白来航鸡MHC-Ⅰ重链基因克隆与序列分析

参照GenBank发表的鸡MHC-Ⅰ重链（BF2）基因序列,设计并合成1对引物,无菌采取纯系来航SPF鸡抗凝静脉血,直接提取总RNA,采用RT-PCR技术,PCR扩增BF2基因,并进行克隆和序列测定。测序结果表明,获得了来航鸡BF2基因,其大小为1 035 bp,包含一个完整阅读框,共编码345个氨基酸。与GenBank上鸡BF2基因序列进行比较,其核苷酸同源性在93.0%~97.6%之间,氨基酸同源性在83.2%~97.1%之间。来航鸡与人和其他种动物的MHC-Ⅰ重链基因核苷酸同源性在12.9%~83.6%之间。

SLA-Ⅰ重链分子的表达及结构分析

为研究SLA-Ⅰ重链分子在pMAL-p2X载体表达条件,从培养基pH值、温度、菌体密度、IPTG浓度、时间5个条件设计了优化条件的实验.SDS-PAGE筛选出在pMAL-p2X系统上表达SLA-Ⅰ重链分子的最佳条件,并运用EXPASY服务器上的SOPMA法对SLA-Ⅰ重链分子和HLA-A2进行2级结构的预测,同时同源模建其3级结构.结果表明:pH8.0,37℃,0.2 mmol/LIPTG,培养5 h,D600 nm=0.8是SLA-Ⅰ重链分子蛋白表达的最佳条件.2级结构预测和分析发现,猪和人MHCⅠ类分子重链2级结构成分上非常相似,其同源率远远大于氨基酸的同源率;同源模建发现,猪和人、小鼠的MHCⅠ类分子3级结构非常相似.

人脐血间充质干细胞诱导分化成心肌细胞的研究

目的探讨体外脐血间充质干细胞诱导分化成心肌细胞的可行性和最佳方法。方法收集获知情同意的健康产妇脐血细胞,分离单个核细胞,从中进一步分离间充质干细胞,传代培养至第3代,应用免疫荧光流式细胞仪标记间充质干细胞特异性抗原CD34、CD44和CD90。5-氮胞苷诱导分化4周后,免疫组织化学染色和RT-PCR法分别检测心肌细胞标记物肌钙蛋白Ⅰ、转录因子GATA 4和β-肌球蛋白重链。结果在第3代细胞中,可检测到CD44、CD90的表达,未检测到CD34的表达。脐血间充质干细胞经5-氮胞苷诱导分化后,呈现成纤维细胞样形态和克隆增殖特点。免疫组织化学染色和RT-PCR可检测到肌钙蛋白Ⅰ,GATA 4和β-肌球蛋白重链的表达。结论脐血间充质干细胞能够被诱导分化成心肌样细胞,可成为干细胞移植的细胞来源。

miRNA208a对扩张型心肌病模型大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨miRNA208a对扩张型心肌病模型大鼠心肌纤维化的影响。方法取30只成年Wistar大鼠,采用连续腹腔注射阿霉素法制备扩张型心肌病模型,按照随机数字表法将其随机分为mut-miRNA208a组、an⁃tagomiRNA208a组、pre-miRNA208a组,每组10只。分别转染含突变miRNA208a、抑制miRNA208a表达、过表达miR⁃NA208a的腺相关病毒质粒。转染成功72 h后,应用动物心脏彩超检测各组大鼠心功能相关指标:心室舒张末期内径(LVEDD)、心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)。计算心脏指数(HWI);检测各组大鼠心肌组织中内皮素(ET)、β心肌肌球蛋白重链(MHC-β)、胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)的表达水平。结果三组大鼠HWI、LVEDD、LVESD、LVEF,ET、MHC-β、COL-ⅠRNA及蛋白表达比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与mut-miRNA208a组、pre-miRNA208a组相比,antagomiRNA208a组大鼠心功能好转,心肌组织中ET、βMHC、COL-Ⅰ表达下调,心肌间质纤维化程度明显减轻。结论miRNA208a可通过作用于其靶标ET、MHC-β促进COL-Ⅰ高表达在扩张型心肌病心肌纤维化的发生发展过程中起到重要作用。