、sMICA、microRNA-99a、DJ-1为影响NSCLC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论 相对健康人群,NSCLC患者sMICA、DJ-1水平高,microRNA-99a水平低;三指标水平与患者预后密切相关,通过检测血清三者水平可为患者后续诊疗、预后评估提供参考资料。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 可溶性mhcⅠ类链相关分子A microRNA-99a DJ-1蛋白 诊断 预后
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Selection of Proteins for Human MHC Class Ⅱ Presentation
6
作者 LiJiang OleLund JinquanTan 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2005年第1期49-56,共8页
We investigated the predicted function of proteins eluded from human MHC class Ⅱ molecules.Peptides that are presented by MHC class Ⅱ were obtained from the SYFPEITHI database and the corresponding proteins were fou... We investigated the predicted function of proteins eluded from human MHC class Ⅱ molecules.Peptides that are presented by MHC class Ⅱ were obtained from the SYFPEITHI database and the corresponding proteins were found in the SWISSPROT database.The functions of these proteins were predicted using the protfun server.Our analysis showed that human proteins presented by MHC class Ⅱ molecules are likely to be in the cell envelope,be a receptor or involved in immune responses.Presented proteins from bacteria and virus,on the other hand,are more likely to be involved in regulatory functions,translation,transcription as well as replication.These results can lead to better understanding the autoimmunity and the response to infections.Cellular & Molecular Immunology.2005; 2(1):49-56. 展开更多
关键词 BIOINFORMATICS protein function IMMUNOLOGY mhc class
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NK细胞对不同人肝癌细胞株的杀伤作用 被引量:12
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作者 黎建军 陈诗萍 +7 位作者 古模发 杨炜敏 李永强 王其京 何佳 潘科 赵靖靖 夏建川 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期638-642,共5页
目的:观察自然杀伤(NK)细胞对不同肝癌细胞株的体内外抑瘤作用,并检测肝癌细胞MHC-I类链相关蛋白(MIC蛋白)的表达。方法:抽取志愿者外周血50 mL,分离单个核细胞,置入NK细胞试剂盒行孵化及逐级扩增。计算NK细胞对人白血病细胞株K562及人... 目的:观察自然杀伤(NK)细胞对不同肝癌细胞株的体内外抑瘤作用,并检测肝癌细胞MHC-I类链相关蛋白(MIC蛋白)的表达。方法:抽取志愿者外周血50 mL,分离单个核细胞,置入NK细胞试剂盒行孵化及逐级扩增。计算NK细胞对人白血病细胞株K562及人肝癌细胞株BEL7402、HepG2、SMMC7721的杀伤率。接种建立人肝癌细胞株裸鼠移植瘤,进行NK细胞瘤内及瘤周注射;计算各组裸鼠移植瘤的体积,绘制各组肿瘤生长曲线;处死裸鼠,称瘤重,计算NK细胞对各组肿瘤抑制率。检测人肝癌细胞表面MIC蛋白表达。结果:NK细胞对K562细胞杀伤最强,BEL-7402次之,SMMC-7721细胞株杀伤敏感性最低。裸鼠抑瘤实验结果显示NK细胞对于BEL-7402细胞株的抑瘤效果最好,而对于SMMC-7721细胞株的抑瘤效果较差。BEL-7402及HepG2细胞株表面表达MIC,而SMMC-7721则很少表达。结论:NK细胞对于不同人肝癌细胞株体内外抑瘤作用不同,其差异可能和不同肝癌细胞株MIC的表达有关。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 肝肿瘤 mhc-I类链相关蛋白
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拓扑异构酶抑制剂通过ATM/ATR和NF-κB途径上调乳腺癌细胞MICA/B的表达 被引量:5
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作者 朱燕 石永进 +1 位作者 赵玉亮 朱平 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期318-325,共8页
目的:分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B(major histocompatibility complex classⅠ-related chain A and B,MICA/B)的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法:用荧光定量RT-PC... 目的:分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B(major histocompatibility complex classⅠ-related chain A and B,MICA/B)的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法:用荧光定量RT-PCR法检测化疗药物对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA表达的影响,流式细胞术检测化疗药物对MICA/B表面蛋白表达的作用。加入咖啡因抑制毛细血管扩张性共济失调突变和Rad3相关激酶(ataxia telangiectasia mutated and Rad3-related kinase,ATM/ATR),加入吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pynolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB),观察其是否能够抑制化疗药物中拓扑异构酶抑制剂对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及蛋白的表达。凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测药物是否影响乳腺癌细胞NF-κB与MICA/B启动子区的结合。结果:三种拓扑异构酶抑制剂足叶乙甙、拓扑替康和阿霉素可使乳腺癌MCF-7细胞的MICA和MICB mRNA水平升高。足叶乙甙在浓度为5、20、100μmol/L时,与不加药处理组相比,MICA mRNA水平分别升高到(1.68±0.17)、(2.54±0.25)、(3.42±0.15)倍(P<0.05);MICB mRNA水平分别升高到(1.82±0.24)、(1.56±0.05)、(5.84±0.57)倍(P<0.05)。拓扑替康和阿霉素在特定浓度时也使MCF-7的MICA和MICB mRNA水平显著升高(P<0.05)。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙和拓扑替康处理另一乳腺癌细胞系SK-BR-3后,MICB mRNA的表达也轻度升高(P<0.05)。足叶乙甙和拓扑替康还增加MCF-7细胞表面MICA/B蛋白的表达(P<0.05),且存活和凋亡细胞MICA/B蛋白的表达均增高。用不同浓度的咖啡因处理足叶乙甙损伤的乳腺癌细胞,MICA/B mRNA和蛋白表达均显著降低,当咖啡因浓度为1、5、10 mmol/L时,MICA mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.75±0.25)倍分别降为(0.89±0.05)、(0.81±0.02)、(0.48±0.04)倍(P<0.001),MICB mRNA由(6.85±0.35)倍降为(1.36±0.13)、(0.76±0.06)、(0.56±0.03)倍(P<0.05),MICA/B蛋白表达由(3.42±0.05)倍降为(1.32±0.03)、(1.21±0.06)、(1.14±0.03)倍(P<0.001),表明足叶乙甙对MICA/B的上调作用能够被ATM/ATR抑制剂所抑制。同样,加入不同浓度的NF-κB的强抑制剂PDTC(10、50、100μmol/L),MICA/B mRNA和蛋白的表达均明显受到抑制(P<0.05),提示NF-κB也参与这一过程。EMSA实验显示,MCF-7细胞用足叶乙甙处理后,NF-κB与MICA/B基因启动子区的结合活性增强。结论:拓扑异构酶抑制剂诱导并上调乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及表面蛋白的表达,表明化疗药物有可能增强免疫系统对乳腺癌的识别和杀伤,ATM/ATR和NF-κB途径参与了这一过程。 展开更多
关键词 拓扑异构酶抑制剂 mhcⅠ类链相关分子A/B 毛细血管扩张性共济失调突变蛋白 毛细血管扩张性共济失调Rad3相关激酶 NF-ΚB 乳腺肿瘤
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高免疫原性胶质瘤细胞疫苗体外抗瘤时靶细胞超微结构变化
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作者 郑树法 康德智 +1 位作者 林元相 连葆强 《福建医科大学学报》 2009年第2期110-113,共4页
目的观察高免疫原性人多形性胶质母细胞瘤(GBM)U251细胞疫苗体外诱发产生效应细胞杀伤靶细胞的超微结构变化。方法以500U/mL干扰素-γ(IFN-γ)诱导48h+热43℃休克2h诱导膜型热休克蛋白70(HSP70)及主要组织相容性抗原复合体I类分子(MHC-I... 目的观察高免疫原性人多形性胶质母细胞瘤(GBM)U251细胞疫苗体外诱发产生效应细胞杀伤靶细胞的超微结构变化。方法以500U/mL干扰素-γ(IFN-γ)诱导48h+热43℃休克2h诱导膜型热休克蛋白70(HSP70)及主要组织相容性抗原复合体I类分子(MHC-I)双高表达,经丝裂霉素(MMC)灭活制成高免疫原性细胞疫苗。体外刺激健康捐献者外周血单个核细胞(PBMCs)作为效应细胞(MHC-HSP-CTL),进行肿瘤特异性杀伤试验;MTT比色法检测其杀伤活性;透射电镜观察靶细胞受攻击后情况。结果MHC-HSP-CTL对野生型U251细胞特异性的杀瘤活性明显高于HSP70分子单高表达的细胞疫苗刺激组(HSP-CTL)、MHC-I类分子单高表达的细胞疫苗刺激组(MHC-CTL)以及野生型对照组(W-CTL)(P<0.05),透射电镜显示靶细胞受到攻击后出现不同程度凋亡样坏死和胀亡样坏死,胀亡样坏死细胞在高免疫原性细胞疫苗刺激的效应细胞组较多。结论介导细胞胀亡是高免疫原性即膜型HSP70和MHC-I类分子双高表达疫苗的U251细胞疫苗一种重要主动特异性抗瘤机制。 展开更多
关键词 基因 mhcⅠ类 干扰素Ⅱ型 热休克蛋白质70 神经胶质瘤 细胞系 肿瘤 癌症疫苗 免疫疗 显微镜检查 电子
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丙戊酸钠对肺癌细胞MICA蛋白表达的影响及其信号转导机制 被引量:3
10
作者 梅花 周向东 +1 位作者 陈贵华 蒋幼凡 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期679-683,共5页
目的研究丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)作为组蛋白去乙酰酶抑制剂对肺癌A549细胞人类MHCⅠ类分子链相关基因A(human MHC classⅠchain-related A,MICA)蛋白表达的影响,并初步探讨其信号转导机制。方法使用不同浓度的VPA刺激处于对数... 目的研究丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)作为组蛋白去乙酰酶抑制剂对肺癌A549细胞人类MHCⅠ类分子链相关基因A(human MHC classⅠchain-related A,MICA)蛋白表达的影响,并初步探讨其信号转导机制。方法使用不同浓度的VPA刺激处于对数生长期的肺癌A549细胞,培养24h后使用RT-PCR法检测肺癌A549细胞MICA mRNA水平,Western blot法检测MICA蛋白水平,得出最佳VPA刺激浓度。分别以丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的3条主要通路抑制剂即ERK1/2抑制剂(PD98059)、p38蛋白激酶抑制剂(SB203580)、JNK抑制剂(SP600125)预处理A549细胞,再将VPA依照预定最适浓度分别加入培养24h。使用RTPCR法检测A549细胞MICA mRNA水平,Western blot法检测MICA蛋白水平。使用ELISA法检测上述各组A549细胞培养上清液中分泌型MICA(sMICA)蛋白水平。结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示加入VPA后A549细胞中MICA mRNA转录水平、MICA蛋白水平均显著升高(均P<0.05);使用p38蛋白激酶抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059预处理,均能显著减弱VPA诱导的A549细胞MICA mRNA及蛋白水平的提高(P<0.05);各组细胞培养上清液中sMICA浓度无差异。结论 VPA能增强肺癌A549细胞MICA蛋白的表达,其机制可能与ERK、p38信号通路有关。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 肺癌 人类mhcI类分子链相关基因A 丝裂素活化蛋白激酶
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HER2阳性乳腺癌组织MICA/B高表达延长患者的无病生存期 被引量:4
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作者 李景艳 刘桂举 +2 位作者 梅家转 李瑞君 赵继智 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期177-181,共5页
目的:探讨人表皮生长因子受体2(humman epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性乳腺癌组织中主要组织相容性复合体-Ⅰ类链相关蛋白A和B(MHC class Ⅰ chain-related protein A/B,MICA/B)的表达水平与患者无病生存期(disease-free... 目的:探讨人表皮生长因子受体2(humman epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性乳腺癌组织中主要组织相容性复合体-Ⅰ类链相关蛋白A和B(MHC class Ⅰ chain-related protein A/B,MICA/B)的表达水平与患者无病生存期(disease-free survival,DFS)的关系。方法:收集南方医科大学郑州人民医院2009年1月至2010年6月HER2阳性乳腺癌癌旁组织存档蜡块26例及乳腺癌蜡块100例,免疫组化染色检测癌旁组织及癌组织MICA/B的表达水平,采用Kaplan-Meier生存曲线分析其与患者临床病理特征和DFS的关系。结果:MICA/B在癌旁组织中呈阴性(0/26);乳腺癌组织中MICA/B表达率为92%(92/100),其中高表达为65%(65/100);MICA/B在Ⅰ期的高表达率高于Ⅱ~Ⅲ期(77.55%vs 52.94%,P<0.05),在T1期的高表达率高于T2~T4期(75.00%vs 52.27%,P<0.05);ER、PR阳性(阳性细胞数≥1%)组MICA/B高表达率显著低于ER、PR阴性组(ER:52.38%vs74.14%;PR:51.35%vs 73.02%,均P<0.05)。MICA/B的表达与患者的临床分期、ER、PR的表达及肿瘤大小有关(均P<0.05),与绝经状态、组织学分级及淋巴结转移无关(均P>0.05)。无论靶向治疗组(90.6%vs 72.2%,P<0.05)或非靶向治疗组(78.4%vs58.8%,P<0.05)MICA/B高表达组6年DFS均显著高于低表达组。结论:HER2阳性乳腺癌组织中MICA/B高表达与患者的DFS密切相关,可作为患者预后的潜在预测指标。 展开更多
关键词 mhc Ⅰ类链相关蛋白A/B 人表皮生长因子受体2 乳腺癌 无病生存期
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EGFR靶向抗体融合蛋白激活免疫细胞杀伤肝癌细胞Huh7的研究 被引量:2
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作者 杜志娜 曲韬 尉迟敏 《标记免疫分析与临床》 CAS 2017年第1期88-92,共5页
目的探究靶向表皮生长因子受体(EGFR)的抗体西妥昔单抗(Cetuximab)与MHC-I(major histocompatibility complex-I)相关抗原分子MICB(MHC class I-related chain molecules B)的融合蛋白对肝癌细胞Huh7的杀伤效果。方法通过重叠PCR(polyme... 目的探究靶向表皮生长因子受体(EGFR)的抗体西妥昔单抗(Cetuximab)与MHC-I(major histocompatibility complex-I)相关抗原分子MICB(MHC class I-related chain molecules B)的融合蛋白对肝癌细胞Huh7的杀伤效果。方法通过重叠PCR(polymerase chain reaction)的方法通过柔性肽G4S将西妥昔单抗重链C末端及人MICB胞外区基因连接,构建成工程载体,并通过毕赤酵母进行表达;流式检测融合蛋白对Huh7细胞的结合能力;噻唑蓝(MTT)法检测Huh7细胞的增殖抑制;通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)实验验证融合蛋白是否能激活NK细胞杀伤肿瘤细胞。结果通过基因工程手段和毕赤酵母表达,成功获得融合抗体蛋白,经Western blot鉴定结果说明融合蛋白Cetuximab-MICB表达及装配正确。流式细胞术检测Cetuximab-MICB与肝癌细胞Huh7的结合率为72.8%,与母体西妥昔单抗结合率(75.5%)相当。细胞增殖抑制实验,与PBS组对照相比,西妥昔单抗、融合蛋白组对肝癌细胞Huh7均有抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性。在蛋白浓度为400 nmol/L时,Cetuximab-MICB融合蛋白组抑制率(66.09%)强于西妥昔单抗组(56.54%)。将免疫细胞PBMC(peripheral blood mononuclear cell)/NK92和肿瘤细胞Huh7共孵育,通过检测LDH(lactate dehydrogenase)的释放,发现融合蛋白比西妥昔单抗更有效地介导NK细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤,以PBMC为效应细胞,效靶比为100:1时Huh7细胞裂解率可以达到43.58%,优于西妥昔单抗组(37.77%)。以NK92细胞为效应细胞,效靶比为10:1时Huh7细胞裂解率可以达到61.29%,明显优于西妥昔单抗组(40.54%)。结论采用毕赤酵母表达体系成功构建并表达了Cetuximab-MICB融合蛋白。Cetuximab-MICB融合蛋白具有良好的体外抗肿瘤活性,有效的抑制肿瘤细胞Huh7的增值,并能进一步通过NKG2D途径激活NK细胞加强免疫系统对肿瘤的免疫监视,为抗肿瘤治疗提供了新的思路,有潜在的临床应用前景。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体(EGFR) mhc-I相关抗原分子B 融合抗体 肝癌 增殖 ADCC
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点突变p53抗原肽的预测及其与MHCⅠ类分子的结合 被引量:1
13
作者 黄兰青 罗利群 +2 位作者 李默漪 崔大敷 张友会 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期249-252,共4页
目的从肿瘤抗原的全长氨基酸序列中预测肿瘤抗原肽,据此指导肿瘤肽疫苗的设计和制备。方法采用基序(consensusmotif)预测法,经计算机PEPMOTIF软件预测含点突变的小鼠p53蛋白肽,并建立一个计分系统来估测... 目的从肿瘤抗原的全长氨基酸序列中预测肿瘤抗原肽,据此指导肿瘤肽疫苗的设计和制备。方法采用基序(consensusmotif)预测法,经计算机PEPMOTIF软件预测含点突变的小鼠p53蛋白肽,并建立一个计分系统来估测预测肽与MHCⅠ类分子结合的可能性,进一步通过MHCⅠ类分子-肽结合试验和MHCⅠ类分子-肽结合稳定性试验检测它们与MHCⅠ类分子的结合力和亲和力。结果预测了3条肽,其中mp53P132F(LNKLFFQL)能与H-2Kb结合而不与H-2Db结合;mp53P246S(MGGMNRSPIL)和mp53P270C(GRDSFEVCV)既不与H-2Kb结合也不与H-2Db结合。肽与MHCⅠ类分子之间的结合与用计分系统计算的肽积分高低有关,即高分值的肽能与相应的MHCⅠ类分子结合。结论计算机PEPMOTIF软件配合肽计分是简便有效的MHCⅠ类分子结合肽预测法。 展开更多
关键词 点突变 P53蛋白 mhcⅠ类分子 肿瘤免疫疗法
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食管癌组织中主要组织相容性复合体-I类分子链相关蛋白A/B表达及其临床意义 被引量:2
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作者 梅家转 赵继智 +2 位作者 杨广英 高方方 刘桂举 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期745-747,共3页
目的研究食管癌组织中主要组织相容性复合体-I类分子链相关蛋白A/B(MICA/B)基因蛋白的表达情况,探讨其与食管癌患者临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测40例食管癌和癌旁组织中MICA/B蛋白的表达情况,并分析其... 目的研究食管癌组织中主要组织相容性复合体-I类分子链相关蛋白A/B(MICA/B)基因蛋白的表达情况,探讨其与食管癌患者临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测40例食管癌和癌旁组织中MICA/B蛋白的表达情况,并分析其与食管癌患者临床病理特征的关系。结果MICA/B蛋白在细胞质和细胞膜中呈阳性表达,MICA/B蛋白在食管癌组织中的阳性表达率为75.0%(30/40),在癌旁组织中呈阴性,二者比较差异有统计学意义(P〈0.001)。MICA/B蛋白表达与食管癌组织学分级有关(P〈0.05),与食管癌患者的年龄、性别、分期、浸润深度和淋巴结转移无关(均P〉0.05)。结论MICA/B蛋白表达可能在食管癌的发生发展中起重要作用,并可作为诊断食管癌的分子标志物。 展开更多
关键词 食管肿瘤 基因表达 病理学 临床 主要组织相容性复合体-I类分子链相关蛋白A/B
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MICA/B蛋白在不同宫颈病变组织中的表达及意义
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作者 王振芳 马泽坤 +2 位作者 郑博源 祁光伟 阿仙姑·哈斯木 《现代生物医学进展》 CAS 2020年第12期2229-2233,共5页
目的:探讨主要组织相容性复合物I类相关蛋白A/B(MICA/B)在不同宫颈病变组织及宫颈细胞系中的表达及定位。方法:采用免疫组织化学SP法检测宫颈炎症组织、高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)及宫颈... 目的:探讨主要组织相容性复合物I类相关蛋白A/B(MICA/B)在不同宫颈病变组织及宫颈细胞系中的表达及定位。方法:采用免疫组织化学SP法检测宫颈炎症组织、高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)及宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)组织中MICA/B蛋白的表达情况。采用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术结合的方法研究3种宫颈癌细胞系C33a(HPV-)、Siha(HPV16+)、Hela(HPV18+)及正常宫颈上皮细胞系H8中MICA/B的表达和定位。结果:MICA/B蛋白主要表达定位于细胞浆,部分细胞核,在宫颈鳞癌组织中阳性表达率(83.3%、81.8%)高于宫颈炎症组织(39.3%、44.0%),差异具有统计学意义(均有P<0.001);MICA蛋白在HSIL组织的阳性表达率(81.8%)高于宫颈炎症组织(39.3%),差异具有统计学意义(P=0.002);与分化程度、临床分期、淋巴结转移等临床病理参数之间比较无统计学差异(P>0.05)。结论:MICA蛋白随着宫颈组织病变的加重阳性表达率逐渐增高,MICB蛋白在宫颈癌组织的表达高于宫颈炎症组织。提示MICA/B蛋白可为宫颈癌的诊断及靶向治疗提供新方向。 展开更多
关键词 宫颈鳞状细胞癌 MICA蛋白 MICB蛋白
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